酵母多糖在養(yǎng)豬應(yīng)用中的實(shí)驗(yàn)報(bào)告-整理

1、酵母免疫多糖的實(shí)驗(yàn)報(bào)告2011年6月酵母細(xì)胞壁粉在生長(zhǎng)豬上的應(yīng)用試驗(yàn)報(bào)告畜禽飼料中長(zhǎng)期大量應(yīng)用抗生素而造成抗生素在畜產(chǎn)品中的殘留及使細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性使人們迫切地意識(shí) 到尋求抗生素替代品的重要性。酵母細(xì)胞壁是一種全新的天然綠色飼料添加劑，其產(chǎn)品為淺灰至深灰色粉末狀, 富含b葡聚糖、甘露寡糖、海藻糖等功能成分，占細(xì)胞壁干重的85%左右。二十世紀(jì)四十年代，pillemer fw 士首次發(fā)現(xiàn)并報(bào)道酵母細(xì)胞壁中有一種物質(zhì)具有提高機(jī)體免疫力的作用。酵母細(xì)胞壁作為一種高效免疫增強(qiáng)劑, 可以刺激動(dòng)物產(chǎn)生非特異性免疫應(yīng)答，提高和調(diào)節(jié)動(dòng)物細(xì)胞免疫和體液免疫水平，維護(hù)活菌平衡，控制疾病等 生理功效。在豬飼料中添加少量

2、酵母細(xì)胞壁提取物，能改變其消化道微生物菌群，提高豬的增重和飼料轉(zhuǎn)化率, 且對(duì)腸道組織具有保護(hù)和營(yíng)養(yǎng)作用。岳文斌(2002)報(bào)道，甘露寡糖能極顯著提高斷奶仔豬血清igg水平 (p<0.01)o eicher(2006)所做的試驗(yàn)表明，對(duì)于未斷奶仔豬和斷奶后仔豬，將b葡聚糖與維生素c聯(lián)合使 用，比單獨(dú)使用vc的對(duì)照組的平均日增重要高，差異達(dá)到顯著水平(pvo.05)。由于酵母細(xì)胞壁的天然無公害性，本研究選用生長(zhǎng)豬以研究酵母細(xì)胞壁的免疫促進(jìn)作用及對(duì)生長(zhǎng)豬生產(chǎn)性 能的影響，為在養(yǎng)豬生產(chǎn)中不使用抗生素生產(chǎn)安全豬肉提供科學(xué)依據(jù)。1試驗(yàn)材料及方法11試驗(yàn)產(chǎn)品唐山托普生物科技有限公司生產(chǎn)啤酒酵母免疫多糖

3、。1.2試驗(yàn)動(dòng)物平均體重在30.0 + 0.5 kg左右的杜x長(zhǎng)x大三元雜交小豬。由河北唐山玉田養(yǎng)豬場(chǎng)提供。1.3試驗(yàn)日糧根據(jù)營(yíng)養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配置基礎(chǔ)口糧，飼糧配方及營(yíng)養(yǎng)水平指標(biāo)見表1，試驗(yàn)組在基礎(chǔ)口糧上添加2g/kg拓普啤酒 酵母多糖。飼喂28天。表1飼料配方及營(yíng)養(yǎng)水平指標(biāo)table 1 forumlation and nutrient level原料名稱原料配比營(yíng)養(yǎng)水平營(yíng)養(yǎng)成分含量對(duì)照組處理組玉米2級(jí)()68.668.6豬消化能(mj/kg)13.81大豆粕,2級(jí)()23.123粗蛋白質(zhì)(%)16.97魚粉()1.01.()鈣(%)0.61小麥厭()5.04.7總磷(%)0.52賴氨酸（）0.08

4、0.08有效磷（%）0.28石粉（）0.90.9食鹽（%）0.43磷酸氫鈣（）0.70.7賴氨酸（%）0.90食鹽（）0.40.4總含硫氨基酸（）0.57豬用多礦（）0.20.2蛋氨酸（%）0.28豬用多維（）0.020.02酵母細(xì)胞壁（）0.22 方法2.1斷奶仔豬生長(zhǎng)性能測(cè)定方法2.1.1試驗(yàn)分組選擇日齡相近，平均體重在30.0 + 0.5 kg左右的杜x長(zhǎng)x大三元雜交小豬60頭，豬只健康，大小均勻, 公母各半，隨機(jī)分為2個(gè)處理，每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10頭。對(duì)照組：基礎(chǔ)日糧組，處理組：基礎(chǔ)tl 糧+酵母細(xì)胞壁（2g/kg ）。2.1.2日常管理每天飼喂3次，早晨6:30,上午11:3

