制作膠體金試紙的硝酸纖維素膜選擇及應(yīng)用技巧-(完)

1、制作膠體金試紙的硝酸纖維素膜選擇及應(yīng)用技巧 (完) 硝酸纖維素膜又稱為NC膜, 在膠體金試紙中用做C/T線的承載體,同時(shí)也是免疫反應(yīng)的發(fā)生處.所以NC膜成為該試驗(yàn)中最重要的耗材,而由于其屬于非標(biāo)準(zhǔn)器件,基本上每個(gè)項(xiàng)目開(kāi)始階段都會(huì)遇到如何選擇合適的NC膜的問(wèn)題.同時(shí)也存在是否要對(duì)NC膜進(jìn)行后期處理及如何處理的討論. 一. NC膜的生產(chǎn)原理這個(gè)雖然看上去屬于生產(chǎn)廠商的事情,但是GMP有個(gè)觀點(diǎn)是強(qiáng)調(diào)對(duì)過(guò)程的控制才會(huì)有好的結(jié)果.那么只有了解NC膜的大致生產(chǎn)過(guò)程和基本原理才能更好的掌握這種材料的特性,最終制作出滿意的試紙.你了解嗎?我找了很久,終于找到一些比較直觀的圖片,大家可以到伊能公司的官

2、方網(wǎng)站看到 生產(chǎn)NC膜的過(guò)程和普通的造紙過(guò)程是非常類(lèi)似的,我們可以借鑒對(duì)造紙的認(rèn)識(shí)來(lái)理解.首先,勻漿配比購(gòu)買(mǎi)回的原料硝酸纖維素粒子是一種非常普遍的有機(jī)化學(xué)物,溶解形成混漿,在該漿體內(nèi),會(huì)加入一定比例的試劑來(lái)調(diào)整最后形成的膜的性質(zhì),一般是一個(gè)試劑配方,主要包含表面活性劑/高分子聚合物/鹽離子/成型劑等溶解在一個(gè)緩沖體系內(nèi). 不同的廠家加入的溶液配方不一樣,直接導(dǎo)致了在產(chǎn)品的差異.其次,滾筒鋪膜配好的勻漿通過(guò)滾筒,形成了一張薄膜,平攤在十分光滑的平面載體上.這個(gè)和造紙的過(guò)程是非常相似的.最后,成型在勻漿內(nèi)的成型劑開(kāi)始揮發(fā),膜逐步干燥成型.同時(shí)在這個(gè)過(guò)程中由于溫度比較高,有些廠家在這個(gè)過(guò)程采取了在密

3、閉腔體內(nèi)成型,同時(shí)補(bǔ)充配方溶液的形式,來(lái)避免一些有效成分的蒸發(fā).切割出產(chǎn)品通過(guò)以上步驟生產(chǎn)出來(lái)的膜是呈一個(gè)寬度極大的產(chǎn)品,寬度的大小直接和滾筒的大小相關(guān),滾筒越大生產(chǎn)越方便,但設(shè)備的成本也越高.寬膜要經(jīng)過(guò)切割才能成為我們購(gòu)買(mǎi)到的25mm或18mm(或20mm)寬,而長(zhǎng)度上,成品卷膜和寬膜的長(zhǎng)度是相同的.理論上可以讓廠家切成你需要的任意寬度,但這樣會(huì)造成原料的浪費(fèi)和人力成本的增加,后來(lái)廠商在和試紙生產(chǎn)廠家的協(xié)調(diào)過(guò)程中,綜合用料成本和生產(chǎn)便利性基本確定了上面說(shuō)的寬度,以次為標(biāo)準(zhǔn).關(guān)于不同寬度的用途差異,稍后詳述.從生產(chǎn)的過(guò)程,我們可以得知, NC膜本身是已經(jīng)添加了表面活性劑來(lái)改善親水能力,而且已經(jīng)

