山東地方標(biāo)準(zhǔn)醫(yī)療污染物排放標(biāo)準(zhǔn)

1、醫(yī)療污染物排放標(biāo)準(zhǔn)Discharge standard of medical pollutants（山東省地方標(biāo)準(zhǔn)DB37/ 596 2006）醫(yī)療污染物排放標(biāo)準(zhǔn)Discharge standard of medical pollutants（山東省地方標(biāo)準(zhǔn)DB37/ 596 2006）2006-01-04發(fā)布2006-01-10實(shí)施山東省環(huán)境保護(hù)局山東省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布、八 刖 言本標(biāo)準(zhǔn)的全部技術(shù)內(nèi)容為強(qiáng)制性。為了貫徹中華人民共和國(guó)環(huán)境保護(hù)法、中華人民共和國(guó)水污染防治法中華人民共和國(guó)海洋環(huán)境保護(hù)法、中華人民共和國(guó)大氣污染防治法、中華人民共和國(guó)固體廢物污染環(huán)境防治法、中華人民共和國(guó)傳染病防治

2、法以及醫(yī)療廢物管理?xiàng)l例，促進(jìn)醫(yī)療廢物處置系統(tǒng)的建設(shè)和管理，加強(qiáng)醫(yī) 療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)廢物的排放控制，保障人民身體健康，維護(hù)良好的生態(tài)環(huán)境。特制定本地方標(biāo)準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A、附錄B、附錄C、附錄D為規(guī)范性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由山東省環(huán)境保護(hù)局提出。本標(biāo)準(zhǔn)委托濟(jì)南市環(huán)境工程設(shè)計(jì)院、濟(jì)南市環(huán)保局直屬分局起草。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：張成志、高旭光、遲智香、張建國(guó)、周蓬、徐志浩本標(biāo)準(zhǔn)于2006年1月4日首次發(fā)布。本標(biāo)準(zhǔn)由山東省環(huán)境保護(hù)局負(fù)責(zé)解釋。醫(yī)療污染物排放標(biāo)準(zhǔn)1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了山東省醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)醫(yī)療污水排放和醫(yī)療廢物處置（控制）的污染物限值。本標(biāo)準(zhǔn)適用于山東省醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)醫(yī)療污水排放和醫(yī)療廢物處置（控制）的管理，也適用

3、于獸醫(yī)院的 污水和醫(yī)療廢物的排放管理。2規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修 改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否 可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。GB 3097海水水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)GB 3838地表水環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)GB 5085.3危險(xiǎn)廢物鑒別標(biāo)準(zhǔn)浸出毒性鑒別GB 15981消毒與滅菌效果的評(píng)價(jià)方法與標(biāo)準(zhǔn)GB 15982醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB 18466醫(yī)療機(jī)構(gòu)水污染物排放標(biāo)準(zhǔn)GB 18484危險(xiǎn)廢物焚燒污染控制標(biāo)準(zhǔn)GB 18598危險(xiǎn)廢物填

4、埋污染控制標(biāo)準(zhǔn)GB 18918城鎮(zhèn)污水處理廠污染物排放標(biāo)準(zhǔn)GB 19218醫(yī)療廢物焚燒爐技術(shù)要求（試行）HJ/T 91地表水和污水監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)范醫(yī)療廢物集中處置技術(shù)規(guī)范（試行） （環(huán)發(fā)2003206號(hào)）3術(shù)語(yǔ)及定義下列術(shù)語(yǔ)及定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。3.1醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)從事與醫(yī)療、預(yù)防、保健以及其他相關(guān)活動(dòng)的，由各級(jí)衛(wèi)生行政主管部門負(fù)責(zé)管理或監(jiān)管的單位。3.2醫(yī)療污水醫(yī)療機(jī)構(gòu)門診、病房、手術(shù)室、各類檢驗(yàn)室、病理解剖室、放射室、洗衣房、太平間等處排出的診療、 生活及糞便污水。當(dāng)醫(yī)療機(jī)構(gòu)其他污水與上述污水混合排出時(shí)一律視為醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水。3.3醫(yī)療廢物醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)在醫(yī)療、預(yù)防、保健以及其他相關(guān)活動(dòng)中產(chǎn)生的具有直

5、接或者間接感染性、毒性以及其 他危害性的廢物。具體分類名錄依照國(guó)家危險(xiǎn)廢物名錄和國(guó)務(wù)院衛(wèi)生行政主管部門和環(huán)境保護(hù)行政主 管部門共同制定的醫(yī)療廢物分類目錄執(zhí)行。3.4醫(yī)療廢物集中處置中心具有環(huán)境保護(hù)行政主管部門頒發(fā)的醫(yī)療廢物處置資格的區(qū)域性醫(yī)療廢物集中處置單位。4技術(shù)內(nèi)容4.1水污染物排放標(biāo)準(zhǔn)4.1.1處理要求4.1.1.1醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)應(yīng)將傳染病房的污水與其他污水分別收集。傳染病醫(yī)院（包括設(shè)傳染病房的綜合性醫(yī)院）應(yīng)設(shè)專用化糞池，進(jìn)行預(yù)消毒處理。4.1.1.2醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)的各種特殊排水，如含重金屬?gòu)U水、含油廢水、洗印廢水等應(yīng)單獨(dú)收集，分 別采取不同的預(yù)處理措施后排入醫(yī)療污水處理系統(tǒng)。4.1.1.3

