益氣活血中藥延緩血管老化的作用與機制研究ppt課件

1、益氣活血中藥延緩血管老化的益氣活血中藥延緩血管老化的作用與機制研討作用與機制研討中國中醫(yī)科學(xué)院中國中醫(yī)科學(xué)院 雷雷 燕燕 陳可冀陳可冀 等等973工程分課題之一工程分課題之一研討背景研討背景 血管老化血管老化vascular agingvascular aging分為隨增齡所致的生理性血分為隨增齡所致的生理性血管老化和各種疾病引起的病理性血管老化，均表現(xiàn)血管在管老化和各種疾病引起的病理性血管老化，均表現(xiàn)血管在形狀和功能上發(fā)生各種衰老變化，如生硬度添加、順應(yīng)性形狀和功能上發(fā)生各種衰老變化，如生硬度添加、順應(yīng)性降低和動脈管壁增厚、血管內(nèi)皮功能低下等降低和動脈管壁增厚、血管內(nèi)皮功能低下等 血管老化是

2、人體衰老的關(guān)鍵始發(fā)要素，也是老齡人群心血血管老化是人體衰老的關(guān)鍵始發(fā)要素，也是老齡人群心血管疾病風(fēng)險添加的主要緣由管疾病風(fēng)險添加的主要緣由 衰老的過程其實是一個動脈進展性硬化的過程，動脈硬化衰老的過程其實是一個動脈進展性硬化的過程，動脈硬化是衰老的根本緣由，對衰老起決議要素的是血管而非年齡是衰老的根本緣由，對衰老起決議要素的是血管而非年齡研討背景 目前我國老齡人口比例以每年目前我國老齡人口比例以每年3%3%的速度遞增的速度遞增, ,老齡人群具有老齡人群具有心腦血管病發(fā)病率高的特點，高血壓病、冠心病、心功能心腦血管病發(fā)病率高的特點，高血壓病、冠心病、心功能不全、腦卒中等發(fā)生率隨增齡急劇上升，均存

3、在著明顯的不全、腦卒中等發(fā)生率隨增齡急劇上升，均存在著明顯的心血管老化的表現(xiàn)，即心血管系統(tǒng)構(gòu)造和功能發(fā)生特征性心血管老化的表現(xiàn)，即心血管系統(tǒng)構(gòu)造和功能發(fā)生特征性改動改動 隨增齡出現(xiàn)的血管老化問題已成為研討心血管病危險要素隨增齡出現(xiàn)的血管老化問題已成為研討心血管病危險要素及防治的新靶點，開展心血管衰老的中醫(yī)藥干涉研討，對及防治的新靶點，開展心血管衰老的中醫(yī)藥干涉研討，對延緩血管老化，防治心腦血管疾病具有重要意義延緩血管老化，防治心腦血管疾病具有重要意義 血管老化屬于血管病變的一種，可由增齡、高脂飲食、運動血管老化屬于血管病變的一種，可由增齡、高脂飲食、運動減少、高血壓、糖尿病、肥胖等緣由引起，老

4、化的血管病理減少、高血壓、糖尿病、肥胖等緣由引起，老化的血管病理學(xué)表現(xiàn)為血管內(nèi)膜增厚、血管硬化和動脈血壓改動學(xué)表現(xiàn)為血管內(nèi)膜增厚、血管硬化和動脈血壓改動 隨著對血管病變認識的深化隨著對血管病變認識的深化, 知血管壁病變而不是管腔病變知血管壁病變而不是管腔病變的發(fā)生開展才是各種心血管事件發(fā)生的根底；在細胞和分子的發(fā)生開展才是各種心血管事件發(fā)生的根底；在細胞和分子程度，血管老化表如今血管內(nèi)皮細胞、平滑肌細胞和胞外基程度，血管老化表如今血管內(nèi)皮細胞、平滑肌細胞和胞外基質(zhì)程度的改動質(zhì)程度的改動 血管老化改動了各種心血管疾病的病理生理機制，從而改動血管老化改動了各種心血管疾病的病理生理機制，從而改動了疾