4、存在有一定的緩沖系統(tǒng)(雖然對(duì)紙條測(cè)試影響不會(huì)很大).對(duì)后面談到的一些問(wèn)題就比較容易理解.二.NC膜的供應(yīng)商及現(xiàn)狀現(xiàn)在有銷(xiāo)售的NC膜品牌型號(hào)如下:MILLIPORE(美國(guó)), M135(有背襯/無(wú)背襯兩種) M180(有背襯/無(wú)背襯兩種)WHATMAN and S&S, Immunopore RP, 100 sec/4cm, 帶被襯, CT線不會(huì)擴(kuò)散, 很集中, 背景干凈. 適用于各種test. (只有25mm x 50M); PuraBind R, 140sec/4cm, 不帶被襯, 適用于小分子競(jìng)爭(zhēng)test等. (20/25mm x 50M)SARTORIUS(德國(guó)), CN140伊

5、能(國(guó)產(chǎn)), 8um 6umMDI(印度), 8um 6um說(shuō)到這些供應(yīng)商,不得不談?wù)劙l(fā)展的歷史. S&S是膜行業(yè)的鼻祖,這點(diǎn)所有的膜公司都承認(rèn).millipore,SARTORIUS和whatman都是后輩, 我的理解是S&S在市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)的過(guò)程中經(jīng)營(yíng)方式落后,最后被whatman收購(gòu). 就產(chǎn)品質(zhì)量來(lái)說(shuō)S&S的AE99和AE98是非常優(yōu)良的.而MDI是近年才出現(xiàn)的一個(gè)膜公司,可能也是與印度膠體金試紙生產(chǎn)行業(yè)的快速發(fā)展密切相關(guān),其所有的產(chǎn)品都是在印度生產(chǎn),經(jīng)營(yíng)者為父子兩人,父親負(fù)責(zé)技術(shù),兒子進(jìn)行經(jīng)營(yíng).03年我曾測(cè)試過(guò)其樣品,結(jié)果發(fā)現(xiàn)在跑板方面有不均勻波浪現(xiàn)象,且加速穩(wěn)定性試

6、驗(yàn)結(jié)果很不理想.今年初我又收到了一些樣品,情況仍然沒(méi)有太大改善,后來(lái)就不再考慮使用了.國(guó)產(chǎn)膜伊能是在去年開(kāi)始進(jìn)入市場(chǎng)的,主要特點(diǎn)是能降低成本,樣品我也試測(cè)了幾批,性能已經(jīng)與進(jìn)口膜很接近,經(jīng)過(guò)一些有針對(duì)性的優(yōu)化后可以用在HCG產(chǎn)品的生產(chǎn).但不是所有的工廠都能購(gòu)輕易的完成這個(gè)優(yōu)化工作.膜的國(guó)產(chǎn)化是一個(gè)趨勢(shì),但進(jìn)口廠家要實(shí)現(xiàn)國(guó)產(chǎn)化還面臨很大的問(wèn)題,其中廠房設(shè)備的搬遷就是一個(gè)非常大的問(wèn)題.幾家供應(yīng)商的國(guó)內(nèi)聯(lián)絡(luò)人和技術(shù)支持分別是MILLIPORE(美國(guó)), Mrs Yang, harryWHATMAN and S&S, Clark, kevinSARTORIUS(德國(guó)), Mr Xu, Iric

7、伊能(國(guó)產(chǎn)), connie, Mr YangMDI(印度), Ashawant Gupta銷(xiāo)售模式都是直銷(xiāo)式,少量購(gòu)買(mǎi)的情況下要通過(guò)代理商走一下帳.價(jià)格上MILLIPORE與WHATMAN相當(dāng),SARTORIUS便宜一些,國(guó)產(chǎn)膜更便宜一些.印度膜和SARTORIUS價(jià)格相同,基本不用考慮. 在科研市場(chǎng),MILLIPORE使用最多.科研市場(chǎng)由于僅用來(lái)試驗(yàn),所以膜需求量小,不被供應(yīng)商重視. 生產(chǎn)客戶中,MILLIPORE,WHATMAN,SARTORIUS占有量相當(dāng),伊能現(xiàn)在也開(kāi)始有一些工廠客戶了,MDI量最小投訴也最多.三.膜的選擇以上談了該行業(yè)的一些發(fā)展現(xiàn)狀,那么我們大致了解后,回到最關(guān)心的