6、同位素治療和診斷產(chǎn)生的放射性廢水，必須單獨(dú)收集處理。4.1.1.4醫(yī)療污水不得排入GB 3838中的I、II類水域和ID類水域的集中式生活飲用水地表水源地二級(jí)保護(hù)區(qū)、游泳區(qū)以及GB 3097中的一、二類海域。4.1.2排放要求4.1.2.1根據(jù)水污染物的來源及性質(zhì)，將水污染物控制項(xiàng)目分為必測(cè)項(xiàng)目和選測(cè)項(xiàng)目?jī)深?。必測(cè)項(xiàng) 目為環(huán)境保護(hù)行政主管部門為了保護(hù)水環(huán)境，在日常監(jiān)測(cè)過程中必須監(jiān)測(cè)的水污染物控制項(xiàng)目，主要包括影響水環(huán)境和污水處理系統(tǒng)一般處理工藝可以去除的基本控制項(xiàng)目及部分一類污染物，共15項(xiàng)。選測(cè)項(xiàng)目為地方環(huán)境保護(hù)行政主管部門根據(jù)當(dāng)?shù)蒯t(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)的污染狀況及水環(huán)境保護(hù)狀況對(duì)污水排放可以選 擇監(jiān)

7、測(cè)的控制項(xiàng)目，共計(jì)4項(xiàng)。4.1.2.2必測(cè)項(xiàng)目必須執(zhí)行。選測(cè)項(xiàng)目由縣級(jí)及其以上人民政府環(huán)境保護(hù)行政主管部門根據(jù)當(dāng)?shù)蒯t(yī) 療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)的具體情況和水環(huán)境質(zhì)量要求選擇控制。4.1.3標(biāo)準(zhǔn)分級(jí)根據(jù)醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)排入地表水域環(huán)境功能和保護(hù)目標(biāo)，將必測(cè)項(xiàng)目的常規(guī)污染物標(biāo)準(zhǔn)值分為一級(jí)標(biāo) 準(zhǔn)、二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)、三級(jí)標(biāo)準(zhǔn)、四級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。一類重金屬污染物和選測(cè)項(xiàng)目不分級(jí)。4.1.3.1排入GB3838II類水域中除集中式生活飲用水地表水源地二級(jí)保護(hù)區(qū)及游泳區(qū)之外的區(qū)域， 執(zhí)行一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。4.1.3.2排入GB383印、V類水域或排入GB3097中三類海域以及排入未設(shè)置城鎮(zhèn)污水處理廠的城鎮(zhèn) 污水排放系統(tǒng)的醫(yī)療污水，執(zhí)行二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。4.

8、1.3.3排入設(shè)置城鎮(zhèn)污水處理廠的城鎮(zhèn)污水排放系統(tǒng)的醫(yī)療污水，執(zhí)行三級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。4.1.3.4床位小于20床以及不設(shè)床位的醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)產(chǎn)生的醫(yī)療污水，應(yīng)當(dāng)設(shè)消毒處理設(shè)施，執(zhí)行 四級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。4.1.3.5傳染病爆發(fā)期間，應(yīng)當(dāng)根據(jù)環(huán)境保護(hù)行政主管部門和醫(yī)療衛(wèi)生行政主管部門的要求執(zhí)行應(yīng)急處置措施要求。4.1.4標(biāo)準(zhǔn)值4.1.4.1醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)水污染物排放，必測(cè)項(xiàng)目執(zhí)行表1和表2的規(guī)定。4.1.4.2選測(cè)項(xiàng)目按表3的規(guī)定執(zhí)行。表1一類污染物最高允許排放濃度（日均值）單位為毫克每升序號(hào)污染物最高允許排放濃度1總汞0.052總神0.5b括號(hào)外數(shù)值為水溫12C時(shí)的控制指標(biāo)，括號(hào)內(nèi)數(shù)值為水溫 V12C時(shí)的控制指標(biāo)。

9、序號(hào)基本控制項(xiàng)目一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)三級(jí)標(biāo)準(zhǔn)四級(jí)標(biāo)準(zhǔn)1糞大腸菌群數(shù)（MPN/D5010050050002腸道致病菌不得檢出不得檢出3腸道病毒不得檢出不得檢出4結(jié)核桿菌不得檢出不得檢出5化學(xué)需氧量（CODr）40601206生化需氧量（BOD）1020307懸浮物（SS）a10(5)20608動(dòng)植物油1.05159揮發(fā)酚0.10.50.510氨氮b5(8)15(20)25(30)11磷酸鹽（以P計(jì)）0.50.5二1.0士12余氯c0.50.5匚8二13pH69a括號(hào)內(nèi)為用于沖洗地面及洗車用水水質(zhì)指標(biāo)。序號(hào)污 染物最高允許排放濃度1氟化物102氯化物2503甲醛類1.04總有機(jī)碳（TOC）30表3選測(cè)

10、項(xiàng)目最高允許排放濃度（日均值）單位為毫克每升4.1.4.3污水處理過程中產(chǎn)生的廢氣按照GB18466執(zhí)行表2基本控制項(xiàng)目最高允許排放濃度（日均值）單位為毫克每升c消毒接觸池接觸時(shí)間 A1h,接觸池出口總余氯3mg/l 10mg/l。4.1.5取樣與監(jiān)測(cè)4.1.5.1水質(zhì)取樣在污水處理站處理工藝末端排放口。其中一類污染物的取樣按照HJ/T 91執(zhí)行。4.1.5.2檢測(cè)取樣頻率為至少每2h一次，取24h混合樣，以日均值計(jì)。4.1.5.3監(jiān)測(cè)分析方法按表4或國(guó)家環(huán)境保護(hù)總局認(rèn)定的替代方法、等效方法執(zhí)行。表4水污染物監(jiān)測(cè)分析方法序號(hào)控制項(xiàng)目測(cè)定萬法測(cè)定下限（mg/l）方法來源1總汞冷原子吸收分光光度法

