養(yǎng)肝利膽顆粒對(duì)小鼠四氯化碳肝損傷的保護(hù)作用(1)

1、    養(yǎng)肝利膽顆粒對(duì)小鼠四氯化碳肝損傷的保護(hù)作用(1)     目的：觀察養(yǎng)肝利膽顆粒對(duì)小鼠四氯化碳（carbon tetrachloride, CCl4）肝損傷的影響，并探討其作用機(jī)制。方法：采用腹腔注射CCl4制作小鼠慢性肝損傷模型。造模3周后分別予以養(yǎng)肝利膽顆粒小、中、大劑量，膽寧片及聯(lián)苯雙酯治療4周，檢測(cè)各組血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（alanine aminotransferase, ALT），天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（aspartate aminotransferase, AST），肝組織超氧化物歧化酶（sup

2、eroxide dismutase, SOD）活性和丙二醛（malondialdehyde, MDA）含量。結(jié)果：養(yǎng)肝利膽顆?？娠@著降低小鼠CCl4肝損傷模型血清ALT、AST的水平和肝組織MDA的含量，明顯升高肝組織SOD的水平。結(jié)論：養(yǎng)肝利膽顆粒對(duì)CCl4所致小鼠肝損傷有明顯的改善作用，其作用機(jī)制可能與減輕肝內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)有關(guān)。關(guān)鍵詞 養(yǎng)肝利膽顆粒; 四氯化碳; 超氧化物歧化酶; 丙二醛Protective effects of Yanggan Lidan Granules on carbon tetrachlorideinduced liver damage in miceABSTRA

3、CT Objective: To observe the protective effects of Yanggan Lidan Granules (YGLDG) on carbon tetrachloride (CCl4)induced liver damage in mice and to find out its mechanism. Methods: A model of chronic liver damage was established in mice by intraperitoneal injection of CCl4. After three weeks, those

4、model mice were treated with low, medium, highdose YGLDG, Danning Tablets and bifendate respectively for four weeks. Then the levels of serum alanine aminotransferase (ALT) and aspartate aminotransferase (AST), as well as the contents of superoxide dismutase (SOD) and malondialdehyde (MDA) in liver

5、tissues were detected. Results: YGLDG could significantly reduce the levels of serum ALT and AST in model mice, and the content of MDA was obviously decreased while the content of SOD was increased in liver tissue. Conclusion: The therapeutic effect of YGLDG on mice with CCl4induced liver damage is

6、to relieve the seriousness of liver damage, and its mechanism may relate to reducing peroxidation activity in liver tissue.KEY WORDS Yanggan Lidan Granules; carbon tetrachloride; superoxide dismutase; malondialdehyde目前，具有保肝、抗肝損傷作用的中藥有效成分或復(fù)方，如甘草甜素、聯(lián)苯雙酯、當(dāng)飛利肝寧和黃芪注射液等雖在臨床上被廣泛應(yīng)用，但經(jīng)國(guó)際認(rèn)可的該類藥物均非源自我國(guó)1。養(yǎng)肝利膽顆粒

7、（Yanggan Lidan Granules, YGLDG）具有養(yǎng)肝柔肝、利膽止痛的功效，臨床上治療慢性膽道感染（慢性膽囊炎、慢性膽管炎）證屬肝陰不足者有一定的療效。我們觀察了養(yǎng)肝利膽顆粒對(duì)小鼠四氯化碳（carbon tetrachloride, CCl4）慢性肝損傷的保護(hù)作用，以期為臨床用藥提供依據(jù)并對(duì)其作用機(jī)制作進(jìn)一步的探討。1 材料與方法1.1 藥物與試劑 （1）養(yǎng)肝利膽顆粒（干膏粉），主成分：白芍、枸杞子、甘草等，四川美大康藥業(yè)股份有限公司提供，批號(hào)020301，每克干膏粉相當(dāng)于4 g生藥；（2）膽寧片（Danning Tablets, DNT），主成分：人工牛黃、水飛薊素、鹽酸小檗

8、堿、延胡索、大黃、蒲公英、金錢草、薄荷油等，250 mg/片，上海中藥制藥一廠生產(chǎn)，批號(hào)000715；（3）聯(lián)苯雙酯片，25 mg/片，上海市醫(yī)藥股份有限公司天平制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)248004；（4）CCl4，分析純，中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司生產(chǎn)，批號(hào)W20021218；（5）橄欖油，化學(xué)純，中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上海化學(xué)試劑公司生產(chǎn)，批號(hào)F20020819；（6）超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）和丙二醛（malondialdehyde, MDA）測(cè)試盒，南京建成生物工程研究所提供，批號(hào)均為20030809；（7）考馬斯亮藍(lán)蛋白測(cè)定試劑盒，南京建成生物工程研究所提供