8、問(wèn)題,如何選擇膜? 經(jīng)常會(huì)遇到的問(wèn)題是,我是做*項(xiàng)目的,我該選擇那類(lèi)膜?這里涉及到一個(gè)膜的分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)問(wèn)題,一個(gè)供應(yīng)商可能提供這個(gè)膜是8um,但另一個(gè)供應(yīng)商告訴你膜是135s的.這之間的區(qū)別與聯(lián)系是什么?um指的是膜孔徑,而從上面膜的生產(chǎn)過(guò)程,我們可以看出,膜的孔徑實(shí)際上是沒(méi)有辦法界定的.由于干燥成型等過(guò)程的非絕對(duì)均一,膜的孔徑也是非均一的.膜孔徑的說(shuō)法實(shí)際上是沿用了一直以來(lái)的一個(gè)形象稱呼.而以秒為單位的定義為,每4cm膜,水的層析時(shí)間是*s.該單位已經(jīng)越來(lái)越被各大廠商所接受,成為了一個(gè)通用的比較標(biāo)準(zhǔn).以下我們將采用s單位來(lái)進(jìn)行交流.換算情況大致為: 8um=135s; 6um=180s.不同秒數(shù)

9、的膜對(duì)反應(yīng)有什么影響呢?首先,我們分析一下液體在膜上的運(yùn)動(dòng)過(guò)程. 一張長(zhǎng)度為4cm的膜, 每隔1cm做一個(gè)標(biāo)記, 當(dāng)液體運(yùn)動(dòng)過(guò)標(biāo)記處時(shí)記錄時(shí)間點(diǎn). 那么你將會(huì)發(fā)現(xiàn)液體在膜上的運(yùn)動(dòng)是呈減速前行的. 而兩張不同秒數(shù)的膜(例如135s, 180s)在同一時(shí)間標(biāo)記點(diǎn)處的運(yùn)動(dòng)速度不同.這個(gè)試驗(yàn)用清水做不好觀察,可以考慮用色素水溶液,非常明顯.那么從這個(gè)試驗(yàn)可以看出,在通過(guò)同一T線噴點(diǎn)位置時(shí), 金溶液通過(guò)的速度是快速膜>慢速膜. 那么通過(guò)速度越快和包被在T線的物質(zhì)反應(yīng)時(shí)間也就越短, 讀數(shù)快, 那么靈敏度也就越低. 反之, 反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng), 讀數(shù)慢, 也就靈敏度高. 同時(shí)還有一個(gè)問(wèn)題是, 反應(yīng)時(shí)間越長(zhǎng),

10、發(fā)生非特異性結(jié)合的可能性就越大, 所以過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的反應(yīng)不一定就能夠真正的提升靈敏度. 所以這里就有一個(gè)讀數(shù)時(shí)間/反應(yīng)靈敏度/非特異性結(jié)合的均衡.其實(shí)我們并沒(méi)有那么多選擇. 經(jīng)過(guò)使用實(shí)踐, 各供應(yīng)商一般都只提供兩個(gè)型號(hào), 就是135s和180s. 雖然看到有些廠家的產(chǎn)品目錄上型號(hào)種類(lèi)繁多,但這兩個(gè)型號(hào)的定貨量就占了95%以上, 其他型號(hào)供貨上也就遠(yuǎn)不如這兩個(gè)型號(hào)來(lái)得順利. 135s一般用在雙抗體夾心法, 180s一般用在競(jìng)爭(zhēng)法. 你所要做的是,先選擇其中的一個(gè)型號(hào), 然后比較不同供應(yīng)商同一個(gè)型號(hào)的差異, 由于前面說(shuō)的添加配方與你的試驗(yàn)條件配合的不同,這個(gè)差異可能大也可能小. 具體要根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果來(lái)確

