《煙草及煙草制品 果膠的測(cè)定 離子色譜法》(報(bào)批稿)

1、ICS 65.160X 87備案號(hào)：中華人民共和國(guó)煙草行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)YCYC/T XXX-2010煙草及煙草制品 果膠的測(cè)定 離子色譜法Tobacco and tobacco productsDetermination of pectinIon chromatographic method （報(bào)批稿）XXXX -XX-XX發(fā)布XXXX -XX-XX實(shí)施國(guó) 家 煙 草 專 賣 局 發(fā) 布前 言請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些專利的責(zé)任。本標(biāo)準(zhǔn)由國(guó)家煙草專賣局提出。本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)煙草標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)卷煙分技術(shù)委員會(huì)（SAC/TC144/SC1）歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：安徽中

2、煙工業(yè)公司、上海煙草（集團(tuán)）公司、江西中煙工業(yè)有限責(zé)任公司、廣東中煙工業(yè)有限責(zé)任公司。 本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：陳開波、徐迎波、王程輝、瞿先中、孫文梁、廖堃、胡靜。煙草及煙草制品 果膠的測(cè)定 離子色譜法1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了煙草及煙草制品中果膠的離子色譜測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于煙草及煙草制品中果膠的測(cè)定。本方法測(cè)定果膠的檢出限為0.27mg/g，定量限為0.90 mg/g。2 規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法YC/T 3

3、1 煙草及煙草制品 試樣的制備和水分測(cè)定 烘箱法3 原理采用乙醇除去試樣中糖類等干擾物質(zhì)，酸化后使用果膠酶分別酶解酸化液和殘?jiān)?，酶解液通過離子交換分離后，采用電化學(xué)檢測(cè)器定量測(cè)定半乳糖醛酸。果膠含量以半乳糖醛酸含量計(jì)。4 試劑除特殊要求外，均應(yīng)使用分析純?cè)噭畱?yīng)符合GB/T6682中一級(jí)水的規(guī)定。4.1 半乳糖醛酸，含量97%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）。4.2 氫氧化鈉溶液，50%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）。4.3 無水乙酸鈉，優(yōu)級(jí)純。4.4 乙醇溶液，80%（體積分?jǐn)?shù)）。4.5 苯甲酸溶液，0.1%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）。4.6 鹽酸溶液，0.05 mol/L。4.7 乙酸-乙酸鈉緩沖溶液，0.1 mol/L，pH 4.0。4

4、.8 果膠酶，30 u/mg。來源：Aspergillus niger。注：1個(gè)酶活力單位（u）定義為可在pH 3.5、55°C下每小時(shí)水解果膠生成1 mg半乳糖醛酸。4.9 果膠酶溶液，300 u/mL，由果膠酶（4.8）和乙酸-乙酸鈉緩沖溶液（4.7）配制，即配即用。4.10 標(biāo)準(zhǔn)溶液4.10.1 半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液稱取30 mg半乳糖醛酸（4.1），精確至0.1 mg，以苯甲酸溶液(4.5)溶解，并定容至100 mL容量瓶中。該儲(chǔ)備液置于4°C下保存，有效期為6個(gè)月。取用時(shí)，應(yīng)放置至常溫后使用。4.10.2 半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)系列溶液分別移取50.0 mL、100.0

5、mL、250.0 mL、500.0 mL和1000.0 mL半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（4.10.1）于100 mL容量瓶中，以苯甲酸溶液(4.5)稀釋并定容至刻度。4.11 流動(dòng)相 一級(jí)水作為流動(dòng)相A。 移取50 %氫氧化鈉溶液（4.2）13.1 mL，用水稀釋定容至1 L，作為流動(dòng)相B。 稱取82 ±0.5 g無水乙酸鈉(4.3)，水溶解后定容至1 L，作為流動(dòng)相C。5 儀器及材料5.1 旋風(fēng)式樣品磨，40目篩。5.2 分析天平，精確至 0.1 mg。5.3 真空抽濾裝置。5.4 定量濾紙。5.5 電熱恒溫水浴鍋。5.6 水浴振蕩器。5.7 離子色譜儀，配置四元梯度泵和電化學(xué)檢測(cè)器。5

6、.8糖離子交換柱：固定相為苯乙烯-二乙烯基苯共聚物，官能團(tuán)為功能性季銨鹽；分析柱，2 mm×250 mm，保護(hù)柱2 mm×50 mm。6 樣品制備按照YC/T 31制備試樣并測(cè)定水分含量。7 分析步驟7.1 樣品處理7.1.1 除糖稱取試樣約1 g，精確至0.1 mg，置于150 mL磨口三角瓶中，加入100 mL乙醇溶液（4.4），在100 °C水浴中回流1.0 h，使用定量慢速濾紙趁熱抽濾。7.1.2 酸化將濾紙及殘?jiān)D(zhuǎn)移至150 mL磨口三角瓶中。使用100 mL鹽酸溶液（4.6）清洗殘留在布氏漏斗壁上的試樣殘?jiān)⑥D(zhuǎn)移至三角瓶中，在100 °C水