9、，批號(hào)20030814。1.2 動(dòng)物 昆明種雄性小鼠，體質(zhì)量1822 g，上海中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：醫(yī)動(dòng)字02243號(hào)。1.3 實(shí)驗(yàn)方法1.3.1 藥物配制 （1）用蒸餾水溶解養(yǎng)肝利膽干膏粉，配制成小劑量（含0.18 g生藥/ml）、中劑量（含0.36 g生藥/ml）及大劑量（含0.72 g生藥/ml）混懸液。（2）用蒸餾水溶解膽寧片，配制成濃度為0.11 g/ml的混懸液。（3）用蒸餾水溶解聯(lián)苯雙酯片，配制成濃度為2.5mg/ml的混懸液。（4）用橄欖油溶解CCl4，配制成7% （體積比）CCl4溶液。1.3.2 動(dòng)物分組和造模 77只小鼠隨機(jī)分為正常組，模型組，YGLDG小

10、、中、大劑量組，膽寧片組和聯(lián)苯雙酯組，每組11只。采用CCl4注射致小鼠肝損傷模型。正常組小鼠予以腹腔注射生理鹽水，其余各組均予以腹腔注射7% CCl4溶液，10 ml/kg，1周2次，連續(xù)7周。造模期間不限飲食量，自由飲水。造模第3周末，小鼠禁食不禁水16 h，摘眼球取血后隨機(jī)處死每組各2只小鼠，測(cè)定血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（alanine aminotransferase, ALT），取肝組織作HE染色，行病理學(xué)檢查，結(jié)果顯示造模成功（造模小鼠血清ALT較正常組升高近10倍，病理結(jié)果顯示造模小鼠肝小葉外圍有多層次肝細(xì)胞壞死伴炎細(xì)胞浸潤(rùn)）。1.3.3 藥物處理 造模第4周起，YGLDG小、中、大

11、劑量組分別予以0.18、0.36、0.72 g/ml的養(yǎng)肝利膽混懸液灌胃，膽寧片組予以0.11 g/ml的膽寧片混懸液灌胃，聯(lián)苯雙酯組予以2.5mg/ml的聯(lián)苯雙酯混懸液灌胃，每組均按10 ml/kg給藥，1次/d，連續(xù)4周。正常組和模型組則以等量生理鹽水灌胃，1次/d，連續(xù)4周。1.3.4 標(biāo)本采集和指標(biāo)測(cè)定 末次給藥或生理鹽水后，小鼠禁食不禁水16 h，摘眼球取血，3 000 r/min離心15 min，取血清檢測(cè)ALT和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（aspartate aminotransferase, AST）；取肝組織用冷生理鹽水制成10%肝勻漿，檢測(cè)肝組織總蛋白（考馬斯亮藍(lán)法）、SOD（黃

12、嘌呤氧化酶法）和MDA（硫代巴比妥酸比色法）的含量。1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料均數(shù)用x±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。    2 結(jié)果2.1 對(duì)小鼠血清ALT和AST的影響 與正常組比較，模型組小鼠血清ALT和AST水平明顯升高（P<0.01）。與模型組比較，YGLDG大、中、小劑量組血清ALT和AST水平均明顯降低，大劑量組的效應(yīng)尤其明顯（P<0.01）；聯(lián)苯雙酯組血清ALT和AST水平亦明顯下降（P<0.01）。提示養(yǎng)肝利膽顆粒對(duì)小鼠CCl4肝損傷模型血清ALT和AST水平升高有明

13、顯的拮抗作用。見(jiàn)表1。            作者：尤圣富，鄭培永，季光，魏華鳳，趙婕，朱培庭【關(guān)鍵詞】養(yǎng)肝利膽顆粒摘目的：觀察養(yǎng)肝利膽顆粒對(duì)小鼠四氯         本篇論文是由3COME文檔頻道的網(wǎng)友為您在網(wǎng)絡(luò)上收集整理餅投稿至本站的，論文版權(quán)屬原作者，請(qǐng)不用于商業(yè)用途或者抄襲，僅供參考學(xué)習(xí)之用，否者后果自負(fù)，如果此文侵犯您的合法權(quán)益，請(qǐng)聯(lián)系我們。表1 各組小鼠血清ALT、AST及肝組織SOD

14、、MDA（略）Tab 1 Serum ALT, AST and SOD, MDA in liver tissues of mice in different groups*P<0.05, *P<0.01, vs normal group; P<0.05, P<0.01, vs untreated group2.2 對(duì)小鼠肝組織SOD和MDA的影響 與正常組比較，模型組小鼠肝組織SOD明顯下降（P<0.05），MDA明顯升高（P<0.01）。與模型組比較，YGLDG大、中劑量組肝組織SOD水平均有明顯升高（P<0.05或P<0.01），聯(lián)苯雙酯組S

