藍(lán)玉簪顆粒治療小鼠慢性支氣管炎作用機(jī)理的研究

1、藍(lán)玉簪顆粒治療小鼠慢性支氣管炎作用機(jī)理的研究         【摘要】  目的： 觀察藍(lán)玉簪顆粒治療實(shí)驗(yàn)性小鼠慢性支氣管炎的作用. 方法: 60只雌性昆明種小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、慢性支氣管肺炎氨水（NH3）模型組、藍(lán)玉簪顆粒高、中、低劑量治療組、復(fù)方氣管炎片治療組. 除正常對(duì)照組外，各組昆明種小鼠在YLS8A多功能誘咳引喘儀中定時(shí)給予氨水霧化吸入，共30 d，誘導(dǎo)慢性支氣管炎模型. 第31日起，對(duì)照組小鼠及NH3模型組動(dòng)物給予生理鹽水灌胃，其余各組給予相應(yīng)的藥物進(jìn)行治療，1次/d，共15 d. 治療結(jié)束后，

2、檢測(cè)各組小鼠肺組織超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛(MDA)水平，應(yīng)用HE染色觀察各組小鼠肺組織病理學(xué)改變. 結(jié)果: 藍(lán)玉簪顆粒組與慢性支氣管肺炎NH3模型組相比，肺勻漿中MDA含量下降，肺勻漿SOD的含量上升，變化程度與用藥量呈量效關(guān)系；HE染色觀察到藍(lán)玉簪顆粒治療后慢性支氣管炎損傷程度改善. 結(jié)論： 藍(lán)玉簪顆粒具有治療NH3誘導(dǎo)慢性支氣管炎的治療作用，其機(jī)理是藍(lán)玉簪顆?？蓪?duì)抗氧化損傷，增強(qiáng)機(jī)體抗氧化酶的活力，調(diào)節(jié)氧化抗氧化平衡，從而治療慢性支氣管炎. 【關(guān)鍵詞】  藍(lán)玉簪龍膽 支氣管炎 慢性 小鼠 慢性超氧化物歧化酶 丙二醛0引言  藍(lán)玉簪龍膽是龍膽科龍膽屬植物藍(lán)玉簪龍

3、膽(Gentiana Veitchiorum Hemsl)的干燥地上部分,晶珠本草記載龍膽花解毒治各種毒癥，性味苦、寒無(wú)毒,主治咳嗽、氣管炎、咽喉腫疼等，屬藏藥榜間類1. 榜間類均屬高山型植物，用法獨(dú)特，療效確實(shí)，有文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)藏成藥十味龍膽花顆粒在臨床應(yīng)用中對(duì)慢性支氣管炎、兒童肺部感染有良好的療效2-3. 我們?cè)缙诘难芯匡@示，藍(lán)玉簪龍膽花水煎液可以提高鼠肺組織中的SOD活性，改善氧化/抗氧化平衡，抑制膠原沉積，保護(hù)肺組織免受損傷. 體內(nèi)氧化抗氧化平衡失調(diào)對(duì)慢性支氣管炎的形成和發(fā)展具有重要的作用4，是慢性支氣管炎的重要致病機(jī)理之一，抗氧化治療對(duì)于減輕肺部的慢性損傷，阻止肺功能的下降和延緩病情的發(fā)展

4、具有重要的意義5. 本實(shí)驗(yàn)采用藏藥藍(lán)玉簪龍膽顆粒對(duì)慢性支氣管炎的治療作用進(jìn)行研究，初步討論其可能的作用機(jī)理.1材料和方法1.1材料二級(jí)雌性昆明種小鼠60只，體質(zhì)量（20±2）g，由本校動(dòng)物中心提供. YIS8A多功能誘咳引喘儀購(gòu)自山東醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站；氨水（NH3）購(gòu)自西安三浦精細(xì)化工廠，（批號(hào)070622）；復(fù)方氣管炎片由陜西香菊制藥股份有限公司生產(chǎn)（批號(hào)：Z20026876）；藍(lán)玉簪顆粒由第四軍醫(yī)大學(xué)第三附屬醫(yī)院藥劑科研制（批號(hào)2005005）；超氧化物歧化酶（SOD）,丙二醛（MDA）試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所（批號(hào)分別20071220，20071101）.1.2方法統(tǒng)