5、病發(fā)生的閾值、嚴重程度和預(yù)后了疾病發(fā)生的閾值、嚴重程度和預(yù)后老齡及血管老化概述老齡及血管老化概述老齡及血管老化概述老齡及血管老化概述血管老化與血管病變血管老化與血管病變血管老化de主要表現(xiàn)p 脈搏波速度脈搏波速度(PwV) 是評價血管硬度的較好目的是評價血管硬度的較好目的p 脈壓增大是反映血管硬化的一項重要目的脈壓增大是反映血管硬化的一項重要目的p 頸總動脈內(nèi)徑反映血管壁彈性與伸展性隨年齡而下降頸總動脈內(nèi)徑反映血管壁彈性與伸展性隨年齡而下降,是衰老的標志是衰老的標志p 踝臂指數(shù)踝臂指數(shù)(ABI)作為評價血管功能的目的，其降低反映作為評價血管功能的目的，其降低反映ASp 晚期糖基化終產(chǎn)物晚期糖基

6、化終產(chǎn)物(AGE)隨增齡在體內(nèi)積累，是老年病的病理根底之一隨增齡在體內(nèi)積累，是老年病的病理根底之一p 活性氧活性氧(ROS)程度異常增高在介導(dǎo)血管衰老中居于重要的位置程度異常增高在介導(dǎo)血管衰老中居于重要的位置p 腎素腎素-血管緊張素系統(tǒng)血管緊張素系統(tǒng)(RAS) 調(diào)理血管細胞的凋亡、調(diào)理血管細胞的凋亡、VSMC 遷移、炎性反遷移、炎性反響及響及ECM重建等，重建等，Ang是是RAS的功能多肽的功能多肽p 基質(zhì)金屬蛋白酶基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2)與其抑制劑與其抑制劑(TIMP-2) 比值的調(diào)理可以控制血管比值的調(diào)理可以控制血管重構(gòu)的發(fā)生、開展重構(gòu)的發(fā)生、開展中醫(yī)學(xué)對血管衰老的認識中醫(yī)學(xué)對血管衰老的

7、認識u以為虛損致衰。氣腎虛夾瘀阻絡(luò)是血管衰老的根本病以為虛損致衰。氣腎虛夾瘀阻絡(luò)是血管衰老的根本病機；延緩衰老應(yīng)補虛祛瘀法并用機；延緩衰老應(yīng)補虛祛瘀法并用u心血管疾病的根底病變和共同歸路是血管老化，也是多種心血管疾病的根底病變和共同歸路是血管老化，也是多種血管病變在血管病變在“入絡(luò)階段異病同治的病理根底入絡(luò)階段異病同治的病理根底u益氣活血藥人參、三七是常見的具有抗衰老作用的天然藥益氣活血藥人參、三七是常見的具有抗衰老作用的天然藥物，均富含三萜類達瑪烷型皂甙，國內(nèi)外藥理研討已證明物，均富含三萜類達瑪烷型皂甙，國內(nèi)外藥理研討已證明此類有效成分有抗衰老作用，可到達益氣活血，祛瘀生新，此類有效成分有抗

8、衰老作用，可到達益氣活血，祛瘀生新，通脈活絡(luò)的作用通脈活絡(luò)的作用研討目的研討目的u以自然衰老小鼠為模型，察看衰老小鼠血管老化所導(dǎo)致以自然衰老小鼠為模型，察看衰老小鼠血管老化所導(dǎo)致血管壁構(gòu)造和功能的改動，闡明血管衰老的能夠機制血管壁構(gòu)造和功能的改動，闡明血管衰老的能夠機制u經(jīng)過復(fù)制內(nèi)皮細胞經(jīng)過復(fù)制內(nèi)皮細胞( EC) 模型，提示血管細胞衰老機制模型，提示血管細胞衰老機制u察看益氣活血中藥能否經(jīng)過產(chǎn)生察看益氣活血中藥能否經(jīng)過產(chǎn)生ROS的的NADPH氧化酶氧化酶亞單位亞單位p47phox的途徑延緩血管老化的途徑延緩血管老化u提示益氣活血中藥人參三七川芎提取物延緩血管老化的提示益氣活血中藥人參三七川芎提

