冰凍切片固定方法的改進-

1、體外抗菌作用研究。中國抗生素雜志,1994,19:147.(收稿:1997210220修回:1998203222(本文編輯俞瑞綱冰凍切片固定方法的改進姚海嵩楊踐金曉龍曹福妹丁長囡冰凍切片在病理快速診斷中運用廣泛,但要做好一張優(yōu)良的冰凍切片并非容易,尤其是冰凍組織固定不良會造成切片背景不清,染色不良等問題1。近年來我們運用改良H S(H azard and Steven son固定液2和C larke固定液的雙重固定法替代C larke固定液3單液固定法對切片進行固定,使冰凍切片質量有了明顯的提高,報道如下。材料及方法一、固定液的配制(一改良H S固定液(A液中性緩沖福爾馬林80m l,95%酒

2、精19m l,冰醋酸1m l。(二C larke固定液(B液無水酒精75m l,冰醋酸25m l。二、組織切片切取1.5c m×1.2c m厚0.5c m手術新鮮組織用O CT包埋后置于恒冷切片機快速冷凍后,同一組織制備厚為6m連續(xù)切片2張。三、固定方法實驗組:將一張切片放置半干后,立即放入A液內固定30秒1分鐘,后流水沖洗30秒,再置入B液內固定1分鐘;對照組:將另一張切片放置半干后,直接置于B液固定1分鐘。四、染色兩組切片經固定后入哈立氏蘇木素液3分鐘后, 1%鹽酸酒精分化5秒,流水泛藍5分鐘,伊紅染液1分鐘,梯度酒精脫水,二甲苯透明,樹膠封片。結果顯微鏡觀察兩組切片發(fā)現(xiàn):應用雙

3、重固定法的實驗組比使用單固定法的對照組冰凍切片質量明顯提高,具體優(yōu)點為:切片背景清楚,實質細胞及間質組織結構清晰,細胞核嗜蘇木素,胞漿嗜伊紅性,兩者對比分明,結果見圖1、2 。 圖1實驗組:乳腺導管內癌,腺管結構清楚,細胞核漿對比鮮明圖2對照組:乳腺導管內癌,腺管結構模糊,細胞分界不清討論近年來隨冰凍切片技術的發(fā)展,冰凍切片質量明顯提高,但與石蠟切片相比仍有一定的差距。石蠟切片由于組織受福爾馬林的作用,固定迅速而完全,且組織經脫水透明及浸蠟多道步驟后,使游離在組織中一些小分子物質被洗脫,組織再經過充分的脫脂后非常容易與染色劑親合。故石蠟切片中細胞界限明確。染色分明,背景清晰。由于冰凍切片的制作

4、原則與石蠟切片不同,制作一張質量高的冰凍切片不僅要做到組織速凍完全,防93上海醫(yī)學1998年5月第21卷第5期響4。實驗組冰凍切片先經H S固定液,使其具有與石蠟切片相類似的環(huán)境,組織固定徹底,經流水沖洗,將多余的固定液和切片中溶于固定液的小分子物質洗去,這就消除了切片被遮蓋以至染色模糊的缺點。切片再經第二液C larke固定液的再固定及酒精脫脂作用,使染色劑與組織親合性增強染色鮮明。還消除了因細胞核固定不良,所致染色對比不分明的缺陷。對照組切片未經H S固定液及流水沖洗而直接入C larke固定液,固定效果不如雙重固定法,與實驗組切片相比較則顯染色不甚清晰,背景模糊。通過使用兩種不同固定方法

5、結果的比較,我們認為雙重固定液法在冰凍切片中應用良好,明顯優(yōu)于C larke氏單液固定法,值得推廣應用。參考文獻2.Schm ideW A.P rinci p les and tenchniques of surgical patho logy Cali2fo rnia:A ddison W esley,1983;119.4.赫麗,張意平,肖同浩.制作冰凍切片的幾點技巧,臨床與實驗病理學雜志,1996,12:258(收稿:1997212210修回:1998203210本文編輯:刁會正三種指示劑對測定氯化鈉注射液含量的影響楊婉花張芳華朱磊按中國藥典95版,測定氯化鈉注射液含量通常采用熒光黃吸附指

6、示劑法,測定液pH與熒光黃pH變色范圍有差異,往往使終點變化不明顯,結果偏高。U SPXX I版使用不加親水性高分子溶液,也未調節(jié)pH 的二氯熒光黃吸附指示劑法,B P1988使用鉻酸鉀指示劑法。本文用鉻酸鉀指示劑法,熒光黃、二氯熒光黃吸附指示劑法在不同條件下分別對標準氯化鈉液含量進行測定,比較了三種不同指示劑對氯化鈉含量測定的影響。試劑與藥品氯化鈉(基準試劑中國精細化工研究所,硝酸銀(基準試劑上海試劑一廠,鉻酸鉀、熒光黃、二氯熒光黃、碳酸鈣、糊精均為分析純,鉻酸鉀指示劑、熒光黃指示劑均按照中國藥典1995版方法配制,二氯熒光黃指示劑按照美國藥典XX I版配制,氯化鈉注射液(瑞金醫(yī)院制劑室批號

7、961022、961112、970103、970402。實驗方法一、0.1m o l L A gNO3滴定液配制精稱經110干燥至恒重的硝酸銀放置棕色量瓶中,蒸餾水溶解并定容,搖勻。二、1.2%氯化鈉標準液配制精稱經110干燥至恒重的氯化鈉適量,蒸餾水溶解并定容,搖勻。三、測定方法分別精吸氯化鈉標準液10m l,加水40m l,在不同條件下對氯化鈉標準液含量進行測定(n=6。(一鉻酸鉀指示劑法 法、 法(加CaCO30.1克分別加鉻酸鉀指示劑10滴,以A gNO3(0.1m o l L滴定至磚紅色沉淀生成。(二熒光黃指示劑法 法、 法(加CaCO30.1克、 法(加2%糊精5m l、 法(加CaCO30.1克,加2%糊精5m l分別加熒光黃指示劑8滴,以0.1m o l L A gNO3滴定終點依次為淡橙色、粉紅色、淡紅色、粉紅色。(三二氯熒光黃吸附指示劑法 法、 法加(CaCO30.1克、 法(加2%糊精5m l、 法(加Ca2 CO30.1克,加2%糊精5m l分別加二氯熒光黃指示劑10滴,以0.1m o l L A gNO3滴定至粉紅色。(四樣品測定精吸氯化鈉注射液10m l,按 法、 法、 法、 法分別測定氯化鈉含量