5、0,下午18:00,豬只自由飲水。記錄試驗(yàn)前重量，每天采食量， 腹瀉情況，試驗(yàn)后重量，并于試驗(yàn)第二十四天前腔靜脈采血，每重復(fù)3頭。豬只發(fā)生病變或異常，要及時(shí)處理 并記錄。2.2試驗(yàn)預(yù)處理在正式試驗(yàn)開始后的第7天，每個(gè)重復(fù)選取3頭體重相近的健康豬，耳后肌肉注射牛血清白蛋白 （bsa）lmg/kg體重進(jìn)行免疫。并在免疫后的0天（試驗(yàn)的第7天）、7天（試驗(yàn)第14天）和21天（試驗(yàn)28天） 用10ml真空釆血管頸靜脈釆血5ml, 3000轉(zhuǎn)/分離心15分鐘，制備血清，20°c冰箱保存?zhèn)溆?。于試?yàn)正式開始后的第14天，對(duì)各處理組剩余的豬只隨機(jī)選取2頭，進(jìn)行皮膚過敏試驗(yàn)。其中1頭在豬 的左大腿內(nèi)

6、側(cè)腹骨溝皮下注射05ml pha （phytone magglutinin，植物凝集素）溶液（250pg/ml,右腿注 射05ml生理鹽水），圓圈標(biāo)記。并分別于注射前和注射24小時(shí)后用厚度計(jì)測(cè)定注射部位的皮褶厚度（三次 讀數(shù)，求平均值），再求出兩腿皮褶增厚的差值，觀察過敏反應(yīng)程度。另外1頭左腿注射1ml pha,右腿注 射1ml生理鹽水（其它處理同上1頭豬），測(cè)定24小時(shí)后皮褶厚度增厚值。2.3試驗(yàn)檢測(cè)指標(biāo)及方法2.3.1生產(chǎn)性能指標(biāo)：以平均日增重、平均日采食量、料肉比以及成活率、下痢豬頭數(shù)來表示。分別于試驗(yàn)開 始時(shí)和結(jié)束時(shí)稱量并記錄試驗(yàn)豬的初始體重和終體重，記錄試驗(yàn)期間各處理組總耗料，計(jì)算各

7、試驗(yàn)組生長(zhǎng)豬試 驗(yàn)期間的平均日增重、平均日采食量、料肉比。2.3.2血液生化指標(biāo)：總蛋白（tp）、球蛋白（glb）、清蛋白（alb）、計(jì)算球/清蛋白比（g/a）。分別于正 式試驗(yàn)開始后的笫7天、第14天、笫28天前腔靜脈采血制備血清，檢測(cè)血清屮的總蛋白、白蛋白、計(jì)算球/ 白比值。2.3.3免疫指標(biāo)：a、體液免疫指標(biāo)：使用牛血清白蛋白（bsa）試劑，采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法，在酶聯(lián)免疫 自動(dòng)讀數(shù)儀492nm處讀數(shù)，以1： 50倍稀釋光吸收值表示其抗體生成，測(cè)定血清屮bsa抗體效價(jià)（od值）。 b、細(xì)胞免疫指標(biāo)：遲發(fā)性過敏反應(yīng)的測(cè)定，生長(zhǎng)豬左腿內(nèi)側(cè)皮下注射植物血球凝集素（pha）,右側(cè)注射生 理鹽水

8、，測(cè)定24小時(shí)后左右腿皮褶厚度增厚差值。3 試驗(yàn)結(jié)果與分析3.1生產(chǎn)性能試驗(yàn)結(jié)果見表2。表2試驗(yàn)豬生產(chǎn)性能指標(biāo)table 2 the performance of polysaccharide from yeast cell wall on the growing swine項(xiàng)目日增重（g）日采食量（g）料肉比成活率（）對(duì)照組658.6"15862.41100處理組698.316332.34100注：同列肩注有不同字母者差異顯著（p<005） o由表2可見，處理組生長(zhǎng)豬的平均口增重、平均日采食量均好于對(duì)照組，且平均日增重經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，處理 組與對(duì)照組相比差異達(dá)顯著水平（pv0.0