9、取物延緩血管老化的作用和機制作用和機制研討方法研討方法 模型：安康雄性自然衰老小鼠，模型：安康雄性自然衰老小鼠，14月齡，月齡，70只只 復(fù)制衰老血管內(nèi)皮細胞復(fù)制衰老血管內(nèi)皮細胞EC模型模型 分組：衰老模型組、人參三七川芎高、中、低劑量組、分組：衰老模型組、人參三七川芎高、中、低劑量組、 維生素維生素E組組VitE組、另設(shè)青年對照組組、另設(shè)青年對照組 給藥：按照小鼠和人體重劑量折算系數(shù)關(guān)系，中藥大、給藥：按照小鼠和人體重劑量折算系數(shù)關(guān)系，中藥大、 中、小劑量相當(dāng)于臨床用量的中、小劑量相當(dāng)于臨床用量的2倍、倍、1.5倍、倍、1倍，倍， 維生素維生素E50.0 mg/kgd，給藥，給藥3個月個月實

10、驗藥物中藥制備：人參、三七、川芎 按比例參與3倍70乙醇提取3次，將醇提取液進展乙醇回收，濃縮至無醇味，制成中藥浸膏，含3.164 g生藥/g浸膏對照藥： 維生素E 購自Sigma公司研討內(nèi)容構(gòu)建自然衰老小鼠模型構(gòu)建自然衰老小鼠模型察看行為學(xué)改動察看行為學(xué)改動胸自動脈胸自動脈Messon染色及羥染色及羥脯氨酸含量測定脯氨酸含量測定檢測血漿檢測血漿Ang含量含量血管組織抗超氧陰離子血管組織抗超氧陰離子糖基化終末產(chǎn)物糖基化終末產(chǎn)物AGEsMMP-2/ TIMP-2比值比值人參、三七人參、三七川芎川芎 干涉干涉復(fù)制衰老復(fù)制衰老VEC模型模型細胞形狀學(xué)察看細胞形狀學(xué)察看衰老標志物衰老標志物-gal檢測

11、；檢測；激光共聚焦察看激光共聚焦察看 ROS；MMP-9、AGEs含量和含量和TGF-1的表達的表達流式檢測線粒體膜電位流式檢測線粒體膜電位細胞周期細胞周期察看目的察看目的益氣活血藥延緩血管老化的實驗研討益氣活血藥延緩血管老化的實驗研討 EC部分部分 4代代 5代代 7代代 8代代 10代代 11代代 各代內(nèi)皮細胞生長情況的比較各代內(nèi)皮細胞生長情況的比較 益氣活血藥延緩血管老化益氣活血藥延緩血管老化-EC形狀學(xué)察看形狀學(xué)察看 中藥高劑量組中藥高劑量組 中藥低劑量組中藥低劑量組 光鏡光鏡 100 8代對照組代對照組 VitE組組 第第8代自然衰老細胞，中藥高劑量和代自然衰老細胞，中藥高劑量和Vi

