探索對支原體肺炎敏感的實驗室診斷方法

1、探索對支原體肺炎敏感的實驗室診斷方法         【摘要】  目的 探討肺炎支原體（MP）咽拭子快速液體培養(yǎng)法、咽拭子聚合酶鏈反應（PCR）法和血清MP被動凝集法（MP-Ab）等方法在兒童MP感染診斷治療過程中的敏感性。方法 采用3種MP檢測法對362例臨床擬診為呼吸道（非細菌性）感染的患兒的咽拭子和血清標本進行配對研究，每個患兒取咽拭子做快速培養(yǎng)和PCR，同時取血清做MP-Ab檢測，對3種方法的檢測結果與臨床診斷治療病例進行回顧性分析。結果 回顧臨床病例診斷MP感染患兒152例。MP快速培養(yǎng)法檢出陽

2、性78例，陽性率為51.3%，病程為（4.5±2.6）天；PCR法檢測出陽性103例，陽性率為67.8%，病程為（6.2±3.5）天；MP-Ab法檢測出陽性127例，陽性率83.5%，病程（8.1±4.5）天。結論 3種MP檢測法的敏感性與病程有相關性，臨床醫(yī)生應根據(jù)患兒病程選取檢測方法，以提高陽性檢出率和敏感性。 【關鍵詞】  肺炎支原體；快速培養(yǎng)法；咽拭子聚合酶鏈反應；血清抗體；配對研究   肺炎支原體（mycoplasma pneumoniae,MP）是嬰幼兒、青少年急性呼吸道感染的主要病原體之一，臨床上大多數(shù)表現(xiàn)為呼吸道感染綜

3、合征，其中約3%10%可發(fā)展為支原體肺炎。但只根據(jù)臨床癥狀很難鑒別由MP或病毒、細菌等病原體引起的兒童呼吸道感染，給臨床治療帶來一定的困難。筆者采用3種MP檢測法對362例臨床擬診為呼吸道（非細菌性）感染患兒的咽拭子和血清標本進行配對研究，通過病例回顧來探索對支原體肺炎敏感的實驗室診斷方法，以協(xié)助臨床準確做出診治。   1 材料與方法   1.1 對象 收集湖南省兒童醫(yī)院檢驗科2006年1月1日9月30日在呼吸免疫科就診住院患兒，有呼吸道感染癥狀，已經(jīng)初診為非細菌性感染的患兒362例作為研究對象，其中男175例，女187例；年齡為2個月12歲，病程為19

4、0天。   1.2 方法 具體方法有：（1）用MP快速培養(yǎng)法、PCR法和MP-Ab法等3種MP檢測法對362例研究對象同時進行檢測，記錄結果。（2）通過研究對象病歷回顧統(tǒng)計MP感染的例數(shù)，并按年齡、病程和3種MP檢測法結果進行統(tǒng)計學分析。   1.3 臨床診斷MP感染的診斷標準 按文獻1、臨床癥狀、體征標準，包括回顧性診斷即患兒經(jīng)紅霉素治療有效，經(jīng)青霉素、頭孢菌素治療無效者等；以及實驗室檢查3種檢測法至少有一種陽性。病程計算方法：以病歷本記錄為準，即在患兒開始有癥狀或體征時開始計算，到患兒來就診檢測時為止進行計算。   1.4 MP快

5、速培養(yǎng)法 支原體分離鑒別培養(yǎng)液由珠海市浪峰生物技術有限公司提供。清晨患兒未洗漱前用咽拭子取咽部分泌物，嚴格按說明書進行，將咽拭子用無菌生理鹽水處理，接種到預溫的培養(yǎng)基中，37 培養(yǎng)；培養(yǎng)基液體顏色由紫紅色變?yōu)椴菥G色或嫩綠色且清亮，并且在靜置時，瓶底有藍色顆?；蛭镔|沉淀為陽性，5天后培養(yǎng)基顏色不變或無藍色顆?；蛭镔|沉淀為陰性。PCR法：試劑由中山大學達安基因股份有限公司提供。應用PCR法檢測MP-DNA，嚴格按試劑盒說明書進行，以在紫外燈下出現(xiàn)180 bp擴增帶結果判為陽性。每次試驗均設陽性、陰性對照（陽性對照為MP質粒，陰性對照為無菌生理鹽水），由專人進行操作，質量控制。MP-Ab法：試劑為日