11、0.0001GB7468雙硫月宗分光光度法0.002GB74692總神乙基硫代氨基甲酸銀 分光光度法0.007GB74853糞大腸菌群數(shù)多管發(fā)酵法-附錄A4沙門氏菌-附錄B5志賀氏菌-附錄C6結(jié)核桿菌-附錄D7化學(xué)需氧量（COB）重銘酸鹽法30GB119148BOD稀釋與接種法2GB7488微生物傳感器快速測(cè)定法1HJ/T869懸浮物（SS）重量法-GB1190110動(dòng)植物油紅外分光光度法0.1GB/T1648811揮發(fā)酚4-氨基安替比林分光光度去0.002GB749012總氮（以N計(jì)）堿性過硫酸鉀-消解紫外分 光光度法0.05GB1189413磷酸鹽（以P計(jì)）鑰酸鉉分光光度法0.01GB11

12、89314pH玻璃電極法-GB692015F離子選擇電極法0.05GB7484西素磺酸錯(cuò)目視比色法-GB7482氟試劑分光光度法-GB748316氯化物硝酸銀滴定法-GB1189617甲醛乙酰丙酮分光光度法0.05GB1319718TOC非紅外吸收法0.5GB1318319余氯N,N-二乙基-1,4-苯二胺滴定法-GB11897N,N-二乙基-1,4-苯二胺分光光度法-GB118984.2醫(yī)療廢物控制標(biāo)準(zhǔn)4.2.1醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)不得將醫(yī)療廢物隨意棄置。4.2.2醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)應(yīng)將醫(yī)療廢物與生活垃圾分開收集；醫(yī)療廢物應(yīng)進(jìn)行無害化集中處置，生活垃圾按城 市生活垃圾處理原則進(jìn)行處理。4.2.3醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)

13、構(gòu)應(yīng)對(duì)醫(yī)療廢物進(jìn)行分類，并采用醫(yī)療廢物集中處置技術(shù)規(guī)范（試行）中要求的容 器、轉(zhuǎn)運(yùn)器械進(jìn)行包裝、轉(zhuǎn)運(yùn)，包裝、轉(zhuǎn)運(yùn)期間應(yīng)注意防護(hù)措施。4.2.4醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)應(yīng)設(shè)置醫(yī)療廢物的暫存場(chǎng)所。具有100張床位以上的醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)應(yīng)建立專門的醫(yī)療廢物暫存庫(kù)房，暫存庫(kù)房必須滿足醫(yī)療廢物集中處置技術(shù)規(guī)范（試行）中關(guān)于暫存庫(kù)房的設(shè)計(jì)要求； 具有100張床位以下的醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)及門診、部、所應(yīng)設(shè)立專門的醫(yī)療廢物暫存場(chǎng)所，并滿足醫(yī)療廢物 集中處置技術(shù)規(guī)范（試行）中暫存場(chǎng)所的要求。4.2.5醫(yī)療廢物可以根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r采用表5的處置方法進(jìn)行處置。表5醫(yī)療廢物處置方法序號(hào)醫(yī)療廢物種類醫(yī)療廢物處置方法備注1病理性廢物（包括人體組織

14、、死胎、器官、肢體和動(dòng)物尸體、血液、體液）火化或焚燒按國(guó)家有關(guān)法律法規(guī)處置2感染性廢物（包括傳染病人手術(shù)或尸 解后的廢棄物，如污染的材料和儀器；來自傳染病房的廢棄物，如排泄物、 手術(shù)或感染傷口的敷料、嚴(yán)重污染的 衣物；傳染病人血透析中廣生的廢棄 物；實(shí)驗(yàn)室感染的動(dòng)物；傳染病人或 動(dòng)物接觸過的任何其他設(shè)備和材料；實(shí)驗(yàn)室所用的菌落及病原株培養(yǎng)基和 保菌液； 使用過的一次性注射器、 輸 液器、輸血器等廢棄物）焚燒或消毒3鋒利物（銳器）（包括針頭、手術(shù)刀、 解剖刀、司官、手術(shù)鋸、玻璃制品等 易對(duì)人體造成損傷的廢物）焚燒4藥物性廢物（包括過期、被淘汰、壓 碎或污染的藥品、疫苗、血清）焚燒5遺傳病毒性廢棄

15、物（包括已明確的抑 制細(xì)胞的藥物，化學(xué)或放射治療病人 的嘔吐物、尿或糞便。如苯、環(huán)抱霉 素、環(huán)磷酰胺等）焚燒對(duì)環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰胺、 硫酸長(zhǎng)春新堿等可米用化學(xué) 降解法或封存或使之自動(dòng)失 效6化學(xué)性廢棄物（包括在診斷、試驗(yàn)、清潔、管理、消毒過程中產(chǎn)生的， 具 有毒性、 腐蝕性、 易燃性、反應(yīng)性或 遺傳毒性的物質(zhì)。如甲醛、攝影用劑、有機(jī)化合物等）焚燒或化學(xué)處理對(duì)于一般的化學(xué)廢棄物，如 糖、氨基酸和特定的鹽類可 按城市生活垃圾進(jìn)行處置或 排入下水道。7低放射性廢物（包括診斷或治療用的 棉簽、注射器、輸液器等）焚燒8污水處理過程中產(chǎn)生的污泥焚燒4.2.6醫(yī)療廢物進(jìn)行無害化處置的技術(shù)要求4.2.6.1采