12、tE 組細胞較衰老模型組光鏡下察看，組細胞較衰老模型組光鏡下察看，內(nèi)皮細胞生長形狀好，數(shù)量較多，增殖較旺盛內(nèi)皮細胞生長形狀好，數(shù)量較多，增殖較旺盛益氣活血藥延緩血管老化益氣活血藥延緩血管老化-內(nèi)皮細胞內(nèi)皮細胞B-gal染色染色 中藥高劑量組中藥高劑量組 中藥低劑量組中藥低劑量組 光鏡光鏡x400 8代對照組代對照組 VitE組組 8代模型衰老組表達代模型衰老組表達B-gal藍染細胞較多，約藍染細胞較多，約78%左右；左右；VitE組陽性細胞數(shù)約組陽性細胞數(shù)約25%左右；中藥高劑量組約左右；中藥高劑量組約42%左右，低劑量組約左右，低劑量組約38%左右左右細細 胞胞 周周 期期 8代衰老組代衰老

13、組 VitE組組 中藥高劑量組中藥高劑量組 中藥低劑量組中藥低劑量組 細細 胞胞 周周 期期 與與VitEVitE組比較組比較, 8, 8代衰老模型組細胞周期向代衰老模型組細胞周期向G0-G0-G1G1期明顯停頓，期明顯停頓，G2-MG2-M期細胞明顯減少；與衰老模期細胞明顯減少；與衰老模型組比較，中藥高、低劑量組及型組比較，中藥高、低劑量組及Vit EVit E組組G0- G1G0- G1期期細胞明顯減少，處于細胞明顯減少，處于G2-MG2-M期的細胞明顯增多，差期的細胞明顯增多，差別有統(tǒng)計學(xué)意義；闡明中藥在一定程度上可以延別有統(tǒng)計學(xué)意義；闡明中藥在一定程度上可以延緩細胞衰老，促進細胞增殖緩

14、細胞衰老，促進細胞增殖益氣活血藥延緩血管老化益氣活血藥延緩血管老化-細胞內(nèi)細胞內(nèi)ROS含量激光共含量激光共聚焦聚焦8代模型組代模型組 VitE組組 中藥高劑量組中藥高劑量組 中藥低劑量組中藥低劑量組 激光共聚焦激光共聚焦x100中藥高、低中藥高、低劑量和劑量和VitE組熒光強度組熒光強度較模型組明較模型組明顯減弱；提顯減弱；提示中藥可經(jīng)示中藥可經(jīng)過減少細胞過減少細胞內(nèi)活性氧產(chǎn)內(nèi)活性氧產(chǎn)生，延緩細生，延緩細胞衰老胞衰老細胞培育液抗超氧陰離子與細胞培育液抗超氧陰離子與NO含量含量 8 8代衰老模型組抗超氧陰離子和代衰老模型組抗超氧陰離子和NONO含量明顯減少含量明顯減少P0.05P0.05；中藥高

15、、；中藥高、低劑量組抗超氧陰離子和低劑量組抗超氧陰離子和NONO含量比衰老組明顯添加，但較含量比衰老組明顯添加，但較VitEVitE組含量降低，組含量降低，差別有統(tǒng)計學(xué)意義。提示差別有統(tǒng)計學(xué)意義。提示8 8代衰老代衰老ECEC抗氧化才干下降，而中藥能在一定程度上抗氧化才干下降，而中藥能在一定程度上改善內(nèi)皮的功能，加強抗氧化才干，從而延緩細胞衰老改善內(nèi)皮的功能，加強抗氧化才干，從而延緩細胞衰老細胞細胞p47phoxp47phox、AT1RAT1R、AT2RAT2R蛋白表達蛋白表達 與VitE組比較，8代衰老組p47phox，AT1R，AT2R表達明顯上調(diào)；與8代衰老組比較，中藥兩組與Vit E組