11、定最后的選擇.我個(gè)人不建議地毯式的測(cè)試不同規(guī)格/不同廠家的膜, 這樣成本高, 成功的幾率也小.四.膜的質(zhì)控方式本節(jié)適合用膜量較大的公司用戶參考.對(duì)于一卷膜可以用上幾個(gè)月的用戶來(lái)說(shuō), 廠家的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)已經(jīng)完全能滿足你的要求,而不需要自己再做相關(guān)的質(zhì)控.膜的質(zhì)控雖屬于原輔料QC職能, 但由于其專(zhuān)業(yè)性強(qiáng), 一般都由小樣調(diào)試人員來(lái)執(zhí)行. 膜入原料庫(kù)后需要進(jìn)行如下檢驗(yàn)工作:1. 查收COA在購(gòu)買(mǎi)時(shí), 供應(yīng)商會(huì)隨產(chǎn)品為每個(gè)lot的膜提供一張紙質(zhì)的出廠質(zhì)量證書(shū), 該證書(shū)被稱為COA. 如果你已經(jīng)購(gòu)買(mǎi)某一批次的膜, 而沒(méi)有索取相應(yīng)的證書(shū), 如果有需要可提供批號(hào)向廠家要求補(bǔ)發(fā). 其實(shí)在很多行業(yè)都有廠商為自己的產(chǎn)品

12、附上COA的習(xí)慣.COA一般只提供給大客戶, 對(duì)小客戶是沒(méi)有意義的.其內(nèi)容主要是廠家在產(chǎn)品出廠時(shí)做過(guò)一些測(cè)試的羅列. 作用可以理解為質(zhì)量憑證和測(cè)試數(shù)據(jù)參考.2. 檢查物理性能膜的物理性能主要是2個(gè)參數(shù), 膜厚度和寬度. 長(zhǎng)度不需要檢測(cè). 使用中可以關(guān)注長(zhǎng)度上是否有斷面重接現(xiàn)象, 斷面多費(fèi)料則多, 少數(shù)發(fā)生. 厚度, 由螺旋測(cè)微尺,選擇幾個(gè)測(cè)量點(diǎn)檢測(cè)后算平均. 膜生產(chǎn)的必測(cè)參數(shù). 主要表現(xiàn)為厚度不均勻影響生物原料在膜上的擴(kuò)散性能, 點(diǎn)出來(lái)的C/T線寬窄不一. 另外也影響爬速.寬度, 普通直尺測(cè)量.物理性能一般都不會(huì)有什么大問(wèn)題. 畢竟檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)客觀, 易把握. 沒(méi)有條件執(zhí)行的廠家可省略.3. 跑水

13、性能樣本采用含有有色食用色素的水溶液, 目的是容易觀測(cè). 需制作一個(gè)簡(jiǎn)易支架.操作: 注入足夠溶液到下部槽內(nèi), 將不同批次膜每隔1cm做一次標(biāo)記(總長(zhǎng)大于4cm)并放到傾斜支架, 整個(gè)支架下端放入溶液槽, 膜開(kāi)始吸液, 計(jì)時(shí). 記錄每個(gè)標(biāo)記處的通過(guò)時(shí)刻, 并與對(duì)照組比較. 跑板時(shí), 理論上溶液呈水平線形式上吸, 觀測(cè)是否有波浪傾斜或包圍潤(rùn)濕等反常現(xiàn)象.4. 點(diǎn)樣測(cè)試C/T線出線時(shí)間, 其他試驗(yàn)條件相同情況下, 記錄和比較C/T線出現(xiàn)時(shí)間是否與對(duì)照有差異.靈敏度, 比較不同樣本濃度情況下, T線的變化是否和對(duì)照組同. 一般每批次膜取前端一段用來(lái)測(cè)試即可. 由于制造過(guò)程的不均一性, 不同批號(hào)的靈敏