9、5），而料肉比處理組豬與對(duì)照組相比稍低。同時(shí)，在整個(gè)試驗(yàn)期間， 對(duì)照組有5頭豬出現(xiàn)下痢后經(jīng)治療痊愈，而處理組豬未出現(xiàn)豬只發(fā)病情況。3.2血液生化指標(biāo)試驗(yàn)結(jié)果見表3。対照組與處理組血清總蛋白含量在整個(gè)試驗(yàn)期間（1-28天）時(shí)上升，但對(duì)照組與處理組 之間差異不顯著，同時(shí)，在正式試驗(yàn)的第7天、第14天、第28天，血清總蛋白含量各處理組內(nèi)統(tǒng)計(jì)分析差 異沒達(dá)到顯著水平。在整個(gè)試驗(yàn)期間對(duì)照組與處理組血清中白蛋白含量上升，且對(duì)照組血清中白蛋白含量上升 幅度大于處理組。在試驗(yàn)的第7天、第14天，處理組血清中球/白均高于對(duì)照組（p>005）,但在試驗(yàn)的第 28天時(shí)處理組血清中球/白低于對(duì)照組，統(tǒng)計(jì)分析差異

10、達(dá)到顯著水平（pv0.05）。血清白蛋白的作用主要是 用以維持機(jī)體血管內(nèi)滲透壓的平衡和物質(zhì)的運(yùn)輸。而抗體是球蛋白重要的組成部分，炎癥反應(yīng)和應(yīng)激狀態(tài)下， 血清球蛋白的含量增加。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在經(jīng)過抗原牛血清白蛋白刺激后，機(jī)體的免疫系統(tǒng)被激活，更多的 蛋白質(zhì)用于抗體的合成，隨著抗體的產(chǎn)生量的提高，血液中的球蛋白含量隨之增加，球/白值升高。在試驗(yàn)的第 28天時(shí)處理組中球/白比值低于對(duì)照組。球/白在整個(gè)試驗(yàn)期間先升高后降低，且處理組球/白下降幅度大于對(duì) 照組，表明酵母細(xì)胞壁可以減低免疫反應(yīng)程度，避免機(jī)體長(zhǎng)期處于高度應(yīng)激狀態(tài)，從而達(dá)到促進(jìn)動(dòng)物機(jī)體生長(zhǎng) 的作用。表3血清生化指標(biāo)table 3 the r

11、esults of blood serum biochemistry試驗(yàn)時(shí)間處理組總蚩白（g/dl）白蛋白（g/dl）球/白第7天對(duì)照組5.863+0.6423.475+0.0830.691+0.225處理組5.558+0.363318+0.1860.792+0.278第14天對(duì)照組6.788+0.6163.808+0.348*0.797+0.271處理組5.974+0.3013.304+0.234b0.814+0.159第28天對(duì)照組7.170+0.9204.161+0.5380.725+005*處理組6.030+0.4433.995+0.3460.51()4-0.021b注：同列肩標(biāo)不同字

12、母者差異顯著（pv0.05）。3.3牛血清白蛋白（bsa）抗體0d值在試驗(yàn)期間，前腔靜脈采取牛血清白蛋白（bsa）免疫后0天、第7天、第21天的試驗(yàn)豬血清，檢測(cè)bsa抗體0d值。對(duì)照組和處理組的bsa抗體0d值結(jié)果見表4。表4 bsa抗體0d值table 4 the od amount of bowine serum albumin(bsa) antibody試驗(yàn)時(shí)間對(duì)照組處理組免疫后0天11免疫后7夭1.091+0.097“1.426+0.396b免疫后21天1.066+0.0461.173+0.i6i注：同行肩注有不同字母者表示差異顯著（p<0.05）o分析發(fā)現(xiàn)，在bsa免疫前，豬血

13、清中中已經(jīng)含有bsa抗體，且變異很大。而試驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)認(rèn)為bsa為一 種異源蛋白抗原，豬血清中bsa抗體水平應(yīng)該為零。估計(jì)這種抗體是由于許多疫苗如豬瘟疫苗中含有牛血清 白蛋白成分（例如作為佐劑）造成的。事實(shí)上，在本試驗(yàn)開始之前，該豬場(chǎng)己對(duì)試驗(yàn)豬群進(jìn)行過兩次豬瘟疫苗免 疫。盡管如此，當(dāng)以注射bsa抗體0d值為1時(shí)，用各時(shí)間點(diǎn)的0d值與之比較，則比值仍可出現(xiàn)較明顯的 規(guī)律性變化，即免疫后第7天時(shí)，bsa抗體的0d值均升高（pv0.05）,免疫后第21天時(shí)bsa抗體的0d 值均下降（p>005）,且處理組（酵母細(xì)胞壁組）下降幅度大于對(duì)照組，這與血液生化指標(biāo)反映的酵母細(xì)胞壁 具有減低免疫反應(yīng)程度，避