16、p47phox表達明顯下調(diào)，AT1R，AT2R表達明顯下調(diào)；與Vit E組比較，中藥兩組p47phox，AT2R表達上調(diào)，AT1R表達僅有上調(diào)趨勢，無明顯差別益氣活血藥延緩血管老化的整體研討益氣活血藥延緩血管老化的整體研討1 普通情況普通情況 各組小鼠生活情況良好，體質(zhì)量正常。青年組小各組小鼠生活情況良好，體質(zhì)量正常。青年組小鼠體毛白且光澤，行動活潑，反響靈敏；其他各鼠體毛白且光澤，行動活潑，反響靈敏；其他各組小鼠體毛較青年組顏色稍暗，動作稍緩慢；組小鼠體毛較青年組顏色稍暗，動作稍緩慢；14月齡模型組小鼠，體毛蓬松，沒有光澤，運月齡模型組小鼠，體毛蓬松，沒有光澤，運動減少，動作相對較緩慢動減少

17、，動作相對較緩慢益氣活血藥延緩血管老化的整體研討益氣活血藥延緩血管老化的整體研討2 中藥中劑量組 中藥低劑量組 維生素E組 HE x100 青年對照組青年對照組 衰老模型組衰老模型組 中藥高劑量組中藥高劑量組各組小鼠自動脈形狀學(xué)比較各組小鼠自動脈形狀學(xué)比較 衰老模型組小鼠血管壁出現(xiàn)典型的衰老表現(xiàn)，給予中藥后的小鼠血管衰老模型組小鼠血管壁出現(xiàn)典型的衰老表現(xiàn)，給予中藥后的小鼠血管內(nèi)膜中膜增厚不明顯，內(nèi)皮細胞零落減少，僅有部分平滑肌細胞向內(nèi)膜遷內(nèi)膜中膜增厚不明顯，內(nèi)皮細胞零落減少，僅有部分平滑肌細胞向內(nèi)膜遷移，衰老改動不顯著移，衰老改動不顯著益氣活血藥延緩血管老化的整體研討益氣活血藥延緩血管老化的整

18、體研討3 各組小鼠自動脈各組小鼠自動脈Masson染色結(jié)果比較染色結(jié)果比較衰老模型組小鼠血管壁平滑肌和膠原含量明顯增多，給予中藥后膠原增生衰老模型組小鼠血管壁平滑肌和膠原含量明顯增多，給予中藥后膠原增生明顯減少，高劑量組可使平滑肌細胞增生明顯減少，衰老小鼠血管老化相明顯減少，高劑量組可使平滑肌細胞增生明顯減少，衰老小鼠血管老化相對減緩對減緩 青年對照組青年對照組 衰老模型組衰老模型組 中藥高劑量組中藥高劑量組 中藥中劑量組中藥中劑量組 中藥低劑量組中藥低劑量組 維生素維生素E組組 Masson染色染色x100 自動脈自動脈Masson 染色及染色及SMC、CF相對含量相對含量(面積面積)比較比

19、較 組別組別nSMC（平滑?。ㄆ交。〤F（膠原纖維膠原纖維 ）對照對照1424.30.2821.60.40模型模型1431.90.86*29.90.80*中藥高劑量中藥高劑量1429.71.4824.60.38中藥中藥中劑量中劑量1430.51.4625.60.47中藥中藥低劑量低劑量1430.72.4226.10.53維生素維生素E1428.81.1424.50.43益氣活血藥延緩血管老化的整體研討益氣活血藥延緩血管老化的整體研討4 4注：與對照組比較，*P0.05；與模型組比較，P0.05，下表同衰老模型組小鼠血管壁平滑肌和膠原含量明顯增多，給予中藥后膠原增生明顯減少，高劑量組可使平滑

20、肌細胞增生明顯減少，衰老小鼠血管老化相對減緩益氣活血藥延緩血管老化的整體研討益氣活血藥延緩血管老化的整體研討5組別組別n n血漿血漿AngAng含量含量(ng/L)(ng/L)血管組織抗超氧陰離子血管組織抗超氧陰離子(U/L)(U/L)對照對照1414236.45236.4531.1231.1297.0697.063.813.81模型模型1414166.58166.5828.9428.94* *59.3459.344.564.56* *中藥高劑量中藥高劑量1414207.98207.9844.0544.0580.6180.612.902.90中藥中劑量中藥中劑量1414176.40176.40

