細(xì)胞培養(yǎng)基本知識基本技術(shù)PPT學(xué)習(xí)教案

1、會計(jì)學(xué)1第1頁/共67頁第2頁/共67頁第3頁/共67頁第4頁/共67頁第5頁/共67頁第6頁/共67頁第7頁/共67頁第8頁/共67頁第9頁/共67頁一群細(xì)胞的增殖：細(xì)胞生長曲線第10頁/共67頁潛伏期/滯留期指數(shù)增長期平臺期/停滯期退化或死亡第11頁/共67頁第12頁/共67頁第13頁/共67頁第14頁/共67頁方法：方法： 將培養(yǎng)對象直接接種于培養(yǎng)瓶內(nèi)，再將培養(yǎng)對象直接接種于培養(yǎng)瓶內(nèi)，再放入培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。放入培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：1、可以避免培養(yǎng)瓶表面粗糙等原因?qū)ε囵B(yǎng)物、可以避免培養(yǎng)瓶表面粗糙等原因?qū)ε囵B(yǎng)物的影響。的影響。2、可以方便地進(jìn)行顯微鏡觀察、染色等操作，、可以方便地進(jìn)行

2、顯微鏡觀察、染色等操作，以及永久保存。以及永久保存。3、增加了培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)面積。、增加了培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)面積。第15頁/共67頁方法：將培養(yǎng)細(xì)胞接種在培方法：將培養(yǎng)細(xì)胞接種在培養(yǎng)板的孔內(nèi)，然后在養(yǎng)板的孔內(nèi)，然后在CO2培培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。應(yīng)培養(yǎng)量較小養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。應(yīng)培養(yǎng)量較小也稱為微量培養(yǎng)。也稱為微量培養(yǎng)。第16頁/共67頁也稱植塊懸滴培養(yǎng)法，是最早建立的體外培養(yǎng)技術(shù)基本要點(diǎn)：基本要點(diǎn)：將組織或器官植塊接種在一張蓋將組織或器官植塊接種在一張蓋玻片上，滴上一滴培養(yǎng)液，然后翻轉(zhuǎn)蓋玻片使玻片上，滴上一滴培養(yǎng)液，然后翻轉(zhuǎn)蓋玻片使植塊及營養(yǎng)液懸掛在蓋玻片下，再放置于一凹植塊及營養(yǎng)液懸掛在蓋玻片下，再放置于一凹形載

3、片之上，最后用溶蠟密封后放入培養(yǎng)箱中形載片之上，最后用溶蠟密封后放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)。第17頁/共67頁第18頁/共67頁懸滴培養(yǎng)法基本步驟1、在蓋玻片上滴加胚胎提取液、血漿和、在蓋玻片上滴加胚胎提取液、血漿和植塊，混勻。培養(yǎng)基凝固后將植塊包埋。植塊，混勻。培養(yǎng)基凝固后將植塊包埋。2、在凹載片周圍涂凡士林。將凹載片向、在凹載片周圍涂凡士林。將凹載片向下壓向蓋玻片下壓向蓋玻片3、將凹載片反轉(zhuǎn)，蓋玻片周圍涂溶蠟。、將凹載片反轉(zhuǎn)，蓋玻片周圍涂溶蠟。放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)第19頁/共67頁第20頁/共67頁廣泛應(yīng)用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究廣泛應(yīng)用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究各個(gè)領(lǐng)域。各個(gè)領(lǐng)域。第21頁/共67

4、頁無血清培養(yǎng)基無血清培養(yǎng)基:是不需要添加血清就可以維持細(xì)胞在是不需要添加血清就可以維持細(xì)胞在體外較長時(shí)間生長繁殖的合成培養(yǎng)基。但是它們可能包含體外較長時(shí)間生長繁殖的合成培養(yǎng)基。但是它們可能包含個(gè)別蛋白或大量蛋白組分?；境煞譃榛A(chǔ)培養(yǎng)基及添加個(gè)別蛋白或大量蛋白組分?；境煞譃榛A(chǔ)培養(yǎng)基及添加組分兩大部分。組分兩大部分。觀察一種生長因子對某種細(xì)胞的作用，這時(shí)需要排除其他生長因子的干擾作用。而血清中可能含有各種生長因子；又如需要測定某種細(xì)胞在培養(yǎng)過程中分泌某種物質(zhì)（抗體、生長因子）的能力；或者要大規(guī)模的培養(yǎng)某種細(xì)胞，以獲得它們的分泌產(chǎn)物。往往針對性很強(qiáng)，價(jià)格偏高。第22頁/共67頁第23頁/共67