5、計(jì)學(xué)處理： 計(jì)量數(shù)據(jù)用x±s表示，采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行處理. 組間比較采用方差分析及LSDt檢驗(yàn).         2結(jié)果2.1小鼠肺組織病理學(xué)變化對(duì)照組小鼠支氣管，細(xì)支氣管纖毛柱狀上皮基本正常. NH3模型組小鼠支氣管粘膜上皮細(xì)胞的纖毛發(fā)生粘連、倒伏、脫失，上皮細(xì)胞空泡變性、壞死、增生、較大支氣管上皮細(xì)胞可見(jiàn)變性、脫落和杯狀細(xì)胞增生. 細(xì)支氣管皺縮，周圍可見(jiàn)單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞浸潤(rùn). 氣管腔內(nèi)可見(jiàn)大量漿液滲出物，部分區(qū)域肺泡隔斷裂形成肺大泡，肺間質(zhì)血管擴(kuò)張淤血. 藍(lán)玉簪顆粒高劑量治療小鼠大

6、支氣管，細(xì)支氣管纖毛柱狀上皮基本正常, 纖毛上皮細(xì)胞未見(jiàn)明顯變性、壞死、脫落、杯狀上皮細(xì)胞增生等病理變化，未見(jiàn)漿液滲出物；細(xì)支氣管無(wú)痙攣改變. 中劑量組小鼠氣管腔內(nèi)可見(jiàn)少量滲出物，纖毛柱狀上皮以及杯狀細(xì)胞可見(jiàn)輕度增生, 管壁可見(jiàn)少量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn). 低劑量組小鼠大支氣管纖毛柱狀上皮以及杯狀細(xì)胞可見(jiàn)增生, 管壁可見(jiàn)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，管腔內(nèi)可見(jiàn)較多漿液滲出物，肺邊緣處肺氣腫明顯輕于模型對(duì)照組小鼠. 復(fù)方氣管炎片治療組小鼠肺組織的病理變化和藍(lán)玉簪顆粒高劑量治療組相似(圖1).2.2咳嗽次數(shù)觀察末次給藥后觀察3 min內(nèi)咳嗽次數(shù)，共觀察3次，每次間隔2 h. 若出現(xiàn)3次以上的典型咳嗽動(dòng)作（腹肌收縮或縮胸，同

7、時(shí)張大嘴，有時(shí)有咳嗽聲）算作“咳嗽”動(dòng)物. 如沒(méi)有則作“無(wú)咳嗽”動(dòng)物9. 給藥后統(tǒng)計(jì)咳嗽次數(shù), 公式為抑制率=(模型組咳嗽次數(shù)-給藥組咳嗽次數(shù))/模型組咳嗽次數(shù)，計(jì)算抑制率(表1). 藍(lán)玉簪顆粒三個(gè)劑量組均有止咳的效用，這種效用與用藥的劑量成正比，高劑量組效果最好，優(yōu)于臨床常用的復(fù)方氣管炎片. 表1對(duì)NH3所致小白鼠咳嗽的影響（略）2.3肺組織勻漿中SOD,MDA含量的變化模型組中SOD活力低于對(duì)照組（P0.05），MDA含量高于對(duì)照組. 藍(lán)玉簪顆粒高劑量治療組SOD活力高于模型組（P0.05），與對(duì)照組沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；MDA含量低于模型組（P0.05）和對(duì)照組（P0.05）. 中劑量及低劑量

8、治療組SOD活力高于模型組（P0.05）；MDA含量低于模型組（P0.05）和對(duì)照組（P0.05）. 復(fù)方氣管炎片治療組SOD活性高于模型組（P0.05）；MDA含量低于模型組和對(duì)照組（P0.05）. 藍(lán)玉簪高劑量組可將受到損傷的SOD活性恢復(fù)接近正常，并將MDA水平降至正常水平之下，中、低劑量組也有此種效應(yīng)，但均略于高劑量組；復(fù)方氣管炎片也具有此種作用，但略遜于藍(lán)玉簪高劑量組（表2）. 表2肺組織勻漿中SOD,MDA含量的變化 （略）3討論文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)，慢性支管炎已成為誘導(dǎo)肺癌的重要因素10. 本實(shí)驗(yàn)參照陳奇6方法并加以改進(jìn). 實(shí)驗(yàn)中模型小鼠呈現(xiàn)煩躁不安，頻繁跳動(dòng)，咳嗽樣動(dòng)作較多等反應(yīng). 氨水刺

