亞麻籽油的安全性與功能性評價

1、亞麻籽油的平安性與功能性評價摘要：目的：研究評價亞麻籽油的平安性與功能性。方法：采用高、中、低3個劑量組，進(jìn)行為期30d的灌胃實(shí)驗(yàn)，分析測定亞麻籽油對大鼠食物利用率、臟體比與各器官病理組織學(xué)的影響，同時，考察亞麻籽油對小鼠體重、免疫器官系數(shù)、吞噬指數(shù)、抗體積數(shù)等多項(xiàng)免疫指標(biāo)的影響。結(jié)果：平安性評價結(jié)果說明，與對照組比較，亞麻籽油對大鼠的食物利用率及臟體比無顯著影響P>0.05，對胃、腸、脾、肝臟、腎臟、卵巢及睪丸等未產(chǎn)生病理學(xué)改變;功能性評價結(jié)果說明，亞麻籽油對小鼠的體重與免疫器官均無顯著的影響，但可顯著提高吞噬指數(shù)、抗體積數(shù)等免疫功能。結(jié)論：亞麻籽油具有非常高的平安性和增強(qiáng)免疫力的功能

2、。關(guān)鍵詞：亞麻籽油;平安性;功能性;評價Abstract：Objective：Researchandevaluationofthesafetyandfunctionalityoflinseedoil.Methods：Threedosegroupsofhigh，medium，andlowwereusedfora30-daygavageexperimenttoanalyzeanddeterminetheeffectsoflinseedoilonfoodutilization，organ-to-bodyratioandhistopathologyofvariousorgansinrats.Atthe

3、sametime，thelinseedoilwasinvestigatedTheeffectonmousebodyweight，immuneorgancoefficient，phagocyticindex，anti-volumenumberandotherimmuneindicators.Results：Thesafetyevaluationresultsshowedthatcomparedwiththecontrolgroup，linseedoilhadnosignificanteffectonthefoodutilizationrateandorgan-to-bodyratioofrats

4、P>0.05，andhadnosignificanteffectonthestomach，intestine，spleen，liver，kidney，ovaryandtestis.Pathologicalchangesoccur;functionalevaluationresultsshowthatlinseedoilhasnosignificanteffectonthebodyweightandimmuneorgansofmice，butitcansignificantlyimproveimmunefunctionssuchasphagocyticindexandanti-volume

5、number.Conclusion：linseedoilhasveryhighsafetyandimmunityenhancementfunctions.Keywords：Linseedoil;Safety;Functionality;evaluation中圖分類號：TS201.4亞麻是一種高油料作物，又稱胡麻，主要用于植物油脂亞麻籽油的提取【1】。亞麻籽油中含豐富的營養(yǎng)成分，如維生素E、甾醇等，還含有特有的亞麻木酚素與亞麻肽2-3。另外，亞麻籽油的脂肪酸中不飽和脂肪酸含量較高，其中-亞麻酸含量高達(dá)40%以上，是目前最理想的單一植物油脂4-5。因其特有的營養(yǎng)成分及比例，研究說明在治療心血管疾病

6、、糖尿病等多種疾病方面具有顯著的療效6-7，亞麻籽油被譽(yù)為植物界的“深海魚油，市場開發(fā)前景巨大8-9。因此，廣闊的學(xué)者針對亞麻籽油的制備工藝、參數(shù)優(yōu)化、營養(yǎng)成分進(jìn)行深入的研究10-11。亞麻籽油因其獨(dú)特的營養(yǎng)品質(zhì)，針對其提取及加工已取得了一定的成果12，其相關(guān)產(chǎn)品的開發(fā)應(yīng)用前景必然廣闊。因此，本文以大鼠為研究對象，進(jìn)行為期4周的實(shí)驗(yàn)，主要考察亞麻籽油對大鼠體重、進(jìn)食量、食物利用率、臟體比的影響，并進(jìn)一步分析高劑量實(shí)驗(yàn)組的大鼠胃、腸、脾、肝臟等組織病理學(xué)的變化，分析亞麻籽油對大鼠身體功能的影響，為其全面利用和開發(fā)亞麻籽油提供科學(xué)指導(dǎo)和理論依據(jù)，為開發(fā)功能保健食品提供借鑒。1材料與方法1.1材料與

