白花蛇舌草中有效成分含量測(cè)定方法研究進(jìn)展

1、白花蛇舌草中有效成分含量測(cè)定方法研究進(jìn)展白花蛇舌草為茜草科植物白花蛇舌草(Hedyotis diffusa Wi1ld)的干燥全草，主要含有黃酮類、三萜類、蒽醌類、環(huán)烯醚苷萜類、多糖類等成分，具有抗肝炎、抗腫瘤、抗病毒、抗炎抑菌、降血脂及降血糖等多種藥理活性1-2。1鄭宏鈞，詹亞華現(xiàn)代中藥材鑒別手冊(cè)M北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2001：7982薛存寬，沈凱，蔣鵬，等纈草主要活性成分的初步J現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2003，12(9)：912-914近年來(lái)，對(duì)白花蛇舌草中活性成分含量測(cè)定的報(bào)道越來(lái)越多，為此本文就近十年以來(lái)其含量測(cè)定方法作一綜述，并且對(duì)每一種方法的特點(diǎn)和適用范圍進(jìn)行了評(píng)述，為白花蛇舌

2、草的質(zhì)量進(jìn)一步評(píng)價(jià)提供參考。高效液相色譜法高效液相色譜法（high performance liquid chromatography，HPLC）是目前中藥含量測(cè)定中最常用的方法之一，它主要是利用要測(cè)定的指標(biāo)成分與其他組分在流動(dòng)相與固定相中的分配系數(shù)不同而把指標(biāo)成分分離出來(lái)并進(jìn)行含量測(cè)定。具有分析速度快、分離效率高、應(yīng)用范圍廣、檢測(cè)靈敏度高、自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)，可用于分析樣品中高沸點(diǎn)、熱不穩(wěn)定性、大分子量的有效成分，是中藥有效成分含量測(cè)定中應(yīng)用較為廣泛的一種分析方法。使用HPLC法測(cè)定白花蛇舌草中有效成分的含量一般采用反相色譜法，但檢測(cè)方式有紫外法(UV)和蒸發(fā)光散射法(ELSD)梁生旺.中藥制劑分

3、析M,北京：中國(guó)中醫(yī)藥出版社，2003:96. 11 UV檢測(cè)的色譜條件(見(jiàn)表1)表1 HPLC法測(cè)定白花蛇舌草中有效成分的色譜條件指標(biāo)成分色譜柱柱溫流動(dòng)相檢測(cè)波長(zhǎng)流速/（mm×mm,m）/nm/mL·min1乙?；嚾~草苷酸、雞屎藤次苷Pinnacleu C18（250×4.6,5）25甲醇-乙腈-1molL-1冰醋酸(3:2:95)2301.0反式6-0-對(duì)香豆酰雞屎藤苷甲酯Diamonsil ODS(250×4.6,5)25甲醇-水(45:55)3101.03，4-二羥基苯甲酸甲酯DiamonsilTM ODS(200×4.6,5)室溫甲

4、醇-0.05的磷酸水溶液(15:85)2540.82-甲基-3-羥基-4-甲氧基蒽醌Diamonsil C18(200×4.6,5)室溫甲醇-水(62:38)2671.02-甲基-3-羥基蒽醌齊墩果酸、熊果酸HiQ sil C18(150×4.6,5)30甲醇-四丁基溴化銨(20mmolL-1)-三乙胺(90:10:0.02)(用冰醋酸調(diào)pH6.9)2100.3咖啡酸、槲皮素、山柰酚Alhima C18 (250×4.6,5)30甲醇-0.5冰醋酸梯度洗脫3501.0熊果酸Alltech RP-C18(250×4.6,5)30甲醇-水(90:10)210

5、1.0(E)-6-0-對(duì)香豆酰雞屎藤苷甲酯、香豆酸Kromasil ODS C18(250×4.6,5）30乙腈-0.1%冰醋酸梯度洗脫3031.0車葉草苷Kromasil ODS C18(250×4.6,5 )30乙腈-0.2磷酸(5:95)2400.8香豆酸DiamonsilTM ODS(200×4.6,5)25甲醇-20mmolL-1:NH4AC(pH3.5)(25:75)3081.0槲皮素、山柰酚Alltima C18(250×4.6,5)30甲醇-0.5冰醋酸梯度洗脫3501.0香豆酸AgilentEclipse×DB-Cl8(250

