實驗計數(shù)法測定細胞生長曲線

1、實驗內(nèi)容：計數(shù)法測定細胞生長曲線實驗目的：學習細胞計數(shù)的方法；熟悉測定生長曲線的基本原理、方法，了解其應(yīng)用。實驗原理：一般細胞傳代之后，經(jīng)過短暫的懸浮后貼壁，隨后度過長短不一的潛伏期，即進入大量分裂的指數(shù)生長期，在達到飽和密度后，細胞停止生長，進入平頂期，然后退化衰老。典型的生長曲線即可分為潛伏期、指數(shù)生長期、平頂期及退化衰老四個部分，其中的三個不同生長時相（潛伏期、指數(shù)生長期和平頂期）是每個細胞系所共有的特征。通過測定生長曲線，不僅可以了解培養(yǎng)細胞生物學特性的基本參數(shù)、測定細胞絕對生長數(shù)、判斷細胞活力，而且也可用于測定藥物等外來因素對細胞生長的影響。本實驗采用計數(shù)法測定細胞生長曲線，通過連續(xù)

2、對細胞計數(shù)（通常為7d，一般應(yīng)每次計數(shù)3瓶細胞取平均值），然后以存活細胞數(shù)對培養(yǎng)時間作圖，即得該種細胞的生長曲線。儀器、材料和試劑：1、 儀器：CO2 培養(yǎng)箱、超凈工作臺、倒置顯微鏡、血球計數(shù)板2、 材料：培養(yǎng)瓶、試管、吸管、移液管、廢液缸、HeLa細胞、蓋玻片、酒精 燈3、 試劑：培養(yǎng)基（含小牛血清）、%胰蛋白酶實驗步驟：1、 細胞懸液制備：取生長良好接近匯合的HeLa細胞，胰酶消化，再加新鮮培養(yǎng)基制成細胞懸液后計數(shù)。2、 接種：根據(jù)細胞計數(shù)結(jié)果，按每瓶5×104個接種細胞（加3mL×104個）作傳代培養(yǎng)（理論上應(yīng)該每人接種21瓶細胞，每天取3瓶計數(shù)，但實際每人只接種7瓶

3、）。3、 計數(shù)：24h后開始作細胞計數(shù)，以后每隔24h計數(shù)一次，連續(xù)計數(shù)7天。4、 繪圖：根據(jù)計數(shù)結(jié)果，繪制HeLa細胞生長曲線。結(jié)果與討論：1、 細胞計數(shù)結(jié)果如下：天數(shù)01234567細胞數(shù)（萬/瓶）12246693321318210細胞數(shù)（萬/mL）482231107106702、 繪制生長曲線如下： 3、分析與討論 由上圖可以看出，實際所得生長曲線與理論生長曲線有一定差距，主要表現(xiàn)在潛伏期和倍增時間不明顯。這可能是由于計數(shù)誤差造成的。 、理論上應(yīng)該每人接種21瓶細胞，每天取3瓶計數(shù)，但實際每人只接種8瓶，每天僅計數(shù)一瓶細胞，無平行樣品取平均值來消除誤差。 、每瓶細胞也沒有重復計數(shù)2-3次。 、未做染色，有時死活細胞區(qū)分不清