如何避免核酸假陽性結(jié)果判斷

1、如何避免核酸假陽性結(jié)果判斷概述新冠肺炎疫情爆發(fā)以來，核酸檢測成為診斷新型冠狀病毒肺炎 的主要依據(jù)，如何保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，需要從標(biāo)本采集到檢測的 每一個環(huán)節(jié)，需要按照流程進(jìn)行嚴(yán)格的操作，保證檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性, 避免假陽性的出現(xiàn)。原因分析核酸檢測是病原學(xué)檢測的一個金標(biāo)準(zhǔn)，影響檢測結(jié)果影響因素 很多，檢驗前，檢驗中，檢驗后質(zhì)量控制很關(guān)鍵。如何把控每一 個環(huán)節(jié)，需要每一個參與核酸檢測醫(yī)務(wù)人員都需要按照操作規(guī)范 完成。核酸檢測假陽性可以將原因分以下幾種情況：檢測前：主要包括采樣環(huán)境的準(zhǔn)備、采集人員防護(hù)要求、標(biāo)本 采集留取，轉(zhuǎn)運等，每一個環(huán)節(jié)出問題都會影響檢驗結(jié)果的質(zhì)量。檢驗中：實驗室環(huán)清潔消毒、檢驗

2、人員操作規(guī)程、試劑的準(zhǔn)確 性等都需要按照規(guī)范進(jìn)行操作。檢驗后：從事核酸檢測人員資質(zhì)、核酸報告的研判以及核酸報 告的審核、以及標(biāo)本的無害化處理、實驗室的終末消毒等。應(yīng)對措施01采集環(huán)境要求采樣點應(yīng)當(dāng)為獨立空間，具備通風(fēng)條件，內(nèi)部劃分相應(yīng)的清潔區(qū)和污 染區(qū)，配備手衛(wèi)生設(shè)施或裝置。采樣點需設(shè)立清晰的指引標(biāo)識，并明 確采樣流程和注意事項。設(shè)立獨立的等候區(qū)域，盡可能保證人員單向 流動，落實米線間隔要求，嚴(yán)控人員密度。02采樣防護(hù)要求采樣人員防護(hù)裝備要求：N95及以上防護(hù)口罩、護(hù)目鏡、防護(hù)服、 乳膠手套、防水靴套；如果接觸患者血液、體液、分泌物或排泄物， 戴雙層乳膠手套；手套被污染時，及時更換外層乳膠手套

3、。每采一個 人應(yīng)當(dāng)進(jìn)行嚴(yán)格手消毒或更換手套。03標(biāo)本采集肛拭子就是進(jìn)入菊花的拭子，需插入肛門35cm后旋轉(zhuǎn)、涂擦 來收集直腸內(nèi)樣本。04標(biāo)本轉(zhuǎn)運1、標(biāo)本包裝。所有標(biāo)本應(yīng)當(dāng)放在大小適合的帶螺旋蓋內(nèi)有墊圈、耐 冷凍的標(biāo)本采集管里，擰緊。容器外注明標(biāo)本編號、種類、姓名及采 樣日期。將密閉后的標(biāo)本放入大小合適的塑料袋內(nèi)密封，每袋裝一份 標(biāo)本。2、標(biāo)本送檢。標(biāo)本采集后室溫放置不超過4小時，應(yīng)在24h內(nèi)送 到實瞼室。如果需要長途運輸標(biāo)本，應(yīng)采用干冰等制冷方式進(jìn)行保存, 嚴(yán)格按照相關(guān)規(guī)定包裝運輸。3、標(biāo)本接收。標(biāo)本接收人員的個人防護(hù)按采樣人員防護(hù)裝備執(zhí)行。 標(biāo)本運送人員和接收人員對標(biāo)本進(jìn)行雙簽收。4、標(biāo)本保

4、存。用于病毒分離和核酸檢測的標(biāo)本應(yīng)當(dāng)盡快進(jìn)行檢測， 能在24小時內(nèi)檢測的標(biāo)本可置于4P保存;24小時內(nèi)無法檢測的標(biāo) 本則應(yīng)置于-70P或以下保存（如無70P保存條件，則于-20P冰箱 暫存）。應(yīng)當(dāng)設(shè)立專庫或?qū)９駟为毐４鏄?biāo)本。標(biāo)本運送期間避免反復(fù) 凍融。05實驗室清潔消毒使用0.2%含氯消毒劑或75%酒精進(jìn)行桌面、臺面及地面消毒。消毒 液需每天新鮮配制，不超過24小時。06實驗室人員要求實驗室檢測技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)具備相關(guān)專業(yè)的大專以上學(xué)歷或具有 中級及以上專業(yè)技術(shù)職務(wù)任職資格，并有2年以上的實驗室工作經(jīng)歷 和基因檢驗相關(guān)培訓(xùn)合格證書。實驗室配備的工作人員應(yīng)當(dāng)與所開展 檢測項目及標(biāo)本量相適宜，以保證及