7、試劑亞麻籽油亞麻酸含量40%，由山西五臺山沙棘制品提供，為淺黃色至黃色液體。體重6579g清潔級SD大鼠80只，雌雄各半，由上海萊斯克實(shí)驗(yàn)動物有限責(zé)任公司提供，許可證號：SCXK滬2021-0008。體重1822g清潔級ICR雌性小鼠200只，由上海萊斯克實(shí)驗(yàn)動物有限責(zé)任公司提供，許可證號：SCXK滬2021-0002。飼料，由上海普路騰生物科技提供，許可證號：滬飼證202104001。注射用墨汁，刀豆蛋白AConA，MTT，DNFB，丙酮，麻油，SRBC，生理鹽水，雞紅細(xì)胞，羊紅細(xì)胞，甲醇，Giemsa染色，YAC-1細(xì)胞，Hanks液pH7.27.4，RPM11640完全培養(yǎng)液，乳酸鋰，碘

8、硝基氯化四氮唑INT，吩嗪二甲酯硫酸鹽PMS、NAD、Tris-HCl緩沖液pH8.2，1%NP40，臺酚蘭，1mol/L鹽酸，酸性異丙醇等。1.2儀器設(shè)備SHANDONEXCELSIOR全自動密封脫水機(jī)，電熱鼓風(fēng)枯燥箱，OlympusIX71倒置顯微鏡，8mm直徑打孔器，微量血凝試驗(yàn)板，2-16K通用離心機(jī)，RT-6100酶標(biāo)儀，96孔培養(yǎng)板，Co-150CO2培養(yǎng)箱，UV-1800紫外可見分光光度計(jì)，OlympusIX71倒置顯微鏡，電子天平，顯微鏡。1.3實(shí)驗(yàn)方法1.3.1受試樣品及配制亞麻籽油的成人日推薦量為3g，即0.05g·kg-1BW成人體重以60kg計(jì)。功能性評價實(shí)驗(yàn)

9、組按日推薦量的5倍、10倍、30倍配制受試樣品濃度，分別為0.150、0.050、0.025g·mL-1的高、中、低3個劑量組，以食用大豆油作為對照組。臨用前，稱取亞麻籽油15g與食用大豆油混合均勻至100mL，為高劑量組;取高劑量組樣品40mL，與食用大豆油混合均勻至120mL，為中劑量組;取中劑量組樣品40mL，與食用大豆油混合均勻至80mL，作為低劑量組;平安性評價實(shí)驗(yàn)組按照亞麻籽油受試物成人日推薦量的25、50和100倍，設(shè)3個劑量組為1.25、2.50、5.00g·kg-1BW，受試樣品采用同功能性評價小組相同的配制方法。1.3.2動物分組與給藥1平安性評價實(shí)驗(yàn)組

10、。參照韓飛等13的方法，各性別動物按體重隨機(jī)分成4組、每組10只。試驗(yàn)按照亞麻籽油受試物成人日推薦量的25、50和100倍，設(shè)3個劑量組為1.25、2.50、5.00g·kg-1BW，另設(shè)食用大豆油為空白對照。試驗(yàn)期間單籠喂養(yǎng)，自由進(jìn)食飲水，每天定點(diǎn)灌胃1000，觀察動物形態(tài)，分別進(jìn)行試驗(yàn)。2功能性評價實(shí)驗(yàn)組。200只小鼠隨機(jī)分成5大組，再分成4小組，每小組10只小鼠，按0.150、0.050、0.025g·mL-1的高、中、低劑量組每天定點(diǎn)灌胃1000，連續(xù)灌胃30d后，分別進(jìn)行試驗(yàn)。1.3.3平安性評價實(shí)驗(yàn)組實(shí)驗(yàn)方法對選取的平安性實(shí)驗(yàn)組的大鼠連續(xù)灌胃30d，進(jìn)行食物利用

11、率、病理組織學(xué)檢查。食物利用率公式為：11.3.4功能性評價實(shí)驗(yàn)組實(shí)驗(yàn)方法1小鼠體重的測定。標(biāo)記每只小鼠，對小鼠定點(diǎn)測定體重，記錄小鼠的初始體重和終期體重。2免疫器官系數(shù)。參照張勇14的實(shí)驗(yàn)方法。小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3d，隨機(jī)分成對照組、高劑量組、中劑量組和低劑量組，每組10只。按每日10mL·kg-1BW連續(xù)灌胃，連續(xù)30d，末次給藥5h后，脫頸椎處死小鼠，稱量小鼠體重，取腹腔液后，無菌別離肝臟和脾臟，稱重。23碳廓清實(shí)驗(yàn)。末次給藥5h后，注射印度墨水并記時，2、10min，分別取內(nèi)眥靜脈叢血20L，并立即參加2mL0.1%NaCO3溶液中，以NaCO3溶液為空白對照，在600nm處測定