16、用高溫?zé)崽幚砑夹g(shù)要求按GB19218執(zhí)行。4.2.6.2高溫蒸汽滅菌按GB15982執(zhí)行4.2.6.3其他處理技術(shù)采用微波處理法、化學(xué)消毒法、電熱去活技術(shù)（EDT等其它經(jīng)環(huán)境保護(hù)行政主管部門及衛(wèi)生行政主管部 門認(rèn)可的醫(yī)療廢物處理技術(shù)時(shí)，污染物的排放應(yīng)當(dāng)達(dá)到環(huán)境保護(hù)行政主管部門及衛(wèi)生行政主管部門的要 求。4.2.7無害化處置后的醫(yī)療廢物應(yīng)達(dá)到的排放標(biāo)準(zhǔn)4.2.7.1采用焚燒法處置醫(yī)療廢物，其焚燒爐排放氣體的排放限值不應(yīng)高于GB18484規(guī)定的限值。檢測(cè)方法按GB18484執(zhí)行。4.2.7.2采用焚燒法處置醫(yī)療廢物，其焚燒殘留物中的含菌量應(yīng)為零。4.2.7.3醫(yī)療廢物焚燒過程中除塵設(shè)備收集到的飛灰

17、必須密閉收集貯存，并按照GB18598固化填埋處理；焚燒產(chǎn)生的爐渣可以送生活垃圾填埋場(chǎng)填埋處理；其他煙氣凈化裝置產(chǎn)生的固體廢物按GB 5085.3進(jìn)行鑒別，并確定是否屬于危險(xiǎn)廢物，如屬于危險(xiǎn)廢物，按危險(xiǎn)廢物處置，否則可以送生活垃圾填埋場(chǎng)填埋處理，無法進(jìn)行鑒別實(shí)驗(yàn)的，按危險(xiǎn)廢物處置。4.2.7.4采用高溫蒸汽滅菌法處置醫(yī)療廢物產(chǎn)生的固體廢物將其粉碎后按城市生活垃圾進(jìn)行處置。4.2.7.5采用高溫蒸汽滅菌法處置醫(yī)療廢物，生物指示劑應(yīng)選擇耐熱的嗜熱性脂肪桿菌芽孑包（Bacillusstearothermophilus spores），檢測(cè)方法按GB 15981執(zhí)行。4.2.7.6每批醫(yī)療廢物進(jìn)行高溫

18、蒸汽滅菌處置需用化學(xué)檢測(cè)方法對(duì)滅菌效果進(jìn)行檢測(cè)，可采用化學(xué)指示 管（卡）檢測(cè)方法或化學(xué)指示膠帶檢測(cè)法，檢測(cè)需將化學(xué)指示管（卡）放入滅菌室內(nèi)滅菌效果最難保證的空間位置，或?qū)⒒瘜W(xué)指示膠帶粘貼于每一待滅菌物品包外，經(jīng)一個(gè)滅菌周期后，觀察所放置的指示管（卡）或膠帶的性狀或顏色，如果均變至規(guī)定的條件，判為滅菌合格；若未達(dá)到規(guī)定的條件，則滅菌過程不合格。5標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)施與監(jiān)督本標(biāo)準(zhǔn)由縣級(jí)以上人民政府環(huán)境保護(hù)行政主管部門負(fù)責(zé)監(jiān)督實(shí)施。附錄A（規(guī)范性附錄）醫(yī)療污水中糞大腸菌群的檢驗(yàn)方法A.1A.1.1A.1.2A.1.3A.1.4A.1.5A.1.6A.1.7A.1.8A.1.9A.2A.2.1A.2.1.1蛋

19、白 月東 豬膽鹽 乳糖儀器和設(shè)備高壓蒸汽滅菌器干燥滅菌箱培養(yǎng)箱：37 C恒溫水浴箱電爐天平滅菌平皿滅菌刻度吸管酒精燈培養(yǎng)基和試劑乳糖膽鹽培養(yǎng)液成分20g（或牛、羊膽鹽）5g5g2.5mL0.4%漠甲酚紫水溶液蒸儲(chǔ)水1000mLA.2.1.2制法將蛋白腺、豬膽鹽及乳糖溶解于1000mL蒸儲(chǔ)水中，調(diào)整pH到7.4 ,加入指示劑，充分混勻，分裝于內(nèi)有倒管的試管中。115C下滅菌20min。貯存于冷暗處備用。A.2.2A.2.2.1蛋白月東豬膽鹽乳糖三倍濃度乳糖膽鹽培養(yǎng)液成分60g（或牛、羊膽鹽）15g15g7.5mL0.4%漠甲酚紫水溶液蒸儲(chǔ)水1000mLA.2.2.2制法制法同附錄A.2.1.2。

20、A.2.3伊紅美蘭培養(yǎng)基（EMB培養(yǎng)基）A.2.3.1成分蛋白月東乳糖磷酸氫二鉀瓊脂2%伊紅水溶液0.5%美藍(lán)水溶液蒸儲(chǔ)水A.2.3.2制法將瓊脂加到900mL蒸儲(chǔ)水中，加熱溶解，然后加入磷酸氫二鉀和蛋白月東，混勻使溶解，再加入蒸儲(chǔ)水補(bǔ)足至1000ml,調(diào)整pH至7.27.4。趁熱用脫脂棉和砂布過濾，再加入乳糖，混勻，定量分裝于燒瓶?jī)?nèi)，115C火菌20min。作為儲(chǔ)備培養(yǎng)基貯存于冷暗處備用。10g10g2g20g20mL13mL1000mL臨用時(shí)，加熱融化儲(chǔ)備培養(yǎng)基，待冷至60 C左右，根據(jù)燒瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基的容量，加入一定量的已滅菌的2%伊紅水溶液和0.5%美藍(lán)水溶液，充分搖勻（防止產(chǎn)生氣泡）。傾

