治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中藥復(fù)方白仙風(fēng)湯劑的藥理作用研究

1、治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中藥復(fù)方白仙風(fēng)湯劑的藥理作用研究                                作者：郭麗冰 王蕾 林爽 潘貞蕓【摘要】  目的研究類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的中藥復(fù)方白仙風(fēng)湯的藥理作用。方法采用小鼠扭體鎮(zhèn)痛試驗和小鼠耳二甲苯致炎抗炎試驗對白仙風(fēng)湯不同提取方法的提取物

2、進(jìn)行藥理指標(biāo)考察，選擇較優(yōu)的提取方法，再進(jìn)行大鼠佐劑關(guān)節(jié)炎試驗。結(jié)果白仙風(fēng)湯方法（水醇分提法）提取物能顯著鎮(zhèn)痛和抑制小鼠耳腫脹度，白仙風(fēng)湯中、高劑量給藥組能顯著抑制佐劑關(guān)節(jié)炎大鼠足腫脹度。結(jié)論白仙風(fēng)湯具有一定的抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎作用。 【關(guān)鍵詞】  中藥復(fù)方； 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎 ； 藥理實驗； 鎮(zhèn)痛抗炎作用    Abstract：ObjectiveTo study the pharmacological effect of a Chinese compound formula Baixianfeng Decoction used for  the

3、rapy  rheumatoid arthritis (RA). MethodsDifferent extraction methods for Baixianfeng  were chosen by the writhing test and ear swelling test in mice. Adjuvant Arthritis of Rats experiment was used on the better one. ResultsThe extract of method had significant analgesic effect and could in

4、hibit the ear swelling degrees of mice. The high and middle dosage of Baixianfeng Decoction could significantly inhibit the feet swelling degrees of rats.ConclusionBaixianfeng Decoction hasd anti-RA effect.    Key words：Chinese compound formula;     Rheumatoid arth

5、ritis (RA);    Pharmacological experiments;    Anti-inflammatory and analgesic effect    類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎 (Rheumatoid Arthritis，RA)是一種以關(guān)節(jié)疼痛、腫脹、強(qiáng)直、變形為主要臨床表現(xiàn)的慢性全身性自身免疫性疾病。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎目前尚無針對性特效藥。中醫(yī)認(rèn)為其屬中醫(yī)“痹癥”范疇，臨床上大體可分為風(fēng)寒濕痹和風(fēng)濕熱痹兩種癥型，常以疏風(fēng)通絡(luò)，活血止痛類藥物，如青風(fēng)藤、威靈仙等及蟲蛇類藥物為主方加減治療1，2

6、。    本實驗選取臨床上用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中藥驗方白仙風(fēng)湯進(jìn)行藥理實驗研究。通過小鼠實驗指導(dǎo)白仙風(fēng)湯劑有效成分的提取分離，然后針對臨床上類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的癥狀，結(jié)合藥理理論，通過大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎(AA)藥理實驗對白仙風(fēng)湯提取部位進(jìn)行抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥理活性研究，為研究治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的中藥復(fù)方白仙風(fēng)湯有效部位奠定基礎(chǔ)。    1   儀器與材料    1.1   儀器電熱恒溫水浴鍋（DK-S26型），上海精宏實驗設(shè)備有限公司；紅外線快速干燥器（WS70-1型）

7、，上海圣欣儀器有限公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（RE-5298），上海亞榮生化儀器廠；PV-200足趾容積測量儀，成都泰盟科技有限公司。    1.2   動物NIH小鼠，體重1822 g，合格證（粵檢證字）：2006A017號。SD大鼠，雄性，體重180220 g，合格證（粵檢證字）：2006A015號。均由廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心提供（SPF級）。    1.3   藥品白仙風(fēng)湯組成：威靈仙、白芍、炙甘草、青風(fēng)藤等購于廣州市藥材公司；吲哚美辛腸溶片，廣東華南藥業(yè)有限公司，國字準(zhǔn)號H44020701；醋酸潑

8、尼松片，廣東華南藥業(yè)有限公司，國字準(zhǔn)號H44020682；弗氏完全佐劑(FCA)，美國Sigma公司，Lot 51K8931。    1.4   試劑95%乙醇，化學(xué)純（天津市東麗區(qū)天大化學(xué)試劑廠）；CMC-Na，化學(xué)純（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；蒸餾水，學(xué)院自制，冰醋酸。    2   方法與結(jié)果    2.1   供試品的提取與制備將白仙風(fēng)湯用兩種方法進(jìn)行提?。喝剿岱ǎǚ椒ǎ┖退挤痔岱ǎǚ椒ǎ?#160;   全