6、×4.6,5)30乙腈-0.1磷酸水溶液梯度洗脫2301.0熊果酸、齊墩果酸Lichrospher Cl8(250×4.6,5)30甲醇-2醋酸（88:12）2101.0槲皮素HypersilBDSC18(200×4.6,5)25甲醇-水-磷酸(50:50:0.2)3701.0齊墩果酸、熊果酸AgilentC18(250×4.6,5)20甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(91.5:8.5:0.04:0.1)2100.8齊墩果酸、熊果酸Diamonsil C18(200×4.6,5)室溫甲醇-1HAc(35:65)3081.0齊墩果酸、熊果酸Nucled

7、ureC18(150×4.6,5)室溫乙腈-磷酸鹽緩沖液(45:55)2201.0齊墩果酸、熊果酸Lichrospher C18(250×4.6,5)）30甲醇-2冰醋酸水溶液(88:12)2101.0白花蛇舌草的化學(xué)成分較多，活性成分主要為黃酮類、蒽醌類、萜類、甾醇類等，同時(shí)測(cè)定白花蛇舌草及其制劑中的兩種或兩種以上的主要活性成分為其質(zhì)量控制打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。黃芪甲苷是玉屏風(fēng)中君藥黃芪的主要有效成分，因此玉屏風(fēng)質(zhì)量控質(zhì)大多測(cè)定黃芪甲苷但由于使用HPLC-UV法測(cè)定，黃芪甲苷在紫外末端區(qū)才有吸收，對(duì)試劑要求較高，其它成分峰干擾嚴(yán)重，因此人們開(kāi)始關(guān)注改用更為先進(jìn)的ELSD檢測(cè)器1

8、2 ELSD檢測(cè)的色譜條件ELSD的通用檢測(cè)方法消除了常見(jiàn)于傳統(tǒng)HPLC檢測(cè)方法中的難點(diǎn)，不同于紫外檢測(cè)器對(duì)于無(wú)紫外吸收的化合物靈敏度低，而且只能使用不吸收紫外的流動(dòng)相，ELSD的響應(yīng)不依賴與樣品的光學(xué)特性，任何揮發(fā)性低于流動(dòng)相的樣品均能被檢測(cè)，不受其官能團(tuán)的影響；能與任何的揮發(fā)性流動(dòng)相相容，可根據(jù)樣品的溶解度或分離特性選擇流動(dòng)相；對(duì)幾乎所有的樣品給出一致的響應(yīng)因子，可以通過(guò)和內(nèi)標(biāo)比較定量未知化合物所以使用ELSD檢測(cè)更為先進(jìn)和科學(xué)HPLC-ELSD法檢測(cè)玉屏風(fēng)中黃芪甲苷含量的色譜條件見(jiàn)表2表2 HPLC(ELSD)法檢測(cè)定玉屏風(fēng)中黃芪甲苷含量的色譜條件由表1和表2可見(jiàn)，玉屏風(fēng)的質(zhì)量控制以黃芪

9、甲苷含量測(cè)定為主，由于黃芪甲苷極性較大，因此兩種檢測(cè)方法所用色譜柱均為C。柱，柱溫為室溫到40，流速為0810mL·arin_。，流動(dòng)相也較為簡(jiǎn)單，一般選擇乙腈一水2元系統(tǒng)，分離效果較好使用紫外檢測(cè)器時(shí)在檢測(cè)波長(zhǎng)選擇上由于黃芪甲苷只有末端吸收，所以在200210nm處測(cè)定；用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器測(cè)定時(shí)漂移管溫度一般為90100，但載氣流速不一此外，玉屏風(fēng)中黃芪甲苷的測(cè)定還可以嘗試使用示差折光檢測(cè)器池玉梅等2利用HPLC示差折光檢測(cè)法測(cè)定了黃芪精口服液中黃芪甲苷。2薄層掃描法薄層掃描法是目前用于玉屏風(fēng)質(zhì)量控制的常用方法之一，具有簡(jiǎn)便、快速、選擇性高和顯色方便等特點(diǎn)，為了提高靈敏度和重現(xiàn)性，

10、現(xiàn)多采用雙波長(zhǎng)掃描法，而且一般使用硅膠G板使用該方法測(cè)定玉屏風(fēng)中黃芪甲苷含量的主要參數(shù)見(jiàn)表3表3 TLCS法測(cè)定玉屏風(fēng)中黃芪甲苷含量的條件從表3可以看出，薄層掃描法測(cè)定玉屏風(fēng)中黃芪甲苷含量一般使用氯仿一甲醇一水作展開(kāi)劑，顯色劑使用的是10硫酸乙醇溶液，105烘57分鐘后掃描測(cè)定但該方法簡(jiǎn)便、快速、重現(xiàn)性較好，但存在前處理步驟多，排除干擾較困難，數(shù)據(jù)準(zhǔn)確度較差等不足3分光光度法玉屏風(fēng)中主要有效成分總皂苷類、總黃酮類和總多糖類均可加顯色劑后用可見(jiàn)分光光度法測(cè)定，其中黃酮類成分含有共軛雙鍵，在紫外區(qū)有特征吸收，可直接用紫外分光光度法分析，但前者使用較多自然科學(xué)版)第zz卷周春權(quán)等7將玉屏風(fēng)生藥水煮，