21、注平皿備用。A.2.4乳糖蛋白月東培養(yǎng)液A.2.4.1成分蛋白月東10g牛肉膏3g乳糖5g氯化鈉5g1.6%漠甲酚紫乙醇溶液1mL蒸儲(chǔ)水1000mLA.2.4.2制法將蛋白月東、牛肉膏、乳糖及氯化鈉加熱溶解于1000mL蒸儲(chǔ)水中，調(diào)整pH到7.27.4，加入1.6%漠甲酚紫乙醇溶液1mL充分混勻，分裝于內(nèi)有倒管的試管中。115C下滅菌20min。貯存于冷暗處備用。A.2.5革蘭氏染色液A.2.5.1結(jié)晶紫染色液結(jié)晶紫1g95%乙醇溶液20mL1%草酸鉉水溶液1000mL將結(jié)晶紫溶于乙醇中，然后與草酸鉉水溶液混合。A.2.5.2革蘭氏碘液碘1g碘化鉀2g蒸儲(chǔ)水300mL將碘與碘化鉀混合，加入蒸儲(chǔ)

22、水少許，充分搖勻，待完全溶解，再加入蒸儲(chǔ)水至300ml.A.2.5.3脫色液95%乙醇A.2.5.4沙黃復(fù)染液沙黃1g95%乙醇2g蒸儲(chǔ)水90mL將沙黃溶于95%乙醇中，然后用蒸儲(chǔ)水稀釋。A.2.6染色法染色的基本步驟為：a）涂片：在載玻片上滴加一滴生理鹽水，用滅菌的接種環(huán)取菌落少許，與生理鹽水混勻，涂布成薄膜；b）干燥：在室溫中使自然干燥；c）固定：將涂片迅速通過火焰23次，以載玻片反面接觸皮膚，熱而不燙為度；d）染色：滴加結(jié)晶紫染色液，染色1min,水洗；e）媒染：滴加革蘭氏碘液，作用1min,水洗；f）脫色：滴加95%乙醇脫色，約30s,水洗；g）復(fù)染：滴加復(fù)染液，復(fù)染1min,水洗。革

23、蘭氏陽(yáng)性菌染色后呈紫色，革蘭氏陰性菌染色后呈紅色。亦 可用1: 10稀釋的石炭酸復(fù)紅染色液作復(fù)染劑，復(fù)染時(shí)間為10s。A.3檢驗(yàn)程序檢驗(yàn)程序見圖A.1 o樣品處理：確定樣品接種量A 1污水中蓑大腸菌程檢驗(yàn)程序 4A.4操作步驟A.4.1樣品準(zhǔn)備污水樣品應(yīng)至少取200mL使用前應(yīng)充分混勻。若樣品為經(jīng)過氯消毒的污水，應(yīng)在采樣后立即用5%硫代硫酸鈉溶液充分中和余氯。根據(jù)預(yù)計(jì)的污水樣品中糞大腸菌群數(shù)確定污水樣品接種量。糞大腸菌群數(shù)量相對(duì)較少的接種量一般為10mL1mL 0.1mL。糞大腸菌群數(shù)較多時(shí)接種量為1mL 0.1mL、0.01mL或0.1mL、0.01mL、0.001mL等。接種量少于1mL時(shí)

24、，水樣應(yīng)制成稀釋樣品后供發(fā)酵試驗(yàn)使用。接種量為0.1mL、0.01mL時(shí)，取稀釋比分別為1:10、1:100。其它接種量的稀釋比依此類推。1:10稀釋樣品的制作方法為：吸取1mL水樣，注入到盛有9mL滅菌水的試管中，混勻，制成1:10稀釋樣品。因此，取1mL1:10稀釋樣品，等于取0.1mL污水樣品。其它稀釋比的稀釋樣品同法制作。A.4.2發(fā)酵試驗(yàn) 將樣品接種于裝有乳糖膽鹽培養(yǎng)液的試管（內(nèi)有小倒管）中，44C培養(yǎng)24h。樣品接種體積以及管內(nèi)乳糖膽鹽培養(yǎng)液的濃度與體積根據(jù)以下條件確定：取三個(gè)接種量、每個(gè)接種量的樣品分別接種于5個(gè)試管內(nèi)，共需15個(gè)試管。試管內(nèi)乳糖膽鹽培養(yǎng)液的濃度與體積應(yīng)根據(jù)接種量

25、確定。若接種量為10mL,吸取10mL樣品接種于裝有5mL三倍濃度乳糖膽鹽培養(yǎng)液的試管內(nèi)；若接種量為1mL時(shí)，吸取1mL樣品接種于裝有10mL普通濃度乳糖膽鹽培養(yǎng)液的試管內(nèi)；若接種量少于1mL時(shí)，吸取1mL稀釋樣品接種于裝有10mL普通濃度乳糖膽鹽培養(yǎng)液的試管內(nèi)。A.4.3平板分離大腸桿菌分解乳糖產(chǎn)酸時(shí)培養(yǎng)液變色、產(chǎn)氣時(shí)小倒管內(nèi)出現(xiàn)氣泡。經(jīng)24h培養(yǎng)后，將產(chǎn)酸的試管內(nèi)培養(yǎng)液分別劃線接種于EMB培養(yǎng)基上。置于37C培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)18h24h。A.4.4鑒定挑選可疑糞大腸菌群菌落，進(jìn)行革蘭氏染色和鏡檢?？梢删溆校篴）深紫黑色，具有金屬光澤的菌落；b）紫黑色，不帶或略帶金屑光澤的菌落；c）淡紫紅色