6、本瑞必歐株式會社MP-Ab檢測試劑SERODIA-MYCO凝集試驗試劑盒，嚴格按試劑盒說明書操作，抽取患兒靜脈血3 ml，采用明膠顆粒被動凝集法，用血清檢測，結果以140判斷為陽性。每次試驗均設未致敏明膠顆粒、致敏明膠顆粒和陽性、陰性血清進行測定。   1.5 統(tǒng)計學方法 計量資料用均數(shù)±標準差（x±s）表示，各年齡組與3種檢測方法結果比較用Spearman檢驗；各年齡組間確診病例的陽性率比較用2檢驗；3種檢測方法陽性結果與病程之間的比較用q檢驗。   2 結果   2.1 陽性樣本 經(jīng)過回顧性診斷，在配對研究組3

7、62例研究對象中有152例符合MP感染的診斷標準，即有152例確診病例，其中肺炎45例，支氣管炎56例，上呼吸感染49例，支氣管哮喘2例。MP快速培養(yǎng)法檢測出78例陽性，PCR法檢測出103例陽性，MP-Ab法檢測出127例陽性。   2.2 結果分析 各確診病例的年齡分布，見表1。表1顯示兒童MP感染的年齡以34歲年齡段的病例最多，為46例，陽性率最高，為70.77%，與其余年齡組段比較P0.05。3種檢測法的陽性檢測結果與年齡分布見表1，表1顯示3種檢測法與年齡之間差異無統(tǒng)計學意義，以34歲的年齡段與其余年齡組段比較差異無統(tǒng)計學意義，P0.05。不同病程患兒3種檢測法的

8、檢測結果，見表2，表2顯示MP快速培養(yǎng)法為陽性的患兒病程均值較短為（4.5±2.6）天，PCR法為陽性的患兒病程均值為（6.2±3.5）天，MP-Ab法為陽性的患兒病程均值較長為（8.1±4.5）天。3組之間兩兩比較，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）。表1 不同年齡組MP感染確診病例和3種檢測方法結果對比分析注：代表與年齡組34歲組段比較結果表2 不同病程患兒3種檢測方法陽性結果對比分析注：代表三組之間的兩兩比較。           3討論： MP感染的臨床表現(xiàn)常無

9、特異性，臨床的實際工作中，容易與一般病毒性感冒相混淆。在臨床上患兒有下列癥狀：（1）發(fā)熱呈弛張熱或不規(guī)則熱。刺激性咳嗽非膿性痰，偶帶血絲。（2）可有咽痛、頭痛、胸痛，全身癥狀比體征明顯。（3）肺部體征不典型而胸片炎癥顯著，可見云霧狀大片陰影。（4）WBC正?；蛏?。（5）青霉素類、磺胺類抗生素治療無效，改用或一開始用大環(huán)內(nèi)酯類抗生素有效。（6）實驗室MP檢驗有1項或1項以上陽性具備以上2個條件或以上者可初步診斷為MP感染。更多時候，臨床醫(yī)生為了盡快緩解患兒的癥狀，需根據(jù)患兒的癥狀、體征和病史做MP感染的診斷性治療，但應與肺結核相互鑒別。   近年來由于診斷技術的提高，MP感染報道日漸增多，一般認為MP感染以年長兒發(fā)病較多，本文表1資料顯示，28歲年齡段是發(fā)病的高峰期2。占同期呼吸免疫科住院患兒的9.3%，比有關文獻報道各年齡組支原體肺炎占肺炎發(fā)病的10%20%低。說明MP感染的發(fā)病年齡有提前，且年齡越小，臨床表現(xiàn)愈不典型。   臨床實驗室檢測MP的方法很多，過去所用的冷凝集試驗法診斷MP感染缺乏特異性，敏感性也差，易受病程