9、激約1 wk后，小鼠活動(dòng)能力明顯降低，有多只小鼠出現(xiàn)間斷性咳嗽，消瘦,毛發(fā)灰白稀疏、干枯蓬松，納差，大便質(zhì)黏等特征. 造模30 d，模型組小鼠肺支氣管黏膜結(jié)構(gòu)不完整，管壁形態(tài)亦發(fā)生改變，上皮細(xì)胞大量脫落，變性壞死，支氣管管腔出現(xiàn)漿液滲出、黏膜層出現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn),較多肺泡壁充血水腫，細(xì)支氣管皺縮，小靜脈擴(kuò)張并有瘀血；表明模型復(fù)制成功. 藍(lán)玉簪顆粒高劑量治療后小鼠咳嗽次數(shù)明顯減少；肺大支氣管纖毛柱狀上皮細(xì)胞、細(xì)支氣管黏膜上皮細(xì)胞病理改變和均較模型動(dòng)物明顯減輕.氧自由基是機(jī)體正常代謝時(shí)產(chǎn)生的有極強(qiáng)氧化能力的活性原子或基團(tuán)，氧自由基攻擊膜結(jié)構(gòu)會(huì)使細(xì)胞組織結(jié)構(gòu)和功能均遭到破壞5,  SOD活力

10、降低和過(guò)氧化物MDA的堆積，氧化抗氧化的平衡失調(diào)，造成小鼠呼吸器官的氧化損傷，發(fā)生組織形態(tài)學(xué)的慢支病變；藍(lán)玉簪顆粒治療各劑量組小鼠肺組織SOD的生物活性明顯增強(qiáng). 并抑制體內(nèi)的脂質(zhì)過(guò)氧化，促進(jìn)還原反應(yīng)的發(fā)生，從而起到抑制急性和慢性炎癥,減輕氨水所造成的損傷的作用.實(shí)驗(yàn)研究初步表明慢性支氣管小鼠經(jīng)過(guò)藍(lán)玉簪顆粒治療可得到明顯改善. 其機(jī)理是藍(lán)玉簪顆粒能升高慢支小鼠肺組織SOD的活力水平,抑制MDA的生成,從而調(diào)節(jié)體內(nèi)氧化與抗氧化平衡紊亂,對(duì)持久的炎性物質(zhì)（NH3）所引起的慢性炎癥具有治療作用. 在慢性炎癥的發(fā)生過(guò)程中，多種炎性因子均參與反應(yīng)，藍(lán)玉簪顆粒對(duì)抗炎性物質(zhì)具體的機(jī)制還有待進(jìn)一步研究.【參考

11、文獻(xiàn)】  1馬俊,趙汝能. 甘肅龍膽科藏藥初步調(diào)查J. 甘肅中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),1990,7(2):18-20. 2朱啟上,彭莉君,劉艷. 十味龍膽花顆粒治療慢性支氣管炎急性發(fā)作36例J. 中國(guó)新藥雜志，2003,12(3):214-216.3張京濱. 十味龍膽花顆粒治療兒童肺部感染J. 河南醫(yī)藥信息,2003,24(1):21.4Huang Y, Li J, Cao Q, et al. Antioxidative effect of triterpene acids of Eriobotrya japonica(Thunb) Lindl leaf in chronic bronchitis ratsJ. Life Sci,2006,78:2749-2757.5劉麗華. 慢性支氣管炎慢性阻塞性肺氣腫及肺源性心臟病急性發(fā)作期血清過(guò)氧化脂檢測(cè)的意義J. 安徽醫(yī)學(xué),1994,15(2):5-6. 6陳奇. 中藥藥效研究思路與方法M. 北京:人