26、，中心色較深的菌落。上述涂片鏡檢的菌落如為革蘭氏陰性無芽抱桿菌，則挑取上述典型菌落13個(gè)接種于盛有5mL乳糖蛋白彌培養(yǎng)液倒管和倒管的試管內(nèi)，置于44C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。產(chǎn)酸產(chǎn)氣試管為糞大腸菌群陽(yáng)性管。A.5計(jì)數(shù)根據(jù)證實(shí)有糞大腸菌群存在的陽(yáng)性管數(shù)，查表A.1可得100mL污水中糞大腸菌群MPN值。由于表A.1是按一定的三個(gè)10倍濃度差接種量設(shè)計(jì)的（接種量為10mL 1mL和0.1mL）,當(dāng)采用其他三個(gè)10倍濃度差接種量時(shí)，需要修正表內(nèi)MPN值，具體方法如下：表內(nèi)所列污水最大接種量增加10倍時(shí)表內(nèi)MPN值相應(yīng)降低10倍；污水最大接種量減少10倍時(shí)表內(nèi)MPN值相應(yīng)增加10倍。如污水接種量改為1mL

27、 0.1mL和0.01mL時(shí)，表A內(nèi)MPN值相應(yīng)增加10倍。其它的 三個(gè)10倍濃度差接種量的MPN值相應(yīng)類推。由于表A.1內(nèi)MPN值的單位為每100mL污水樣品中MPN值，而污水以1L為報(bào)告單位，因此需將查表A.1得到的MPN值乘上10,換算成1L污水樣品中的MPN值。表A.1污水中糞大腸菌群最可能數(shù)（MPN檢索表（污水樣品接種量為5份10ml水樣，5份1ml水樣和0.1ml水樣）陽(yáng)性管數(shù)每陽(yáng)性管數(shù)每陽(yáng)性管數(shù)每接種接種接種100ml接種接種接種100ml接種接種接種100ml100ml10ml0.1ml水100ml10ml 0.1ml水100ml10ml0.1ml水水樣水樣樣水樣中水樣水樣樣水

28、樣中水樣水樣樣水樣中MPNMPNMPN0000200540013001220174011700242029402210035203124032500472041440430005920516405360102210741017011421194112101252121241226表A.1（續(xù)）陽(yáng)性管數(shù)每陽(yáng)性管數(shù)每陽(yáng)性管數(shù)每接種接種接種100ml接種接種接種100ml接種接種接種100ml100ml10ml0.1ml水100ml10ml 0.1ml水100ml10ml0.1ml水水樣水樣樣水樣中水樣水樣樣水樣中水樣水樣樣水樣中MPNMPNMPN|0137213144133101492141741

29、436015112151941542020422094202202162211242126022722214422320239223174233802411224194244402513225224255003062301243027031723114431330329232174323903311233204334503413234224345203515235254355904082401544034041924117441400421124220442470431324323443540441524425444620451724528445690509250174504105111251

30、20451480521325223452560531525326453640541725429454720551925532455811002300850023101430111501311026302135024310383031650358104103042050476105123052350595110431011510331116311145114611283121751263113103132051384表A.1（續(xù)）陽(yáng)性管數(shù)每陽(yáng)性管數(shù)每陽(yáng)性管數(shù)每接種100ml水樣接種10ml水樣接種0.1ml水樣100ml水樣中MPN接種100ml水樣接種10ml水樣接種0.1ml水樣100ml水

31、樣中MPN接種100ml水樣接種10ml水樣接種0.1ml水樣100ml水樣中MPN114123142351411011514315275151301206320145204912183211752170122103222052294123123232452312012415324275241501251732531525180130833017530791311033121531110132123322453214013315333285331801341733432534210135193353653525014011340215401301411334124541170142153422

32、854222014317343325432801441934436544350145223454054543015013350255502401511535129551350152173523255254015319353375539201542235441554160015524355455551600附錄B（規(guī)范性附錄）醫(yī)療污水中沙門氏菌的檢驗(yàn)B.1儀器和設(shè)備B.1.1高壓蒸汽滅菌器B.1.2干燥滅菌箱B.1.3培養(yǎng)箱B.1.4恒溫水浴箱B.1.5電爐B.1.6天平B.1.7滅菌平皿B.1.8滅菌刻度吸管B.1.9酒精燈B.2培養(yǎng)基和試劑B.2.1亞硒酸鹽增菌液（SF增菌液）B.2.1.1

33、成分胰蛋白腺（或多價(jià)腺）10g磷酸氫二鈉（Na2HPO3）16g磷酸二氫鈉（NaH2PO3）2.5g乳糖4g亞硒酸氫鈉4g蒸儲(chǔ)水1000mLB.2.1.2制法除亞硒酸氫鈉外，將以上各成分放入蒸儲(chǔ)水中，加熱溶化。再加入亞硒酸氫鈉，待完全溶解后，調(diào)整pH到7.07.1，分裝于三角燒杯內(nèi)。121C下滅菌15min備用。B.2.2二倍濃度亞硒酸鹽增菌液（二倍濃度SF增菌液）B.2.2.1成分除蒸儲(chǔ)水改為500mL外，其它成分同附錄B.2.1.1。B.2.2.2制法制法同附錄B.2.1.2。B.2.3 SS培養(yǎng)基B.2.3.1基礎(chǔ)培養(yǎng)基B.2.3.1.1成分牛肉膏5g示月東5g三號(hào)膽鹽3.5g瓊脂17g