5、時、熟練地進(jìn)行實驗和報告結(jié)果, 保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。07試劑的準(zhǔn)確性所有市面上使用的檢測試劑必須由國家食品藥品監(jiān)督管理局審 批，才能用于臨床診斷使用，截止2021年2月5日國家藥品監(jiān)督管 理局網(wǎng)站顯示關(guān)于核酸檢測試劑盒和相關(guān)設(shè)備。id好新市的蜀椅4試劑應(yīng)為申IL抵期中央必對疸情工作婀小組和國W院期既控機制郃奢.磔SJ3奇勒愴測M劑等位儲濟(jì)拄產(chǎn)品總懸率就作為用愛任務(wù).1月20 日同工口皿念審批.1月220遮京8個產(chǎn)&R人應(yīng)急審批.4無后即發(fā)席4個新點痘君核修檢測產(chǎn)肝上市.石力支痔了疫儂5控初田工作需要.20204共世;登54個新無會5 松冽期y （25個核國膠測試劑，加個抗體吩褥忒劑，3個

6、抗瓜嗡Ig劑）,R中包括$個核酸供逆松測F品,形成了完期松嚼技術(shù)體系,產(chǎn)能達(dá)到2401.8萬人份，天,為 常有化夜情防按工作提供了百力伊陽.學(xué)克現(xiàn)的理在比京國次新雙膝炎藥品天療需WV給平臺引比精劉14用在這次©情防技中切呈了十分關(guān)粒）作用.胡卜，國或?qū) 向正it推了起因濾停發(fā).核惚愴泄0呼&麗蹄凈牝蕓*2。個僅需&各、1個以件和3個敷用產(chǎn)品.為JJ融相慎防控顯休戰(zhàn).阻擊贊奏于力,陶關(guān)時港產(chǎn)品打表Q 應(yīng)當(dāng)選擇國家藥品監(jiān)督管理部門批準(zhǔn)的試劑，并在選擇標(biāo)本采樣 管和核酸提取試劑時，使用試劑盒說明書上建議的配套標(biāo)本采樣 管和提取試劑。常規(guī)核酸檢測與基因測序?qū)Ρ瘸Ｒ?guī)核酸檢測試

7、法基因測序法普及度（較高一c較低適用情形特殊技能大范圍快速檢測小范圍驗證確認(rèn)全序列測定，與數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對，監(jiān)測病毒是否變異08輔助性材料PCR實驗室的輔料指的是PCR實驗中常用的一些輔助試劑和耗 材，比如采樣管、拭子、離心管、PCR管、吸頭、移液器、無核 酸酶水和試管架等。1）表面核酸污染：用沾濕的拭子擦拭上述物品的外表面，然后浸泡到純水中10mi” 吸取純水作為模板進(jìn)行擴增，qPCR無寸增為合格.（2）移液器內(nèi)腔核酷污染：對于常用的移液器的內(nèi)部.可使用無濾芯的吸頭在陰性純水中吹吸10次后，吸取純水作為模板進(jìn)行擴增，qPCR無擴增為合格（3）表明細(xì)菌污染：用沾濕的無菌拭子攥掃:上述物品的外表面

8、，劃瓊脂平板，每個平板 的菌落數(shù)不應(yīng)超過一定案量我也不英定多少合適，由于不要求元茵操作一定會有線 E,但是也不應(yīng)該太多）.09實驗室分區(qū)原則上開展新冠病毒核酸檢測的實驗室應(yīng)當(dāng)設(shè)置以下區(qū)域：試劑 儲存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴增和產(chǎn)物分析區(qū)。這3個區(qū)域在物理 空間上應(yīng)當(dāng)是完全柜互獨立的，不能有空氣的直接相通。各區(qū)的功能 是1 .試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)：貯存試劑的制備、試劑的分裝和擴增反應(yīng)混合 液的制備，以及離心管、吸頭等消耗品的貯存和準(zhǔn)備。2 .標(biāo)本制備區(qū)：轉(zhuǎn)運桶的開啟、標(biāo)本的滅活，核酸提取及其加入 至擴增反應(yīng)管等。10檢測報告的出具和審核核酸檢測結(jié)果需要有檢驗者和審核者雙人進(jìn)行審核，并對檢驗結(jié)果進(jìn)行綜