12、OD值，將小鼠處死后，取出肝臟、脾臟后稱重，計(jì)算吞噬指數(shù)a。34式3中：K-碳廓清指數(shù)，表示吞噬速率;OD1-t1時的吸光度值;OD2-t2時的吸光度值;t1-給墨汁后第2次取血的時間;t2-給墨汁后第2次取血的時間;a-吞噬指數(shù)，反映每單位組織質(zhì)量的吞噬活性。4血清溶血素的測定。將小鼠摘除眼球采血，2000r·min-1離心10min進(jìn)行血清的別離，用生理鹽水稀釋不同倍數(shù)并置于微量血凝板內(nèi)，每孔100L，參加同體積的0.5%v/v的SRBC懸液，混勻，37溫箱孵育3h，觀察血球凝集程度15。按公式5計(jì)算抗體積數(shù)。抗體積數(shù)=S1+2S2+3S3+nSn5式中1、2、3.n代表對倍稀釋

13、的指數(shù)，S代表凝集程度的級別，抗體積數(shù)越大，表示血清抗體越高。0級紅細(xì)胞全部下沉，集中在孔底部形成致密的圓點(diǎn)狀，四周液體清晰。5遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)DTH檢測。末次給藥5h后，對小鼠腹部皮膚約3cm×3cm進(jìn)行脫毛處理，用50L的DNFB溶液涂抹均勻致敏;5d后，再以10L的上述溶液均勻涂抹小鼠右耳。24h后，頸椎脫臼處死小鼠，剪下左右耳，用打孔器取下直徑8mm的耳片稱重，按公式6計(jì)算左右耳腫脹度差。左右耳腫脹度差=右耳重量-左耳重量61.4數(shù)據(jù)處理所有試驗(yàn)的平行試驗(yàn)次數(shù)至少3次。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以SPSS軟件進(jìn)行單因素方差分析。經(jīng)方差齊性檢驗(yàn)，方差齊的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用LSD法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，方差不齊的

14、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Tamnane法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。當(dāng)概率值0.05時，判定為統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著。2結(jié)果與分析2.1亞麻籽油的平安性分析2.1.1對大鼠食物利用率的影響亞麻籽油對大鼠食物利用率的影響見表1。由表1可知，隨著時間的增加，對照組與各劑量組大鼠的食物利用率呈降低趨勢，與雌性大鼠比較，雄性大鼠的食物利用率普遍較高。其中，雄性大鼠的食物總利用率在34%左右，而雌性大鼠的食物總利用率在24%左右，與同性別同時期的對照組比較，大鼠的食物利用率無顯著差異。說明受試樣品亞麻籽油對大鼠的食物利用率無影響。2.1.2亞麻籽油對大鼠病理組織學(xué)的影響各劑量組大鼠檢查未發(fā)現(xiàn)明顯病變，且生化指標(biāo)未見異常，因此僅選對照組及高劑

15、量作組織病理學(xué)檢查。大鼠胃、腸、脾、卵巢和睪丸病理檢測結(jié)果見表2，大鼠肝臟與腎臟病理檢測結(jié)果見表3。由表2、表3可知，正常肝小葉結(jié)構(gòu)存在，肝細(xì)胞無明顯腫脹及顆粒變性，個別肝細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)少許細(xì)小的脂肪空泡，呈輕度脂肪變，脂變干細(xì)胞呈散在小灶分布，范圍小。干細(xì)胞無壞死改變，少數(shù)肝小葉、肝匯管區(qū)見淋巴細(xì)胞等炎細(xì)胞浸潤，無纖維組織增生，膽管未見異常;胃和十二指腸黏膜完整，無明顯出血、壞死、糜爛、潰瘍及炎細(xì)胞浸潤，無明顯腺體增生萎縮改變;腎皮髓質(zhì)結(jié)構(gòu)清楚，腎小管無明顯腫脹及空泡變性，個別腎間質(zhì)中有灶性炎細(xì)胞浸潤，個別腎髓質(zhì)部可見小囊腫;脾白髓、紅髓結(jié)構(gòu)清楚，白髓、紅髓無明顯擴(kuò)張或萎縮現(xiàn)象;睪丸曲細(xì)精管正

