細菌分離培養(yǎng)及藥敏試驗方法及步驟(內(nèi)容充實)

1、京文儀傳卷考，取甫取腳可制冷細菌分離培養(yǎng)方法及操作步驟無菌取血液或臟器、淋巴結(jié)劃線接種于鮮血瓊脂平板或血清瓊脂 平面培養(yǎng)基、普通肉湯培養(yǎng)基，37 c恒溫培養(yǎng)24 h,觀察其生長特 性。目前細菌分離培養(yǎng)的常用方法有平板劃線分離法、加熱分離法和實驗動物分離法。平板劃線接種法這是目前臨床上最常用的分離接種方法。 它可以從被檢病料中通 過劃線可使細菌分離、分散生長而形成單個菌落（有利于從含有多種 細菌的標本中分離出目的菌），以便挑選可疑菌落作純培養(yǎng)加以鑒定。 具體操作：1、右手持接種環(huán)，在酒精燈上火焰滅菌；圖1病料采集圖2接種環(huán)滅菌2、待接種環(huán)冷卻后，挑取被檢料少許，左手持瓊脂平板，以食指為支點，用拇

2、指和無名指將平皿揭開一空隙。大約20 c時，迅速地將接種環(huán)輕輕地涂布在培養(yǎng)基的邊緣3、在涂布處來回移動作曲線形劃線接種。（ 注意：劃線時，以 腕力使接種環(huán)在瓊脂平板表面劃動， 盡量不要劃破培養(yǎng)基，劃的線條要密，但不能重復舊線，以免培養(yǎng)物形成菌苔。）圖3平板劃線接種法4、劃線完畢，合上平皿蓋，將瓊脂平板倒置，放入 37 c溫箱內(nèi)培養(yǎng)18 24小時注意：分離培養(yǎng)用的平板培養(yǎng)基應表面干燥，可于臨用前置37 c孵育箱內(nèi)30分鐘，這樣表面即干燥有利于分離培養(yǎng)，又使培養(yǎng)基預 溫，對培養(yǎng)某些較嬌弱的細菌有利。參照3京文僅供參考，取假取腳可制泠細菌藥敏試驗方法操作步驟藥敏試驗是抗菌藥使用以前必不可少的一個基本

3、環(huán)節(jié)，一個正確的藥敏結(jié)果能夠科學的指導養(yǎng)殖戶用藥，減少抗菌素使用的盲目性， 從而減少養(yǎng)殖戶損失。在臨床實際生產(chǎn)中具備重要意義。1、在“超凈臺”中，用經(jīng)（酒精燈）火焰滅菌的接種環(huán)挑取適 量細菌培養(yǎng)物，以劃線方式將細菌涂布到平皿培養(yǎng)基上。具體方式； 用滅菌接種環(huán)取適量細菌分別在平皿邊緣相對四點涂菌，以每點開始 劃線涂菌至平皿的1/2。然后，找到第二點劃線至平皿的1/2,依次 劃線，直至細菌均勻密布于平皿。圖4接種環(huán)劃線2、以無菌操作將滅菌的不銹鋼小管（外徑為 4毫米、孔徑與孔距均為3毫米，管的兩端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），放置在培養(yǎng)基上打孔，將孔中的培養(yǎng)基用針頭挑出，并以火焰封底，使培養(yǎng)基 能

4、充分的與平皿融合（以防藥液滲漏，影響結(jié)果）。3、添加藥物：按不同藥液加樣，樣品加至滿而不溢為止。將平皿培養(yǎng)基置于37 c溫箱中培養(yǎng)24小時后，觀察效果。圖5添加藥物藥敏試驗結(jié)果：圖6藥敏試驗結(jié)果影響藥敏結(jié)果的因素：1、培養(yǎng)基:應根據(jù)試驗菌的營養(yǎng)需要進行配制。 傾注平板時，厚度 合適，約56mm,不可太薄，一般90mm直徑的培養(yǎng)皿，傾注培養(yǎng)基 1820m為宜。培養(yǎng)基內(nèi)應盡量避免有抗菌藥物的拮抗物質(zhì) ，如鈣、鎂 離子能減低氨基糖甘類的抗菌活性，胞腺密咤核甘和對氨苯甲酸(PABA)能拮抗磷胺藥和TMP的活性2、細菌接種量：細菌接種量應恒定，如太多，抑菌圈變小，能產(chǎn)酶的 菌株更可破壞藥物的抗菌活性。3、藥物濃度:藥物的濃度和總量直接影響抑菌試驗的結(jié)果，需精硫 配制。商品藥應嚴格按照其推薦治療量配制。4、培養(yǎng)時間:一般培養(yǎng)溫度和時間為37 c 8-18小時，有些抗菌藥 擴散慢如多粘菌素，可將已放好抗菌藥的平板培養(yǎng)基，先置4 c泳箱內(nèi)