9、合判斷，避免出現(xiàn)錯誤結(jié)果，只有雙人核驗才能保證檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，同時上傳相應(yīng)的網(wǎng)絡(luò)信息平臺（檢測機構(gòu)查詢結(jié)果或者屬地指定的核酸查詢機構(gòu)）。11實驗室終末消毒處理1.實驗室空氣清潔。實驗室每次檢測完畢后，可采用房間定和/或可移動紫外燈進(jìn)行紫外照射2小時以上。必要時可采用核酸清除劑等試劑清除實驗室殘留核酸。2、工作臺面清潔。每天實驗后，使用0.2%含氯消毒劑或 75%酒精進(jìn)行臺面、地面清潔。3.生物安全柜消毒。實驗使用后的耗材廢棄物放入醫(yī)療廢 物垃圾袋中，包扎后使用02%含有效氯消毒液或75%酒精噴灑 消毒其外表面。手消毒后將垃圾袋帶出生物安全柜放入實驗室廢 棄物轉(zhuǎn)運袋中。試管架、實驗臺面、移液器

10、等使用75%酒精進(jìn)行 擦拭。隨后關(guān)閉生物安全柜，紫外燈照射30分鐘。4、轉(zhuǎn)運容器消毒。轉(zhuǎn)運及存放標(biāo)本的容器使用前后需使用 0.2%含氯消毒劑或75%酒精進(jìn)行擦拭或噴灑消毒。5.塑料或有機玻璃材質(zhì)物品清潔：使用0.2%含氯消毒劑或過氧 乙酸或過氧化氫擦拭或噴灑。12標(biāo)本無害化處理標(biāo)本進(jìn)行檢驗后需要按照規(guī)定進(jìn)行無害化處理，避免因操作不當(dāng)，導(dǎo) 致標(biāo)本的泄露，導(dǎo)致疫情發(fā)生或者感染病例出現(xiàn)。PCR污染的主要原因中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院檢驗醫(yī)學(xué)科龍澤（化名）博士告訴丁香園，在新冠病毒核酸檢測中，不合格樣本通常是由于采樣問題和采樣用具問題導(dǎo)致的。工外源核酸污染:由于PCR的靈敏度非常高,理論上一個核酸分子的污染都

11、有可能引起結(jié)果的假陽性，因此PCR標(biāo)本采集最好使用無菌、無核酶的一次性器材,取材必須嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作,并小心防止混入操作者或受檢者的毛發(fā)、皮屑等。密封運輸和保存，不能在擴增區(qū)域進(jìn)行標(biāo)本的采集和處理，防止PCR產(chǎn)物的污染。Z靶基因的降解:情況下，無菌采集的DNA樣本穩(wěn)定性較好,在室溫下放置8h仍不影晌檢驗，但如果操作不當(dāng)、抽血容器不 清潔、放置時間過長或有污染,DNA鏈有可能發(fā)生斷裂,使長 片段的擴增變得困難。靶基因降解對于RNA樣品影響更為嚴(yán) 重，由于環(huán)境中大量RNA酶的存在,若樣品保存、運輸條件不 佳或存放時間過長，模板RNA非常容易降解，造成假陰性。3. PCR抑制物:反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)和PCR反

12、應(yīng)均為酶促反應(yīng),任何可能抑制這些反應(yīng)的物質(zhì)都會影響檢驗的結(jié)果。PCR污染的處理 1、標(biāo)本污染生物安全柜的操作臺造成局限污染時：立即用吸水紙 覆蓋，并使用0.55%含氯消毒劑進(jìn)行噴灑消毒。消毒液需要現(xiàn)用 現(xiàn)配，24小時內(nèi)使用。2、標(biāo)本傾覆造成實驗室污染時：保持實驗室空間密閉，避免污染 物擴散。立即使用潤濕有0.55%含氯消毒劑的毛巾覆蓋污染區(qū)。 必要時（如大量溢撒時）可用過氧乙酸加熱熏蒸實驗室，劑量為 2g/m3,熏蒸過夜；或20g/L過氧乙酸消毒液用氣溶膠噴霧器噴霧, 用量8ml/m3,作用12小時；必要時或用高錦酸鉀-甲醛熏蒸： 高鎰酸鉀8g/m3,放入耐熱耐腐蝕容器（陶罐或玻璃容器），后 加入甲醛（40%） 10ml/m3,熏蒸4小時以上。熏蒸時室內(nèi)濕度 60% 80%。3、清理污染物時嚴(yán)格遵循活病毒生物安全操作要求，采用壓力蒸 汽