16、常，可見各級生精細(xì)胞及成熟精子;卵巢發(fā)育正常，可見各級卵泡和成熟黃體。綜合可知，以上病理學(xué)改變僅個別動物中發(fā)生，各組標(biāo)本病理變化無明顯差異，因此，亞麻籽油對各臟器未產(chǎn)生病理學(xué)改變。2.2亞麻籽油的功能性分析2.2.1對小鼠體重的影響亞麻籽油對小鼠體重的影響如圖1所示。由圖1可知，30d灌胃試驗(yàn)結(jié)束后，低劑量組小鼠的體重最高為33.2g，與對照組比較，高、中、低各劑量組小鼠的體重均無顯著差異P>0.05，說明亞麻籽油對小鼠體重?zé)o影響。2.2.2對小鼠各組臟器與體重比值的影響正常時各臟器與體重的比值比較恒定。當(dāng)動物染毒后，受損臟器重量可能發(fā)生改變，從而引起臟體比的變化。各劑量組胸腺指數(shù)、脾指

17、數(shù)的測定結(jié)果如圖2所示。由圖2可知，與對照組比較，高、中、低各劑量組均無顯著差異P>0.05。從統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析說明了亞麻籽油對小鼠的臟器/體重比值無影響，不能促進(jìn)免疫器官的增長。小鼠經(jīng)灌胃不同劑量的亞麻籽油30d，小鼠免疫功能的變化見表4。免疫細(xì)胞包括參與免疫應(yīng)答及免疫應(yīng)答相關(guān)的細(xì)胞，如淋巴細(xì)胞、單核-巨噬細(xì)胞等。其中單核巨噬細(xì)胞具有多種免疫調(diào)節(jié)的功能，而吞噬指數(shù)是反映機(jī)體非特異性免疫功能的重要指標(biāo)。由表4可知，高、中、低劑量組的碳廓清功能顯著高于對照組，且存在一定的劑量依賴關(guān)系。說明了不同劑量的亞麻籽油能夠增強(qiáng)單核-巨噬細(xì)胞功能?？贵w的功能是基于免疫球蛋白分子結(jié)構(gòu)，與其他球蛋白分子區(qū)別

18、在于能與抗原發(fā)生特異性結(jié)合和識別抗原的作用。由表4可知，各劑量組顯著高于對照組，隨著受試樣品濃度的增加，抗體生成量更多，從而引起溶血數(shù)量增加，說明了亞麻籽油促進(jìn)小鼠的抗體生成數(shù)增加。遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)DTH是由T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫應(yīng)達(dá)的一種類型，是一種常見的免疫反應(yīng)，因此其反應(yīng)的強(qiáng)度能反映細(xì)胞免疫水平，由表4可知，高劑量組的左右耳腫脹度即抗體水平顯著高于對照組，說明了亞麻籽油能夠增強(qiáng)細(xì)胞免疫活性。3結(jié)論經(jīng)30d灌胃實(shí)驗(yàn)后，與對照組比較，高、中、低各劑量組對大鼠的食物利用率與臟體比均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P>0.05。同時，亞麻籽油高劑量組對大鼠的胃、腸、脾、卵巢、睪丸、肝臟以及腎臟等均未產(chǎn)生病理學(xué)的改

19、變，說明亞麻籽油對小鼠身體無不良影響，平安性較高;經(jīng)功能性實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，亞麻籽油對小鼠的體重與免疫器官系數(shù)均無顯著影響，但對小鼠的免疫能力如吞噬指數(shù)、抗體積數(shù)與左右耳腫脹度差等指標(biāo)具有顯著的提高作用，因此，根據(jù)?保健食品檢驗(yàn)與評價技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)?的規(guī)定，亞麻籽油可提高小鼠的免疫功能，為其在食品、保健食品的開發(fā)應(yīng)用提供理論依據(jù)。參考文獻(xiàn)：【1】呂俊麗，馬雪慧，王華.微波預(yù)處理對亞麻籽油得率及其貯藏穩(wěn)定性的影響J.中國油脂，2021，456：13-17.【2】AddisCC，KohRS，GordonMB.PreparationandCharacterizationofaBio-basedPolymericW

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