11、濃縮，醇沉得到的粗多糖，以葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)品，采用改良的苯酚硫酸法進(jìn)行測(cè)定，得出玉屏風(fēng)中粗多糖的含量為5793，相關(guān)系數(shù)09987，隨后的藥理研究表明，玉屏風(fēng)的粗多糖對(duì)荷瘤小鼠的腫瘤生長(zhǎng)有一定的抑制作用，同時(shí)對(duì)動(dòng)物免疫功能有升高的趨勢(shì)陸曉和等2在538nm處，采用薄層分析一紫外分光光度法，以黃芪甲苷含量為指標(biāo)，優(yōu)選出玉屏風(fēng)生藥顆粒的制備工藝是顆粒為5目，加2O倍水煎煮3次，每次25arin；然后通過(guò)對(duì)玉屏風(fēng)3種不同劑型的煎出率進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)生藥顆粒劑中黃芪甲苷含量和煎出率均高于生藥飲片湯劑和免煎顆粒劑由于玉屏風(fēng)中化學(xué)成分復(fù)雜，黃芪甲苷含量測(cè)定采用一般提取純化法無(wú)法消除干擾，因此依其化學(xué)性質(zhì)，他們采

12、用氫氧化鉀溶液皂化后提取，結(jié)果消除了干擾劉煥蓉等1婦將玉屏風(fēng)水煎，得水提液；藥渣再用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為8O的乙醇煎煮，得醇提液；水提液經(jīng)樹(shù)脂純化得純化液，然后利用紫外可見(jiàn)分光光度法分別于560，500，490nm處測(cè)定總皂苷、總黃酮、總多糖的含量，通過(guò)比較不同提取液中有效成分的含量，考察了藥渣再提和樹(shù)脂純化對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響結(jié)果顯示，經(jīng)過(guò)樹(shù)脂純化與藥渣再提后總皂苷、總黃酮、總多糖的相對(duì)含量是未經(jīng)樹(shù)脂純化水提液的18倍，因此表明，大孔樹(shù)脂作為一種新的分離技術(shù)可用于玉屏風(fēng)中有效成分的富集和純化，并且認(rèn)為對(duì)水提液進(jìn)行純化，實(shí)質(zhì)上是洗掉了粗提液中可溶于水的雜質(zhì)，有效成分的增加主要是來(lái)自于對(duì)的藥渣再次提取，所以藥

13、渣重提是很有必要的王琳等28以黃芪甲苷為對(duì)照品，于538nm波長(zhǎng)處，采用紫外分光光度法，考察了質(zhì)量分?jǐn)?shù)為6O的乙醇超聲提取、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95的乙醇超聲提取和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為8O的乙醇回流提取三種工藝所得玉屏風(fēng)散中黃芪甲苷的含量，得出質(zhì)量分?jǐn)?shù)為8O的乙醇回流提取為最佳工藝，不同批次玉屏風(fēng)散提取物中黃芪甲苷得含量在96以上，RSD小于2實(shí)驗(yàn)表明該方法簡(jiǎn)單、快速、靈敏、重現(xiàn)性好，適于醫(yī)院對(duì)制劑的質(zhì)量控制文獻(xiàn)7，27，ii，283采用分光光度法測(cè)定黃芪甲苷是利用香草醛在濃硫酸或冰醋酸作用下與黃芪甲苷顯色反應(yīng)，其優(yōu)點(diǎn)是分析速度快、成本低，但由于玉屏風(fēng)復(fù)方化學(xué)成分復(fù)雜，空白值較高，干擾嚴(yán)重，所以該方法的應(yīng)用受到一

14、定限制另外，有文獻(xiàn)利用在濃磷酸條件下，黃芪甲苷與香草醛反應(yīng)的產(chǎn)物具有熒光特性2，以及在硫酸條件下黃芪甲苷與茴香酸反應(yīng)的產(chǎn)物具有熒光特性3。，采用熒光光度法測(cè)定了黃芪藥材中黃芪甲苷的含量實(shí)驗(yàn)表明該方法靈敏度高、選擇性好、線性范圍寬、檢出限低、操作簡(jiǎn)便，可直接用于黃芪生藥、中藥復(fù)方、黃芪制劑以及含藥血清等多種樣品的測(cè)定，方法無(wú)干擾熒光光度法既克服了薄層掃描法操作繁瑣，準(zhǔn)確度相對(duì)較差的缺點(diǎn)，又避免了使用HPLCUV法黃芪甲苷僅在200nm處有末端吸收的不足，也可用于玉屏風(fēng)中黃芪甲苷的含量測(cè)定4結(jié)論本文綜述和比較了近年來(lái)白花蛇舌草中有效成分含量測(cè)定較為常用的方法，包括高效液相色譜法、薄層掃描法、分光光