14、度會(huì)有一定差異, 當(dāng)大批量使用時(shí), 這種差異影響是非常大的, 那么就要按照靈敏度表現(xiàn)將不同批號(hào)的膜進(jìn)行分類(lèi). 在膜的STOCK中要能夠輕易的分辨出來(lái). 當(dāng)進(jìn)入后期生產(chǎn)調(diào)用時(shí), 就能根據(jù)這些分類(lèi), 按照訂單要求取用不同批號(hào)的膜, 或者用強(qiáng)靈敏度的原料和差靈敏度的膜來(lái)搭配.關(guān)于膜的批內(nèi)差. 批內(nèi)差是肯定存在的,只是差距大小的問(wèn)題,依據(jù)一般的測(cè)試條件是很困難獲得詳細(xì)的數(shù)值,因?yàn)槟悴豢赡軐?duì)每一卷膜的每一段都做詳細(xì)的測(cè)試. 減小膜批內(nèi)差的最有效方法是不購(gòu)入邊緣膜帶. 前面說(shuō)過(guò)膜的生產(chǎn)方式,生產(chǎn)出的半成品是寬幅很大的一個(gè)膜面,要通過(guò)截面裁切才能獲得25mm或者20mm的寬度.那么就有中間部分,和邊緣部分之

15、分.越靠近中間部分,膜的均勻性越好,邊緣部分則相對(duì)要差,就造成了批內(nèi)差. 一般可以通過(guò)COA獲得具體位置信息,例如MILLIPORE就在切割后用字母A,B,C來(lái)表示切出的窄膜在寬幅膜中的位置.如果是試用某個(gè)型號(hào)的膜小樣, 還需要在以上檢測(cè)后加入膜加速老化試驗(yàn). 包括膜單獨(dú)的老化試驗(yàn)和點(diǎn)好膜后產(chǎn)品的老化試驗(yàn), 具體試驗(yàn)方法請(qǐng)參看我以前寫(xiě)的研發(fā)思路一文.五.膜的深入探討和應(yīng)用技巧從本節(jié)開(kāi)始,我們開(kāi)始對(duì)膜進(jìn)行深入討論和談一些應(yīng)用技巧.1. 蛋白與膜的結(jié)合原理蛋白與膜的結(jié)合原理, 已知的結(jié)合力包括疏水作用力H鍵靜電作用力等,確切的結(jié)合原理并不明確,主要靠假說(shuō)來(lái)支撐.主要有兩種假說(shuō):1) 首先兩者靠靜電

16、作用力結(jié)合, 然后靠H鍵和疏水作用來(lái)維持長(zhǎng)時(shí)間結(jié)合.2) 首先兩者靠疏水作用結(jié)合, 然后靠靜電作用來(lái)維持長(zhǎng)時(shí)間結(jié)合.兩條假說(shuō), 都表明其結(jié)合過(guò)程分為兩步, 首先結(jié)合和后面長(zhǎng)時(shí)間結(jié)合.由于結(jié)合原理的不明確性, 導(dǎo)致在這方面的工作非常依賴實(shí)踐經(jīng)驗(yàn). 2. 膜對(duì)結(jié)合的影響1)膜孔徑有些技術(shù)人員傾向使用膜孔徑來(lái)區(qū)分不同的膜,但是請(qǐng)注意這只僅僅限于同一廠家的產(chǎn)品,如果是不同廠家的產(chǎn)品,這種比較是無(wú)意義的. 膜孔徑與層析速度的關(guān)系,已在上文描述. 隨著膜孔徑減小,膜的實(shí)際可用表面積遞增,膜結(jié)合蛋白的量也遞增. 估量表面積的參數(shù)為表面積比率(實(shí)際可用表面積與所用膜平面積的比率).另外, 膜孔徑越小,層析速度

17、也越小,那么金標(biāo)復(fù)合物通過(guò)T線的時(shí)間也就越長(zhǎng),反應(yīng)也就越充分.綜合以上兩點(diǎn),結(jié)論為膜孔徑越小靈敏度越高.但是同時(shí)也減慢了跑板速度,增加了非特異性結(jié)合的機(jī)會(huì),也就是假陽(yáng)性越高.所以要按照試驗(yàn)結(jié)果挑選適合實(shí)際項(xiàng)目的膜,找到合適的平衡點(diǎn).2)不同廠家的膜差異這個(gè)差異主要來(lái)源于兩點(diǎn):1>  生產(chǎn)膜時(shí),使用的聚合物和表面活性劑的來(lái)源,類(lèi)型,數(shù)量不同.同理,在膜處理中這兩類(lèi)物質(zhì)一般會(huì)對(duì)性能產(chǎn)生較大影響.2> 處理過(guò)程不同.3. 生物原料,緩沖溶液的試劑和配方1) 生物原料, 作為CT線的生物原料使用情況各異,所以這里只做略述.首先,單克隆抗體與膜的結(jié)合優(yōu)于多克隆抗體, 主要