34、蒸儲(chǔ)水1000mLB.2.3.1.2制法將牛肉膏、示腺和膽鹽溶解于400mL蒸儲(chǔ)水中。將瓊脂加到600mL蒸儲(chǔ)水中，煮沸使其溶解。再將二者混合，121C下滅菌15min,保存?zhèn)溆谩.2.3.2完成培養(yǎng)基B.2.3.2.1成分基礎(chǔ)培養(yǎng)基1000mL乳糖10g檸檬酸鈉8.5g硫代硫酸鈉10%寧檬酸鐵溶液19仲性紅溶液0.1%煌綠溶液B.2.3.2.2制法加熱溶化基礎(chǔ)培養(yǎng)基，按比例加入除中性紅和煌綠溶液以外的各成分，充分混合均勻，調(diào)整 加入中性紅和煌綠溶液，傾注平板。制好的培養(yǎng)基宜當(dāng)日使用，或保存于冰箱內(nèi)于18h內(nèi)使用?；途G溶液配好后應(yīng)在B.2.4亞硫酸鉗瓊脂培養(yǎng)基（BS培 養(yǎng)基）B.2.4.1B

35、.2.4.1.1蛋白月東牛肉膏氯化鈉瓊脂蒸儲(chǔ)水B.2.4.1.2加熱溶解各成分，按每份B.2.4.2亞硫酸鉗貯備液B.2.4.2.1成分檸檬酸鉗鉉亞硫酸鈉磷酸氯二鈉葡萄糖蒸儲(chǔ)水B.2.4.2.2制法將檸檬酸鉗鉉溶解于入磷酸氯二鈉攪拌至溶解。冷卻后，加入剩余的8.5g10mL2.5mL0.33mLpH到7.0 ,10天以內(nèi)使用。亞硫酸鉗瓊脂培養(yǎng)基（BS培妾宜基礎(chǔ)培養(yǎng)基成分10g5g5g20g1000mL制法100mL的量分裝于250mL三角瓶中，121C下滅菌20min備用。2g20g10g10g200mL50mL沸水中，同時(shí)將壓硫酸鈉溶解于100mL沸水中，混合兩液并煮沸3min,趁熱加50m

36、L葡萄糖水溶液，貯存于冰箱中。B.2.4.3檸檬酸鐵煌綠貯備液B.2.4.3.1成分檸檬酸鐵2g煌綠（1%水溶液）25mL蒸儲(chǔ)水200mLB.2.4.3.2制法將上述成分溶解于水中，盛于已滅菌的玻璃瓶?jī)?nèi)，貯存于冰箱。B.2.4.4完成培養(yǎng)基B.2.4.4.1成分基礎(chǔ)培養(yǎng)基100mL亞硫酸鉗貯備液20mL檸檬酸鐵煌綠貯備液4.5mLB.2.4.4.2制法加熱融化基礎(chǔ)培養(yǎng)基并冷卻至50C，同時(shí)分別加熱亞硫酸鉗貯備液和檸檬酸鐵煌綠貯備液至50Co在無菌操作下將后者加入到前者去，充分混合，無菌傾入已滅菌的培養(yǎng)皿中。B.2.5三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基（TSI培 養(yǎng)基）B.2.5.1成分蛋白月東20g牛肉膏5g乳

37、糖10g蔗糖10g葡萄糖1g氯化鈉5g硫酸亞鐵俊0.2g硫代硫酸鈉0.2g瓊脂12g酚紅0.025g蒸儲(chǔ)水1000mLB.2.5.2制法將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解于蒸儲(chǔ)水中，調(diào)pH到7.4。加入瓊脂，加熱煮沸，再加入0.2%酚紅水溶液12.5mL,搖勻。分裝試管，裝量宜多些，以便得到較高的底層。121C下滅菌15min。放置高層斜面?zhèn)溆?。B.2.6沙門氏菌診斷血清B.3檢驗(yàn)程序檢驗(yàn)程序見圖B.1 oaB. 1污水中沙門氏菌檢驗(yàn)程序/B.4操作步驟B.4.1樣品處理和增菌取200mL污水，用滅菌濾膜進(jìn)行抽濾。用100mL二倍濃度SF增菌液把濾膜上截留的雜質(zhì)洗脫到滅菌三角燒瓶?jī)?nèi)，充公搖勻，置于

38、37 C恒溫培養(yǎng)箱，增菌培養(yǎng)1224h。若樣品為經(jīng)過氯消毒的污水，應(yīng)在采樣后立即用5%硫代硫酸鈉溶液充分中和余氯。B.4.2平板分離取上述增菌培養(yǎng)液，分別接種于SS培養(yǎng)基平板和BS培養(yǎng)基平板，置于37C培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)24 h48h。觀察各平板上生長(zhǎng)的菌落形態(tài)。挑取在SS培養(yǎng)基平板上呈無色透明或中間有黑心，直徑12mm的菌落；挑取在BS培養(yǎng)基平板上呈黑色的菌落或灰綠色的可疑腸道病原菌菌落。每個(gè)平板最少挑取5個(gè)菌落，接種于TSI培養(yǎng)基中，置于37 C培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)18h24h。B.4.3鑒定B.4.3.1血清學(xué)試驗(yàn)在TSI培養(yǎng)基中，如不發(fā)酵乳糖，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣或只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，一般產(chǎn)生硫化氫，有

39、動(dòng)力者，先與沙門氏A-F群。多價(jià)血清作玻璃片凝集，凡與多價(jià)O血清凝集者，再與。因子血清凝集，以確定所屬群別，然后用H因子血清，確定血清型。雙向菌株應(yīng)證實(shí)兩相的H抗原，有Vi抗原的菌型（傷寒和丙型副傷寒沙門氏菌）應(yīng)用Vi因子血清檢驗(yàn)。B.4.3.2生化試驗(yàn)應(yīng)進(jìn)行葡萄糖、甘露醇、麥芽糖、乳糖、蔗糖、靛基質(zhì)、硫化氫、動(dòng)力、尿素試驗(yàn)。沙門氏菌屬中除傷寒沙門氏菌和雞沙門氏菌不產(chǎn)氣外，通過發(fā)酵葡萄糖、產(chǎn)氣、均發(fā)酵甘露醇和麥芽糖（但豬沙門氏菌、雛沙門氏菌不發(fā)酵麥芽糖），不分解乳糖、蔗糖，尿素酶和靛基質(zhì)為陰性，通常產(chǎn)生硫化氫。除雞、雛沙門氏 菌和傷寒沙門氏菌的O型菌株無動(dòng)力外，通常均有動(dòng)力。如遇多價(jià)。血清不凝