7、浴中回流1 h，使用定量中速濾紙趁熱抽濾，使用一級(jí)水將濾液定容至250 mL，得到溶液A。7.1.3 酶水解7.1.3.1 殘?jiān)杆鈱⒊闉V后濾紙及殘?jiān)D(zhuǎn)移至150 mL磨口三角瓶中，殘留在布氏漏斗壁上的試樣殘?jiān)?，使?00 mL乙酸-乙酸鈉緩沖溶液（4.7）清洗并轉(zhuǎn)移至三角瓶中，加入1.0mL果膠酶溶液（4.9），在55 °C水浴中震蕩2h，抽濾，使用一級(jí)水將濾液定容至250 mL，得到溶液B。7.1.3.2 酸化液酶水解取1.0mL溶液A于100 mL磨口三角瓶中，依次加入20 mL乙酸-乙酸鈉緩沖溶液（4.7）和1.0 mL果膠酶溶液（4.9），在55 °C水浴中震蕩

8、1h。酶解液轉(zhuǎn)移至250 mL容量瓶中，加入1.0 mL溶液B，使用苯甲酸溶液(4.5)定容至刻度，得到溶液C。該溶液經(jīng)過0.45 mm濾膜后待離子色譜分析用。7.2 離子色譜分析柱溫：30 °C；流速：0.25 mL/min；進(jìn)樣量：25 µL；淋洗液洗脫程序見表1；檢測(cè)器檢測(cè)電位波形見表2。表1 淋洗液洗脫程序時(shí)間min流動(dòng)相A% 流動(dòng)相B %流動(dòng)相C%0.0025601515.00256015表2 檢測(cè)器檢測(cè)電位波形時(shí)間s電壓V積分狀態(tài)0.000.100.200.10開始0.400.10結(jié)束0.41-2.000.42-2.000.430.600.44-0.100.50

9、-0.107.3 制作標(biāo)準(zhǔn)工作曲線根據(jù)半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)系列溶液（4.10.2）的濃度及其響應(yīng)峰面積，建立半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，工作曲線線性相關(guān)系數(shù)應(yīng)不小于0.999。7.4 樣品測(cè)定根據(jù)保留時(shí)間定性和峰面積定量，測(cè)定溶液C（7.1.3.2）中的半乳糖醛酸含量，同時(shí)做一組空白試驗(yàn)以扣除干擾。煙草樣品水解液離子色譜圖參見附錄A。7.5 結(jié)果的計(jì)算與表述樣品中的半乳糖醛酸含量按照式（1）進(jìn)行計(jì)算，果膠含量以半乳糖醛酸計(jì)。X=250´（C-C0）´V×100%（1）m´ (1-W) 式中：X試樣中的果膠含量，%；C測(cè)試樣品溶液中半乳糖醛酸濃度，單位為毫克每升（m

10、g/L）；C0空白樣品溶液中半乳糖醛酸濃度，單位為毫克每升（mg/L）；V溶液C的體積，單位為升（L）；m試樣質(zhì)量，單位為毫克（mg）；W試樣含水率，%；取兩次平行測(cè)定值的平均值作為樣品的測(cè)定結(jié)果，兩次平行測(cè)定值間的相對(duì)平均偏差不應(yīng)大于5%，結(jié)果保留至小數(shù)點(diǎn)后1位。8 回收率本方法的回收率試驗(yàn)結(jié)果見表4。 表4 回收率試驗(yàn)結(jié)果 以%表示樣品名稱樣品含量加標(biāo)含量測(cè)定值回收率烤煙梗絲10.53.914.295%烤煙煙葉8.13.912.1103%白肋煙煙葉7.93.911.9103%香料煙煙葉7.13.910.895%烤煙型卷煙8.13.911.895%混合型卷煙9.13.912.997%烤煙梗絲10.57.317.9101%烤煙煙葉8.07.715.7100%白肋煙煙葉7.97.716.0105%香料煙煙葉7.17.714.697%烤煙型卷煙8.17.716.1104%混合型卷煙9.17.716.596%烤煙梗絲10.514.824.997%烤煙煙葉8.115.424.0103%白肋煙煙葉8.014.923.4103%香料煙煙葉7.114.921.395%烤煙型卷煙8.114.922.899%混合型卷煙9.114.923.395%9 檢驗(yàn)報(bào)告檢驗(yàn)報(bào)告應(yīng)包括以下內(nèi)容：識(shí)別被測(cè)樣品需要的所有信息；參照本標(biāo)準(zhǔn)所使用的試驗(yàn)方法；檢測(cè)結(jié)果，包括各單次