18、時(shí)由于多克隆抗體有很多不同的表面位點(diǎn), 而各位點(diǎn)與膜的最佳結(jié)合條件都有細(xì)微的差別, 毫無(wú)疑問(wèn)就增加了優(yōu)化難度.其次,分子量越大,蛋白越難結(jié)合到固相材料上. 2)緩沖液大家最關(guān)心的可能就是希望獲得一個(gè)性能優(yōu)良的配方,包括緩沖液,封閉液等等處理溶液配方. 其實(shí)我也無(wú)法提供給你一個(gè)萬(wàn)用配方清單. 因?yàn)椴煌姆磻?yīng)體系需要不同的配方來(lái)支持, 而不同機(jī)構(gòu)的反應(yīng)體系又有差異. 想獲”魚(yú)”先學(xué)”漁”. 為了不誤導(dǎo)大家,我在下面涉及到配方的問(wèn)題上,僅提供思路,具體配方請(qǐng)自己摸索.緩沖液的構(gòu)成一般是: PBS(或其他緩沖體系)+作用物質(zhì)(針對(duì)某一特定問(wèn)題)+PH調(diào)整. 我在參考過(guò)以前的各種資料后,個(gè)人意見(jiàn)為配方原

19、則為宜簡(jiǎn)不宜繁,根據(jù)自己的需要添加作用物質(zhì),原來(lái)的很多需要添加的作用物質(zhì),由于膜制造技術(shù)的改進(jìn)已經(jīng)不再需要.推薦的緩沖體系為0.01M PBS PH7-7.2, 該緩沖體系對(duì)多種抗原抗體都有良好的適應(yīng)性.作用物質(zhì)的情況大致羅列如下:少量NACL,減少信號(hào)強(qiáng)度,消假陽(yáng).有機(jī)醇(甲醇,異丙醇等),潤(rùn)濕膜,減少膜帶有的靜電,利于結(jié)合包被.個(gè)人不推薦,因制膜工藝改進(jìn).表面活性劑(TW20,TX100),增加親水力,可避免線條中空現(xiàn)象,也可增色.糖,保護(hù)劑,減緩老化速度,也可以增加親水力同上.調(diào)PH到某個(gè)位置,可以消假陽(yáng).4. 點(diǎn)樣環(huán)境環(huán)境濕度對(duì)點(diǎn)膜過(guò)程非常重要.最佳濕度一般在45-65%.濕度過(guò)低,膜

20、上容易聚集靜電荷,點(diǎn)膜容易出現(xiàn)散點(diǎn),導(dǎo)致測(cè)試會(huì)出現(xiàn)疏水斑.濕度過(guò)高,膜上毛細(xì)作用加強(qiáng),點(diǎn)膜容易引起CT線變寬甚至擴(kuò)散.為了保證點(diǎn)樣時(shí)膜濕度的均一性,一般在點(diǎn)樣前把膜放到該濕度條件下平衡一段時(shí)間.5. 點(diǎn)樣儀器與膜面情況的關(guān)系目前有兩種點(diǎn)樣方式,劃膜式和非接觸點(diǎn)膜式.非接觸點(diǎn)膜式優(yōu)于劃膜式,進(jìn)口劃膜式優(yōu)于國(guó)產(chǎn)劃膜式.因劃膜式為軟管將抗體劃到膜表面,而膜本身的物理性質(zhì)為軟脆,劃管會(huì)在其表面留下印痕.進(jìn)口的劃膜機(jī)由于使用的材料和控制系統(tǒng)較好,所以留下的劃痕較輕,而國(guó)產(chǎn)儀器較差,留下的劃痕也就比較嚴(yán)重. 劃痕容易對(duì)層析的金標(biāo)復(fù)合物形成阻力,導(dǎo)致假陽(yáng)性. 同時(shí)容易出現(xiàn)跑板時(shí)在T線位置出現(xiàn)若有若無(wú)一條細(xì)線

