生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)知識(shí)點(diǎn)整理

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)知識(shí)點(diǎn)整理實(shí)驗(yàn)一 還原糖的測(cè)定、實(shí)驗(yàn)二 糧食中總糖含量的測(cè)定1.還原糖測(cè)定的原理3,5-二硝基水楊酸與還原糖溶液共熱后被還原成棕色的氨基化合物,在550nm處測(cè)定光的吸收增加量，得出該溶液的濃度，從而計(jì)算得到還原糖的含量2.總糖測(cè)定原理多糖為非還原糖，可用酸將多糖和寡糖水解成具有還原性的單糖，在利用還原糖的性質(zhì)進(jìn)行測(cè)定，這樣就可以分別求出總糖和還原糖的含量3.電子天平使用4.冷凝回流的作用：使HCl冷凝回流至錐形瓶中，防止HCl揮發(fā)，從而降低HCl的濃度。5.多糖水解方法：加酸進(jìn)行水解6.怎樣檢驗(yàn)淀粉都已經(jīng)水解：加入1-2滴碘液，如果立即變藍(lán)則說(shuō)明沒(méi)有完全

2、水解，反之，則說(shuō)明已經(jīng)完全水解。7.各支試管中溶液的濃度計(jì)算8.NaOH用量： 9.不能中途換分光光度計(jì),因?yàn)椴煌姆止夤舛扔?jì)的光源發(fā)光強(qiáng)度不同10.分光光度計(jì)的原理：在通常情況下，原子處于基態(tài)，當(dāng)通過(guò)基態(tài)原子的某輻射線(xiàn)所具有的能量（或頻率）恰好符合該原子從基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài)所需的能量（或頻率）時(shí)，該基態(tài)原子就會(huì)從入射輻射中吸收能量，產(chǎn)生原子吸收光譜。原子的能級(jí)是量子化的，所以原子對(duì)不同頻率輻射的吸收也是有選擇的。這種選擇吸收的定量關(guān)系服從式。實(shí)驗(yàn)證明，在一定濃度范圍內(nèi)，物質(zhì)的吸光度A與吸光樣品的濃度c及厚度L的乘積成正比，這就是光的吸收定律，也稱(chēng)為郎伯-比爾定律分光光度計(jì)就是以郎伯比爾定律為原

3、理，來(lái)測(cè)定濃度11.為什么要水解多糖才能用DNS因?yàn)镈NS只能與還原糖溶液在加熱的條件下反應(yīng)生成棕紅色的氨基化合物，不能與沒(méi)有還原性的多糖反應(yīng)。12.為什么要乘以0.9因?yàn)榈矸鄣乃夥匠淌綖?，只有用還原糖的含量乘以0.9才能得到多糖的含量。13.為什么要中和后再測(cè)？因?yàn)镈NS要在中性或微堿性的環(huán)境下與葡萄糖反應(yīng)實(shí)驗(yàn)三 蛋白質(zhì)的水解和紙色譜法分離氨基酸、實(shí)驗(yàn)四 考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度1.紙色譜分離氨基酸分離原理由于各氨基酸在固定相（水）和流動(dòng)相（有機(jī)溶劑）中的分配系數(shù)不同，從而移動(dòng)速度不同，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后，不同的氨基酸將存在于不同的部位，達(dá)到分離的目的。2.天然氨基酸為L(zhǎng)型3.酸式水解的優(yōu)點(diǎn)

4、是：是保持氨基酸的旋光性不變，原來(lái)是L型，水解后還是L型，由于甘氨酸所有的R基團(tuán)是氫原子，所以它不是L型5.酵母粉水解后絕對(duì)不含有色氨酸6.根據(jù)分離原理不同分離色譜可分為：有吸附色譜、離子交換色譜、分配色譜等7.不同物質(zhì)的Rf值不同，同種物質(zhì)不同條件的Rf值不同吹分時(shí)不能吹的過(guò)熱和過(guò)干，與濾紙結(jié)合太緊密。流動(dòng)相帶走不是很容易。容易出現(xiàn)拖尾8.噴完茚三酮后不能直接放入烘箱，先自然晾干再放入烘箱內(nèi)，茚三酮乙醇高溫易著火，烘箱的金屬條過(guò)熱也會(huì)顯色。會(huì)出現(xiàn)拖尾或斑點(diǎn)狀，樣品顯色后成條狀，；酵母分解后不知有5個(gè)斑點(diǎn)，會(huì)有很多種，兩種之間可能還有其它的氨基酸，9.茚三酮的反應(yīng)方程式10.考馬斯亮藍(lán)測(cè)定蛋白