15、OD水平亦有明顯升高（P<0.01）。與模型組比較，YGLDG大、中、小劑量組肝組織MDA水平均有明顯降低（P<0.05），聯(lián)苯雙酯組MDA水平亦有明顯下降（P<0.01）。提示養(yǎng)肝利膽顆粒具有顯著的抗脂質(zhì)過(guò)氧化作用。見(jiàn)表1。3 討論在正常情況下，生物體內(nèi)活性氧自由基的產(chǎn)生和清除維持在一定水平，過(guò)多或過(guò)少均會(huì)給機(jī)體造成損害2。自由基與脂質(zhì)過(guò)氧化物極易對(duì)肝臟造成損害。CCl4在體內(nèi)對(duì)肝臟的親和力很強(qiáng)，在肝細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中經(jīng)細(xì)胞色素P450依賴性混合功能氧化酶的代謝，生成三氯甲烷自由基、二氯甲烷自由基和過(guò)氧化三氯甲烷自由基，可與細(xì)胞膜大分子共價(jià)結(jié)合，使酶的功能喪失，細(xì)胞膜發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧

16、化，破壞肝細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能完整，使蛋白質(zhì)合成障礙；并通過(guò)抑制細(xì)胞膜上Ca2 泵的活性，使Ca2 離子大量?jī)?nèi)流，導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷，從而使胞漿內(nèi)轉(zhuǎn)氨酶滲入血液中3,4。本實(shí)驗(yàn)證實(shí)，CCl4可使小鼠血清ALT和AST活性明顯上升，肝組織SOD水平明顯下降伴MDA含量明顯升高。養(yǎng)肝利膽顆粒具有養(yǎng)肝柔肝、利膽止痛之功，主治慢性膽道感染（慢性膽囊炎、慢性膽管炎）證屬肝陰不足者。方中白芍養(yǎng)血柔肝、緩中止痛，為君藥。藥品化義云：“白芍藥味苦能補(bǔ)陰，略酸能收斂，因酸走肝，暫用之生肝，肝性欲散惡斂，又取酸以抑肝，故謂白芍能補(bǔ)復(fù)能瀉以此瀉肝之邪，而緩中焦脾氣，難經(jīng)所謂損其肝者，緩其中?！爆F(xiàn)代藥理學(xué)研究顯示，白芍中的

17、白芍總苷有誘生干擾素的作用，對(duì)小鼠的免疫應(yīng)答具有調(diào)節(jié)作用5；白芍醇提取物對(duì)大鼠甲醛性急性炎癥及棉球肉芽腫等幾種炎癥模型均有顯著的抑制作用。方中枸杞子性味甘、平，有滋補(bǔ)肝腎、益精明目之功，主有效成分為甜菜堿。有研究報(bào)道：CCl4引起小鼠急性肝損傷24 h后，經(jīng)口服或腹腔內(nèi)給予甜菜堿，可使血清ALT下降，溴脫氧鳥苷摻入肝細(xì)胞核DNA的量增加6。甜菜堿對(duì)CCl4所致小鼠肝細(xì)胞內(nèi)脂肪沉積有輕微的抑制作用，并可促進(jìn)肝細(xì)胞再生。本實(shí)驗(yàn)中，養(yǎng)肝利膽顆粒具有降低CCl4所致肝損傷小鼠血清ALT、AST水平，降低肝組織MDA含量以及升高SOD活性的作用。提示養(yǎng)肝利膽顆粒對(duì)小鼠CCl4肝損傷的改善作用，可能與抗脂

18、質(zhì)過(guò)氧化有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)中設(shè)立了中藥與西藥陽(yáng)性對(duì)照組，確保實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的科學(xué)性、合理性。聯(lián)苯雙酯的降酶作用是公認(rèn)的，但在臨床上應(yīng)用有其局限性，該藥本身不能針對(duì)病因治療，即治標(biāo)不治本，停藥后肝功能極易反跳，因而有研究中藥保肝作用的必。中藥膽寧片具有疏肝利膽、清熱通下的功用，主治肝郁氣滯型的慢性膽囊炎，膽囊結(jié)石、慢性膽管炎、膽總管結(jié)石、肝膽管結(jié)石、術(shù)后膽管結(jié)石，屬濕熱未清者。膽寧片設(shè)為陽(yáng)性對(duì)照藥，一方面該藥是朱培庭教授多年臨床經(jīng)驗(yàn)心得，其保肝作用是確切的，另一方面也從不同中醫(yī)治法的保肝作用做個(gè)比較。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果看膽寧片降酶作用不明顯，因本實(shí)驗(yàn)在給藥同時(shí)還繼續(xù)造模，可能是膽寧片劑量起效濃度未完全達(dá)到造成的；養(yǎng)肝利膽顆粒三個(gè)劑量組的劑量依賴性效應(yīng)不明顯，可能在低劑量時(shí)該藥已起效，因在給藥同時(shí)還繼續(xù)造模，可能造成起效之后有一個(gè)平臺(tái)期，這在以后的研究中可以在此基礎(chǔ)上做量效關(guān)系的觀察。參考文獻(xiàn)1 劉 平. 理論聯(lián)系實(shí)際，基礎(chǔ)結(jié)合臨床，促進(jìn)中西醫(yī)結(jié)合肝臟病學(xué)科發(fā)展J. 中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報(bào), 2003, 1(2): 8183.2 陳 瑗, 周 玫. 自由基醫(yī)學(xué)M. 北京: 人民軍醫(yī)出版社, 199