9、方水提法：將復(fù)方中的所有藥進(jìn)行水煎煮。藥材以10倍量水提取兩次，1 h/次，過濾，合并濾液水浴濃縮，定容待用。    水醇分提法：將白仙風(fēng)湯中藥材按照有效成分的結(jié)構(gòu)類型及性質(zhì)分為兩部分，分別用醇提法（威靈仙、白芍、青風(fēng)藤等，70%乙醇提取，以10倍量乙醇回流提取兩次，1 h/次，提取液減壓回收溶劑）和水提法（當(dāng)歸、透骨草等，以10倍量水回流提取2次，1 h/次，提取液減壓回收溶劑）進(jìn)行提取，將兩部分濃縮液用1%CMC-Na溶液溶解并合并，定容待用。    實驗分為高、低劑量組，低劑量濃度為0.47 g生藥/ml，高劑量濃度為1.85

10、g生藥/ml。陽性對照藥為吲哚美辛，配制成0.75 mg/ml的水溶液。    2.2  對冰醋酸引起的小鼠扭體反應(yīng)的影響3，4取小鼠90只，雌雄各半，隨機(jī)分為6組，即生理鹽水對照組、陽性對照組、方法高、低劑組、方法高、低劑組，每組15只。除陽性對照組外，其余連續(xù)灌胃7d，生理鹽水組給予等體積的生理鹽水，高低劑量組灌胃受試藥物0.2 ml/10 g，從第6天開始灌胃陽性對照組。于末次給藥1 h，腹腔注射0.6%冰醋酸0.1 ml/10 g。觀察記錄注射致痛劑后15 min內(nèi)各鼠扭體次數(shù)，比較組間差異。1     &

11、#160;       抑制率（）（生理鹽水組扭體的次數(shù)用藥組扭體的次數(shù)）/生理鹽水組扭體的次數(shù)×100    實驗結(jié)果表明，白仙風(fēng)湯方法的低劑組、方法高、低劑組與空白組比較均有非常顯著的鎮(zhèn)痛作用，方法的高劑組也有顯著的鎮(zhèn)痛作用。見表1。    2.3  對小鼠耳二甲苯致腫的影響5，6取雄性小鼠90只，隨機(jī)分為6組，每組15只。除陽性對照組外，其余連續(xù)灌胃7 d，生理鹽水組給予等體積的生理鹽水，高低劑量組灌胃受試藥物0.2 ml/10 g，從第6天開始陽性

12、對照組給藥。于末次給藥后1 h，將二甲苯30 l涂于小鼠右耳廓兩面致炎，左耳作對照。致炎30 min后用直徑8 mm的打孔器取下耳片，稱重，按下式腫脹度和腫脹抑制率。    腫脹度(mg)=致炎側(cè)耳片重(mg)- 非致炎側(cè)耳片重(mg)    抑腫率（）（生理鹽水組耳腫脹度用藥組耳腫脹度）/生理鹽水組耳腫脹度×100表1  白仙風(fēng)湯對小鼠的鎮(zhèn)痛作用與空白組比較，* P<0.05，* P<0.01；n = 15    實驗結(jié)果表明，白仙風(fēng)湯方法低劑組與生理鹽水組比較對二甲苯致

13、小鼠耳腫脹有十分顯著抗炎作用，而方法高低劑組與生理鹽水組比較對抗二甲苯小鼠耳腫脹均無顯著抗炎作用。見表2。    關(guān)節(jié)的疼痛及炎癥反應(yīng)為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎典型癥狀，小鼠實驗主要考察這兩項指標(biāo)。小鼠扭體法鎮(zhèn)痛試驗、耳二甲苯致炎試驗結(jié)果表明，白仙風(fēng)湯用水醇分提法進(jìn)行提取具有一定的鎮(zhèn)痛抗炎作用，可進(jìn)行下一步抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥理模型實驗。表2  藥物抗二甲苯致小鼠耳腫脹作用與空白組比較：* P<0.05，* P<0.01；n = 15    2.4   大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎模型試驗（大鼠足腫脹試驗）5取SD雄

14、性大鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只，先測量左右后肢踝關(guān)節(jié)以下部位的容積 ,連續(xù)測兩次 ，取平均值作為用藥前的足容積，然后逐只將弗氏完全佐劑0.05 ml（內(nèi)含死結(jié)合桿菌0.5 mg）注射于大鼠右后足墊內(nèi)6，注射弗氏完全佐劑當(dāng)天即開始給藥。模型對照組每日灌胃等容積常水，陽性對照藥組每日灌胃給予醋酸潑尼松溶液；高中低劑量組每日灌胃受試藥物1.0 ml/100 g。連續(xù)給藥21 d，給藥期間每隔一定天數(shù)測大鼠足腫脹左右足一次，同側(cè)足跖與給弗氏完全佐劑前后容積之差值為腫脹程度，計算出腫脹百分率和腫脹抑制百分率，結(jié)果見表34。    足腫脹度( %) = (用藥后足容積