5、頁第24頁/共67頁第25頁/共67頁優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：1）研究的條件可以人為控制）研究的條件可以人為控制2）研究的樣本均一）研究的樣本均一3）研究內(nèi)容方便觀察、檢測、記錄）研究內(nèi)容方便觀察、檢測、記錄4）研究的費(fèi)用相對于經(jīng)濟(jì)）研究的費(fèi)用相對于經(jīng)濟(jì)缺點(diǎn)：體外培養(yǎng)的細(xì)胞不能完全等同于體缺點(diǎn)：體外培養(yǎng)的細(xì)胞不能完全等同于體內(nèi)的細(xì)胞。內(nèi)的細(xì)胞。第26頁/共67頁嬰兒第27頁/共67頁營養(yǎng)需要營養(yǎng)需要環(huán) 境 要 求無毒及無污染無毒及無污染第28頁/共67頁第29頁/共67頁第30頁/共67頁另一批號的血清另一批號的血清第31頁/共67頁第32頁/共67頁第33頁/共67頁第34頁/共67頁第35頁/共67頁

6、第36頁/共67頁第37頁/共67頁第38頁/共67頁第39頁/共67頁第40頁/共67頁2、 環(huán)境要求第41頁/共67頁第42頁/共67頁酚紅指示劑：黃酚紅指示劑：黃 6.6 橙橙 8.0 紅紅第43頁/共67頁無無 毒：毒：無毒是培養(yǎng)細(xì)胞的必需條件。凡與無毒是培養(yǎng)細(xì)胞的必需條件。凡與 細(xì)胞直接或間接接觸的東西都必細(xì)胞直接或間接接觸的東西都必須須 是無毒的。若具細(xì)胞毒性，細(xì)胞容是無毒的。若具細(xì)胞毒性，細(xì)胞容 易導(dǎo)致死亡。因此，選用器皿和材易導(dǎo)致死亡。因此，選用器皿和材 料時(shí)必須注意。料時(shí)必須注意。第44頁/共67頁無微生物的污染微生物的污染不同細(xì)胞類型的交叉污染不同細(xì)胞類型的交叉污染細(xì)菌細(xì)菌

7、霉菌霉菌支原體支原體體外培養(yǎng)的細(xì)胞缺乏機(jī)體免疫系統(tǒng)，無防御能力，體外培養(yǎng)的細(xì)胞缺乏機(jī)體免疫系統(tǒng)，無防御能力，一旦發(fā)生細(xì)菌等污染，細(xì)胞最終會死亡。一旦發(fā)生細(xì)菌等污染，細(xì)胞最終會死亡。交叉污染容易使細(xì)胞系失去原有特性。交叉污染容易使細(xì)胞系失去原有特性。第45頁/共67頁第46頁/共67頁4545角取用角取用n操作過程中注意操作過程中注意，有菌意識，無菌，有菌意識，無菌操作！操作！第47頁/共67頁第48頁/共67頁第49頁/共67頁第50頁/共67頁第51頁/共67頁第52頁/共67頁第53頁/共67頁數(shù)并調(diào)整細(xì)胞密度。數(shù)并調(diào)整細(xì)胞密度。第54頁/共67頁第55頁/共67頁第56頁/共67頁第57

8、頁/共67頁第58頁/共67頁第59頁/共67頁第60頁/共67頁第61頁/共67頁第62頁/共67頁第63頁/共67頁第64頁/共67頁 首要原則：所有感染性材料必須在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)清除污染、高壓滅菌或焚燒。 用以處理潛在感染性微生物或動物組織的所有的實(shí)驗(yàn)室物品，在被丟棄前應(yīng)考慮的主要問題有： 1、是否已采取規(guī)定程序?qū)@些物品進(jìn)行了有效的清除污染或消毒？ 2、丟棄已清除污染的物品時(shí)，是否會對直接參與丟棄的人員，或在設(shè)施外可能接觸到丟棄物的人員造成任何潛在的生物學(xué)或其他方面的危害？ 3.清除污染 高壓蒸汽滅菌是清除污染時(shí)的首選方法。需要清除污染并丟棄的物品應(yīng)裝在容器中。任何高壓滅菌后重復(fù)使用的污染（有潛在感染性）材料不應(yīng)事