40、集而一般生化反應(yīng)符合上述情況時(shí)，可加做側(cè)金盞花醇、水楊素和割化鉀試驗(yàn)，沙門 氏菌均為陰性。B.5檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告根據(jù)檢驗(yàn)結(jié)果，報(bào)告一定體積的樣品中存在或不存在沙門氏菌。附錄C（規(guī)范性附錄）醫(yī)療污水中志賀氏菌的檢驗(yàn)方法C.1儀器和設(shè)備C.1.1高壓蒸汽滅菌器C.1.2干燥滅菌箱C.1.3培養(yǎng)箱C.1.4恒溫水浴箱C.1.5電爐C.1.6天平C.1.7滅菌平皿C.1.8滅菌刻度吸管C.1.9酒精燈C.2培養(yǎng)基和培養(yǎng)液C.2.1革蘭氏陰性增菌液（GN增菌液）C.2.1.1成分胰蛋白腺（或多價(jià)腺）20g葡萄糖1g甘露醇2g枸椽酸鈉5g去氧膽酸鈉0.5g磷酸氫二鉀16g磷酸二氫鉀2.5g氯化鈉5g蒸儲(chǔ)水10

41、00mLC.2.1.2制法將以上各成分加入蒸儲(chǔ)水中溶化，調(diào)整pH至7.0，煮沸過濾，115C下滅菌20min。貯存于冷暗處備用。C.2.2二倍濃度革蘭氏陰性增菌液（二倍濃度GN增菌液）C.2.2.1成分除蒸儲(chǔ)水改為500mL外，其它成分同附錄C2.1.1 oC.2.2.2制法制法同附錄C.2.1.2。C.2.3 SS培養(yǎng)基同附錄B.2.3。C.2.4伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基（EMB培）同附錄A.2.3。C.2.5三糖鐵瓊脂（TSI培）同附錄B.2.5。C.2.6志賀氏菌診斷血清C.3檢驗(yàn)程序檢驗(yàn)程序見圖C.1 o圈C1污水史袤襄氐圓椎驗(yàn)程序 5C.4操作步驟C.4.1樣品處理和增菌培養(yǎng)取200mL污

42、水，用滅菌濾膜進(jìn)行抽濾。若樣品為經(jīng)過氯消毒的污水，應(yīng)在采樣后立即用5%硫代硫酸鈉溶液充分中和余氯。用100mL二倍濃度GN增菌液把濾膜上截留的雜質(zhì)洗脫到已滅菌的三角燒瓶?jī)?nèi)，搖勻， 置于37C恒溫培養(yǎng)箱，增菌培養(yǎng)68h。C.4.2分離取上述增菌培養(yǎng)液，分別接種SS培養(yǎng)基平板和EMB培養(yǎng)基平板，置于37C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。挑取在SS培養(yǎng)基平板和EMB培養(yǎng)基平板上呈無色透明，直徑11.5mL的可疑腸道病原菌菌落。每個(gè)平板最少挑取5個(gè)菌落，接種于TSI培養(yǎng)基，置于37C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1824h。挑取在TSI中，葡萄糖產(chǎn) 酸不產(chǎn)氣，無動(dòng)力，不產(chǎn)生硫化氫，上層斜面乳糖不分解的菌株，可做血清學(xué)和生化試驗(yàn)。C

43、.4.3鑒定C.4.3.1血清學(xué)試驗(yàn)志賀氏菌屬分為四個(gè)群，先與多價(jià)血清作玻璃片凝集試驗(yàn)，如為陽(yáng)性，再分別與A、8 G D群血清凝集,并進(jìn)一步與分型血清做玻璃片凝集，最后確定其血清型。C.4.3.2生化試驗(yàn)應(yīng)進(jìn)行葡萄糖、甘露醇、麥芽糖、乳糖、蔗糖、靛基質(zhì)、硫化氫、動(dòng)力、尿素試驗(yàn)。志賀氏菌屬能分解葡萄糖，但不產(chǎn)氣（福氏志賀氏菌6型有時(shí)產(chǎn)生少量氣體），一般不能分解乳糖和蔗糖，宋內(nèi)氏志賀氏菌對(duì)乳 糖和蔗糖遲緩發(fā)酵產(chǎn)酸。志賀氏菌屬均不產(chǎn)生硫化氫，不分解尿素，無動(dòng)力。對(duì)甘露醇、麥芽糖的發(fā)酵及 靛基質(zhì)的產(chǎn)生，則因菌株不同而異。如遇多價(jià)血清玻璃片凝集試驗(yàn)為陰性，而生化反應(yīng)符合上述情況時(shí)，可加做肌醇、水楊酸、V-P、椽酸鹽、停化鉀等試驗(yàn)。志賀氏菌屬均為陰性反應(yīng)。C. 5檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告根據(jù)檢驗(yàn)結(jié)果，報(bào)告一定體積的樣品中存在或不存在志賀氏菌。附錄D（規(guī)范性附錄）醫(yī)療污水中結(jié)核桿菌的檢驗(yàn)方法D. 1儀器和設(shè)備D.1.1電爐D.1.2恒溫水