15、用藥前足容積)/ 用藥前足容積×100 % 表3  白仙風(fēng)湯對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠右足腫脹度的影響表4  白仙風(fēng)湯對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠左足腫脹度的影響 與模型組比較，* P<0.05，* P<0.01；n = 10    結(jié)果顯示，對照組右腳于注射佐劑次日即呈明顯腫脹,逐日加重達(dá)高峰,然后逐漸減輕。于第12天后出現(xiàn)第2 次腫脹，并因遲發(fā)性超敏反應(yīng)(Delayed - type hypersensitivity ,DTH) 而出現(xiàn)全身癥狀：對側(cè)后肢、前肢腫脹明顯，主要出現(xiàn)在踝關(guān)節(jié)，也累積整個腳趾，并與足趾關(guān)節(jié)間及前足趾出現(xiàn)關(guān)節(jié)腫大

16、，由于踝關(guān)節(jié)腫脹變形，大鼠的行動極為不便，類似于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的癥狀，這在對照組尤為嚴(yán)重。到第18天后癥狀開始逐漸消退。    實驗結(jié)果表明中、高劑量組與生理鹽水組比較對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠左右足腫脹均有顯著抑制作用，高劑量組從第8天至第16天均有顯著差異，第21天與第16天相比較，其腫脹度有明顯的下降，表明白仙風(fēng)湯對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎有一定的抑制作用。    3   討論    藥典中記載，威靈仙可祛風(fēng)除濕，通絡(luò)止痛；白芍可平肝止痛，養(yǎng)血調(diào)經(jīng)，斂陰止汗；青風(fēng)藤可祛風(fēng)濕，通經(jīng)絡(luò)，利小便。方中的

17、這幾味主藥均顯示有止痛祛風(fēng)濕之效，因此藥理實驗針對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的典型癥狀疼痛和炎癥進(jìn)行設(shè)計。為證明方藥對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎有效，對白仙風(fēng)湯用不同提取方法得到的提取物進(jìn)行小鼠預(yù)試篩選實驗，將實驗內(nèi)容選擇為針對鎮(zhèn)痛的小鼠扭體實驗和針對抗炎的小鼠耳二甲苯致炎實驗7，8。實驗結(jié)果表明，水醇分提法無論扭體試驗還是耳二甲苯致炎實驗，與生理鹽水組（即空白對照組）比較均有顯著性差異。故以水醇分提法的提取物作為進(jìn)一步類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎動物模型實驗的藥物。    動物藥理實驗中大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎(AA)是常見的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎實驗?zāi)Ｐ椭?，常用于RA發(fā)病機(jī)制的研究及抗炎藥物的篩選9。用弗氏完全

18、佐劑誘導(dǎo)的大鼠多發(fā)性關(guān)節(jié)炎，可能是一種遲發(fā)性超敏反應(yīng)或自身免疫性疾病。其抗原是已改變的大鼠自身抗原或是結(jié)核桿菌與大鼠組織的復(fù)合物。本模型類似于人的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，可用以篩選祛風(fēng)濕藥。以大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎(AA)實驗?zāi)Ｐ椭笜?biāo)，通過整個實驗過程的考察分析，白仙風(fēng)湯發(fā)揮作用快，既對早期的急性炎癥有抑制作用，對后期的遲發(fā)性超敏反應(yīng)也有抑制作用，這種抑制作用基本上存在于整個實驗過程，左右足上的表現(xiàn)基本相同。且對后期作用更強(qiáng), 提示其對原發(fā)性或繼發(fā)性的炎癥損害有明顯抑制作用。但低劑量組與模型組比較其抑制作用不顯著，因此，臨床應(yīng)用時應(yīng)適當(dāng)調(diào)整劑量以達(dá)到更好的療效?！尽?#160; 1 Firestein, G. S. & Zvaifler, N. J. How important are T cells in chronic rheumatoid synovitis J. Arthritis Rheum, 1990, 33: 768.2 粟德林,楊易木.中醫(yī)藥類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎臨床研究J.中醫(yī)藥信息,1991,1:43.3 葉任高.內(nèi)，第5版M.北京:人民衛(wèi)生出版社,2000:897.4 周時高.中醫(yī)藥為主長期治療類風(fēng)顯性關(guān)節(jié)炎的探討附82例臨床分析J.遼寧中醫(yī)雜志,1999,26(2):61.5 陳 奇.中藥藥理