14、免動(dòng)物機(jī)體長(zhǎng)期處于高度應(yīng)激狀態(tài)的作用一致。3.4皮褶厚度增加值試驗(yàn)結(jié)果見表5。表5植物血球凝集素（pha）注射左右腿皮褶厚度增厚差值（mm）table 5 the effect of skinfold thickness stimulated by phytohemagglutininpha處理處理試驗(yàn)第7天試驗(yàn)第14天試驗(yàn)第28天左腿注射（）.5 ml pha,右腿注射0.5ml對(duì)照組4.876.424.67生理鹽水處理組7.05758.23左腿注射1.0 ml pha,右腿注射1.0ml對(duì)照組6.878.587.36生理鹽水處理組9.2210.9212.09pha是一種促有絲分裂原。動(dòng)物皮

15、下組織對(duì)pha的反應(yīng)狀況是細(xì)胞免疫的一項(xiàng)指標(biāo)5。免疫組織學(xué)分 析，這種皮下反應(yīng)的主要參與者為單核細(xì)胞和致敏的t淋巴細(xì)胞。其反應(yīng)包括局部發(fā)炎感染并向皮下擴(kuò)散，血 管周圍白細(xì)胞聚集成套狀、水腫以及皮膚膠原蛋白隆起。由表5可知，處理組豬pha注射后24小時(shí)后左右腿 皮褶厚度增加值大于對(duì)照組，表明在飼料中添加酵母細(xì)胞壁具有提高生長(zhǎng)豬細(xì)胞免疫的作用效果。pha注射 lml時(shí)皮褶厚度增厚差值大于注射pha 0.5ml劑量時(shí)皮褶厚度增厚差值初步表明皮褶厚度的增厚值與注射 pha的劑量有一定的關(guān)系。4 討論與小結(jié)進(jìn)一步研究表明，酵母細(xì)胞壁的功能物質(zhì)主要是b葡聚糖和甘露寡糖。(3-葡聚糖是葡萄糖的一種聚合物，

16、在酵母細(xì)胞壁屮主要是由d 一葡萄糖通過p-d-(l-3)鍵的方式相結(jié)合，也有部分是高度分支的|3-d-(l-6)鍵 結(jié)合的聚糖，不同于植物細(xì)胞壁屮的|3-(14)葡聚糖。(3葡聚糖是酵母細(xì)胞壁行使其特殊功能的多糖，約占細(xì) 胞總重的12%14%。體內(nèi)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(res )在葡聚糖的刺激下，產(chǎn)生人量對(duì)機(jī)體免疫功能起關(guān)鍵作用的 巨噬細(xì)胞，而巨噬細(xì)胞通過吞噬作用吸收、破壞和淸除體內(nèi)損傷的、衰老的、死亡的自身細(xì)胞和侵入體內(nèi)的病 原微生物。甘露寡糖(mannan - oligosacharideszmos或bio mos)是一種重要的寡糖。研究表明，某些對(duì)動(dòng) 物體有害的微生物如大腸桿菌、沙門氏菌等，以葡萄糖作為主要的能源，而有益菌如雙歧桿菌、乳酸桿菌等則 是以寡糖為主要能源。病原菌細(xì)胞表面或絨毛上具有類丁質(zhì)結(jié)構(gòu)(如植物凝集素)，它能夠通過識(shí)別''特異性糖類 受體(糖脂或擴(kuò)蛋白的殘基)，并與受體結(jié)合，在腸壁上發(fā)育繁殖，導(dǎo)致腸道疾病的發(fā)生。酵母細(xì)胞壁所含的甘 露寡糖(簡(jiǎn)稱mos)與病原菌在腸壁上的受體非常相似，并與類丁質(zhì)(lectin)有很強(qiáng)的結(jié)合能力，動(dòng)物腸道內(nèi)豐 富的甘露糖源避免了細(xì)菌與腸壁的親和。同時(shí)由于mos不會(huì)被消化酶降解并攜