15、度法，這些方法各具特點(diǎn)和一定的適用范圍其中高效液相色譜法準(zhǔn)確度高，特別是ELSD檢測(cè)器的使用，彌補(bǔ)了黃芪甲苷含量測(cè)定時(shí)使用紫外檢測(cè)器的不足，因此在玉屏風(fēng)質(zhì)量控制中使用最多；同時(shí)還可以嘗試使用示差折光檢測(cè)器，該檢測(cè)器也可以彌補(bǔ)紫外檢測(cè)器的不足，而且價(jià)格比蒸發(fā)光檢測(cè)器低廉薄層掃描法準(zhǔn)確度不如高效液相色譜法，但簡(jiǎn)便、快速、重現(xiàn)性較好，因此多用于工藝研究，如嚴(yán)格控制色譜條件，也可用于玉屏風(fēng)的質(zhì)量控制雖然紫外可見(jiàn)分光光度法成本低，分析速度快，但是玉屏風(fēng)化學(xué)成分復(fù)雜，干擾較嚴(yán)重，因此在制備及提取工藝比較和劑型改革等研究中使用較普遍如果將熒光光度法用于玉屏風(fēng)中黃芪甲苷含量的測(cè)定，則可部分彌補(bǔ)紫外可見(jiàn)分光光度

16、法的不足相信隨著一些新方法的應(yīng)用，必將有助于進(jìn)一步完善玉屏風(fēng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)保證人民用藥安全具有十分重要的意義。摘要 阿魏酸是多種中藥的有效成分之一，具有多方面的重要生物學(xué)活性，許多生藥及其制劑均選用阿魏酸的含量作為其質(zhì)量控制指標(biāo)，本文對(duì)阿魏酸含量測(cè)定方法的研究進(jìn)展作一綜述。隨著含阿魏酸生藥的指紋圖譜和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方面的研究的不斷發(fā)展,簡(jiǎn)便快速、準(zhǔn)確高效的測(cè)定方法也將會(huì)不斷涌現(xiàn),阿魏酸的分離和含量測(cè)定技術(shù)將會(huì)日臻完善,為制劑中阿魏酸的質(zhì)量控制提供更為可靠的依據(jù)。關(guān)鍵詞 阿魏酸；含量測(cè)定Ferulic acid Progress DeterminationLI Quanbin1, HE Kaiyong

17、2, WU Jianping1(1. Hubei College of Traditional Chinese Medicine, Jingzhou 4340202. Hubei institute for Food and Drug control, Wuhan Hubei，Hubei 430071)Abstract Ferulic acid is one of many active ingredients of Chinese medicine, has many important biological activities, many crude drugs and their pr

18、eparations are of ferulic acid as indicators of its quality control, ferulic acid content determination method of research progress are reviewed in this paper.With the ferulic acid containing the fingerprint of crude drug research and quality standard of continuous development, simple and rapid, acc

19、urate efficient determination will continue to emerge,ferulic acid separation and determination of technology will continue to improve for the preparation quality control of ferulic acid to provide a more reliable basis.Keywords Ferulic acid；content determination斯建勇，陳迪華，潘瑞樂(lè)，等白花蛇舌草的化學(xué)成分研究J天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，2

20、006，18：94215劉晶芝，王莉白花蛇舌草化學(xué)成分研究J河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，28(3)：18816周建波，龍斯畢，黃存禮白花蛇舌草的微量元素分析J中國(guó)中藥雜志，1990，15(12)：3617王麗，周誠(chéng)，麥惠珍白花蛇舌草及水線草揮發(fā)性成分研究J中藥材，2003，26(8)：56318劉志剛，羅佳波，陳飛龍不同產(chǎn)地白花蛇舌草揮發(fā)性成分初步研究J中藥新藥與臨床藥理，2005，16(2)：132馬臨，李俊明，陳玉青，等高效液相色譜測(cè)定白花蛇舌草中3，4-二羥基苯甲酸甲酯的含量J時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2009，20(3)：528馬臨，李俊明，陳玉青，等HPLC法測(cè)定白花蛇舌草注射液中3，4-二羥基苯甲酸甲酯的含量J沈陽(yáng)藥科大