21、(鬼線),而跑板結(jié)束后鬼線消失的奇怪現(xiàn)象.6. 膜的寬度與點(diǎn)樣位置膜的寬度一般有18mm(or 20mm)和25mm兩種, 分別使用在做測(cè)試條和做測(cè)試板上.然而,不同的T線點(diǎn)樣位置將帶來(lái)不同的靈敏度. 點(diǎn)樣位置上移,金標(biāo)復(fù)合物通過(guò)T線位置時(shí)速度變慢,反應(yīng)時(shí)間增加,靈敏度升高. 反之靈敏度降低. 這個(gè)方法可以用來(lái)改變靈敏度和消除假陽(yáng)性.7. 溶液在膜上的擴(kuò)散溶液在膜上的點(diǎn)樣量一般情況下為1ul/cm.溶液在膜上的擴(kuò)散是趨向兩端的,噴點(diǎn)上去的是均勻的抗體溶液,但當(dāng)干燥時(shí)線條邊緣的干燥速度高于中間,中間的抗體會(huì)不斷向兩邊擴(kuò)散,所以干燥后抗體是向線條的兩端聚集的.一般情況下不影響你的試驗(yàn).如果你發(fā)現(xiàn)線

22、條出現(xiàn)兩端紅,中間淡的現(xiàn)象,就要考慮這個(gè)問(wèn)題了.可以加如上面說(shuō)的作用物質(zhì)來(lái)解決.8. 點(diǎn)膜前后的封閉作用從供應(yīng)商處購(gòu)買(mǎi)回的膜基本上都是已經(jīng)優(yōu)化處理好的,直接點(diǎn)膜就可使用.然而我們還是經(jīng)常會(huì)遇到關(guān)于封閉的討論.其實(shí)封閉不象大家認(rèn)為的那樣,一封閉什么問(wèn)題都解決了. 老問(wèn)題走了新問(wèn)題又來(lái)了,而且更麻煩,我要說(shuō)的是慎用封閉.我極其反對(duì)點(diǎn)膜前封閉的做法. 原因?yàn)閺S家在生產(chǎn)膜時(shí)候,各種配方是混合加入原漿的.而點(diǎn)膜前封閉時(shí)要將膜浸泡在封閉液內(nèi),必然擾亂了膜內(nèi)正常的物質(zhì)分布.由此引發(fā)了許多問(wèn)題,也降低了工作效率. 也有廠家遇到不封閉就無(wú)法包被上膜的問(wèn)題,其實(shí)可以通過(guò)其他辦法來(lái)解決,封閉必然是下測(cè).我經(jīng)常使用的

23、封閉手法有兩種.流動(dòng)封閉,將作用物質(zhì)處理在樣品墊上.膜上定點(diǎn)封閉,將作用物質(zhì)配成溶液噴點(diǎn)在膜的特定位置上. 該方法需要使用BIODOT的AIRJET噴頭.可以將不合格的半成品大板重新復(fù)活.只要是將封閉做在了膜上,就必然會(huì)對(duì)產(chǎn)品的穩(wěn)定性造成影響.具體的影響程度要通過(guò)穩(wěn)定性測(cè)試來(lái)評(píng)判.9. 膜的儲(chǔ)存剛生產(chǎn)出的膜一般含有5-10%的水分. 關(guān)于膜的老化機(jī)理,有個(gè)理論支持,不過(guò)爭(zhēng)議比較大. 理論認(rèn)為:膜的老化是因?yàn)槟ど系乃终舭l(fā),使膜變得疏水,帶電荷并變脆. 儲(chǔ)存膜一般要求是避光,密封.過(guò)干或過(guò)濕都不利.在這種保存條件下,一般可以放置兩年. 但是如果膜上做了封閉處理,就要根據(jù)具體試驗(yàn)情況來(lái)判斷了.有些