5、質(zhì)濃度 :范德瓦爾鍵通過(guò)分子間靜電吸引力結(jié)合11.考馬斯亮藍(lán)分為G-250（反應(yīng)速度快，不易洗脫，用定量測(cè)定）、R-250反應(yīng)速度慢，易洗脫，通常用于定性測(cè)定12.考G-250與蛋白質(zhì)結(jié)合后穩(wěn)定時(shí)間為1h左右13.蛋白質(zhì)的鹽析反應(yīng)蛋白質(zhì)中加入某些飽和鹽，蛋白質(zhì)溶液中濃度下降，蛋白質(zhì)析出14.蛋清：NaCl溶液=1：9 10%卵清蛋白實(shí)驗(yàn)五 血清蛋白的醋酸纖維薄膜電泳、實(shí)驗(yàn)六 維生素C的定量測(cè)定1.醋酸纖維薄膜電泳的原理、影響遷移的因素血清中各種蛋白質(zhì)離子在電場(chǎng)的作用下，向著與其電性相反的電極移動(dòng)。由于各種蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)不同，從而在同一pH環(huán)境中所帶電荷量有所不同，同時(shí)分子大小形狀各有差異，所以

6、在統(tǒng)一電場(chǎng)中泳動(dòng)速度不同。一般來(lái)說(shuō)，所帶的電荷多且顆粒小的，泳動(dòng)速度快，反之則慢。2.影響電泳的因素：（1）粒子本身 （電荷量、粒子大小、形狀）（2）黏度 （3）電場(chǎng)（4）電滲（5）支持物的篩口3.醋酸纖維薄膜的優(yōu)點(diǎn)具有均一的泡沫樣結(jié)構(gòu)，厚度僅120微米，有強(qiáng)滲透性，對(duì)分子移動(dòng)無(wú)阻力，作為區(qū)帶電泳的支持物進(jìn)行蛋白質(zhì)電泳有簡(jiǎn)便、快速、樣品用量少，應(yīng)用范圍廣，分離清晰，沒(méi)有吸附現(xiàn)象等優(yōu)點(diǎn)。4.pH8.6中帶負(fù)電，往陽(yáng)極移動(dòng)5.五條帶的順序：血清蛋白、球蛋白、球蛋白、球蛋白、球蛋白6.層析時(shí)，粗糙面朝上，電泳時(shí)粗糙面朝下，記號(hào)做在光澤面7.實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵P43-P458測(cè)定VC的原理：還原型抗壞血酸

7、能還原2，6-二氯酚靛酚染料，本身則氧化為脫氫型。在酸性溶液中，2，6-二氯酚靛酚呈紅色，還原后變?yōu)闊o(wú)色。因此，當(dāng)染料滴定含有維生素C的酸性溶液時(shí)，維生素C尚未全部被氧化前，則滴下的染料立即變成無(wú)色。一旦溶液中的維生素C全部被氧化，則滴下的染料立即使溶液變成粉紅色。9.1%草酸有何作用（1）提供一個(gè)顯色環(huán)境（2）保護(hù)維生素C（3）作空白對(duì)照實(shí)驗(yàn)七 蛋白質(zhì)總氮含量的測(cè)定、實(shí)驗(yàn)八 正交法測(cè)定幾種因素對(duì)酶活性的影響1.凱氏定氮法的原理：含氮有機(jī)化合物在濃硫酸中消化生成硫酸銨，再在凱氏定氮儀中加入強(qiáng)堿堿化消化液使硫酸銨分解放出氨氣。用水蒸氣蒸餾法將氨蒸入過(guò)量標(biāo)準(zhǔn)無(wú)機(jī)酸溶液中，然后用標(biāo)準(zhǔn)酸溶液進(jìn)行滴定，準(zhǔn)確測(cè)定按量，從而計(jì)算出含氮量。2.用此方法通常會(huì)高于實(shí)際含量？3.H3BO3指示劑在pH<5.4時(shí)為紫紅，pH>5.4時(shí)為綠色4.CuSO4催化反應(yīng)K2SO4與NaSO4提高反應(yīng)沸點(diǎn)5.凱氏定氮法的優(yōu)點(diǎn)：可以測(cè)定固液試樣6.怎樣檢測(cè)蒸餾器已洗凈（P53）7.為什么小漏斗內(nèi)要作保留一點(diǎn)30%NaOHNaOH加進(jìn)后會(huì)立即反應(yīng)放出氨氣，主要作水封8.正交法實(shí)驗(yàn)原理利用正交表來(lái)