24、膜由于生產(chǎn)工藝的問(wèn)題,使用后靈敏度會(huì)在一段時(shí)間內(nèi)發(fā)生變化,遇到這種問(wèn)題,就需要在點(diǎn)膜后放置一段時(shí)間,待穩(wěn)定后方可進(jìn)入調(diào)試生產(chǎn).后序以上便是我在膠體金層析診斷試驗(yàn)中使用硝酸纖維素膜過(guò)程中的一些經(jīng)驗(yàn).從起筆到結(jié)尾花了大約一個(gè)月時(shí)間,斷斷續(xù)續(xù),終于完成. 也要感謝所有膜生產(chǎn)廠家技術(shù)專(zhuān)家在以前的工作接觸中給我做過(guò)的大量技術(shù)培訓(xùn),其中很多已經(jīng)成為了經(jīng)常聯(lián)系的朋友.由于膜工業(yè)是在不斷發(fā)展的,可能出現(xiàn)新的問(wèn)題或新的解決辦法. 歡迎進(jìn)行討論.免疫膠體金稀釋液的配伍原則（前面我一個(gè)回帖成此文，發(fā)現(xiàn)太長(zhǎng)了，不發(fā)新帖可惜，呵呵）制備好免疫膠體金后，還需要將其稀釋到一定濃度，并吸附于特殊的惰性介質(zhì)中才能夠最終制成產(chǎn)品

25、。一般來(lái)說(shuō)，特殊的介質(zhì)常用的是玻璃纖維或無(wú)紡布。玻璃纖維和無(wú)紡布本身一般是疏水的，膠體金產(chǎn)業(yè)一般采用表面活性劑預(yù)處理過(guò)的玻璃纖維或無(wú)紡布，通常配方為1%Tween20+適量PVA。介質(zhì)處理完成后，免疫膠體金稀釋液的配伍才是最關(guān)鍵的?，F(xiàn)總結(jié)原則如下，不足之處歡迎批評(píng)或補(bǔ)充。1 合適的離子種類(lèi)和強(qiáng)度免疫膠體金畢竟是含有生物活性分子，應(yīng)用時(shí)還要面對(duì)千差萬(wàn)別的樣品，原則上需要稀釋在合適pH的緩沖液中。經(jīng)驗(yàn)值是6-9。在這個(gè)范圍內(nèi)可選的緩沖主要有tris和PB，也不排除其他種類(lèi)緩沖適用的可能。當(dāng)使用的緩沖離子強(qiáng)度過(guò)大如超過(guò)0.2M時(shí)，有可能造成釋放、層析不好或檢測(cè)結(jié)果異常。離子的種類(lèi)也因?yàn)槊庖吣z體金的生物分子不同而有諸多限制，例如鈣調(diào)蛋白可能與Ca離子有關(guān)系。而鹵素離子強(qiáng)度對(duì)膠體金穩(wěn)定性似乎有特殊的破壞作用，教科書(shū)式的NaCl調(diào)試最適標(biāo)記條件就是例子。2 大分子物質(zhì)作為膠體金干燥后均勻散布的骨架這個(gè)其實(shí)是凍干工藝的理論基礎(chǔ)，適用于膠體金干燥工藝，對(duì)凍干有研究的應(yīng)該對(duì)這個(gè)工藝感覺(jué)很小兒科。抽真空是一個(gè)熱力學(xué)吸熱過(guò)程，實(shí)驗(yàn)表明免疫膠體金的真空干燥是一個(gè)先冷凍再升華的過(guò)程，十分類(lèi)似凍干。無(wú)紡布材料的工藝由于干燥過(guò)程快，多數(shù)采用烤干的工藝，但是大分子的骨架作用仍然是對(duì)產(chǎn)品的釋放速度和比率有很大幫助。常用大分子物質(zhì)如PEG4000，PEG20000，PVP等，建議盡量從中選擇一種添加使用。3 小