21、45.4945.4969.1669.163.413.41中藥低劑量中藥低劑量1414168.61168.6144.4444.4465.8965.894.034.03維生素維生素E E1414186.84186.8452.7652.7681.5281.524.314.31各組血管組織抗超氧陰離子、血漿各組血管組織抗超氧陰離子、血漿Ang含量比較含量比較注：與對照組比較，*P0.05；與模型組比較，P0.05，下表同中藥灌胃后，小鼠血管組織中的抗活性氧生成才干比衰老模型組有一定程度的加強，闡明中藥灌胃后，小鼠血管組織中的抗活性氧生成才干比衰老模型組有一定程度的加強，闡明益氣活血藥能夠經(jīng)過減少活性氧

22、的生成來延緩血管老化。衰老模型組益氣活血藥能夠經(jīng)過減少活性氧的生成來延緩血管老化。衰老模型組Ang含量最低，對照含量最低，對照組最高，闡明血漿中組最高，闡明血漿中Ang含量與血管老化的關(guān)系不親密，應(yīng)進一步檢測血管組織中含量與血管老化的關(guān)系不親密，應(yīng)進一步檢測血管組織中Ang含量，確定與血管老化的關(guān)系含量，確定與血管老化的關(guān)系各組血管組織中各組血管組織中AGEs含量及含量及MMP-2/TIMP-2比值比較比值比較組別組別n nAGEs(ng/mL)AGEs(ng/mL)MMPMMP2 (ng/mL)2 (ng/mL)TIMP-2 (ng/mL)TIMP-2 (ng/mL)MMP-2/TIMP-2

23、MMP-2/TIMP-2對照對照141459.5559.551.851.85180.93180.9310.4610.460.640.640.0830.083286.50286.5028.2428.24模型模型1414215.89215.891.171.17* *246.48246.485.355.35* *0.310.310.0070.007* *794.53794.5325.1225.12* *中藥高劑量中藥高劑量1414142.57142.571.281.28205.51205.5110.3610.360.500.500.0320.032413.14413.1430.2130.21中藥中藥

24、中劑量中劑量1414152.14152.141.521.52222.30222.306.936.930.390.390.0080.008565.28565.2820.4120.41中藥中藥低劑量低劑量1414170.54170.541.661.66224.79224.799.549.540.360.360.0070.007628.58628.5828.1728.17維生素維生素E E組組1414141.29141.291.591.59205.19205.194.144.140.510.510.0060.006401.95401.959.589.58注：與對照組比較，*P0.05；與模型組比較，

25、P0.05青年小鼠AGEs含量較少，而老年小鼠AGEs含量較多，給予中藥灌胃后，老年鼠血管中AGEs含量有不同程度的降低，闡明益氣活血藥在一定程度上降低動脈生硬度，從而延緩血管的老化。而衰老模型組MMP-2 、MMP-2/ TIMP-2最高，TIMP-2含量最低，闡明衰老小鼠已出現(xiàn)年齡相關(guān)的血管重構(gòu)，中藥各組小鼠MMP-2 、MMP-2/ TIMP-2明顯降低，闡明中藥能夠經(jīng)過抑制MMP-2生成、加強TIMP-2的活性，減少血管壁EMC降解，從而延緩血管老化益氣活血藥延緩血管老化的整體研討益氣活血藥延緩血管老化的整體研討6 研討結(jié)果及進展研討結(jié)果及進展 人參三七川芎可以改善衰老小鼠自動脈形狀學(xué)衰老變化，人參三七川芎可以改善衰老小鼠自動脈形狀學(xué)衰老變化，降低血管組織中活性氧的生成，減少降低血管組織中活性氧的生成，減少AGEs生成，抑制生成，抑制MMP-2的活性，調(diào)理的活性，調(diào)理MMP-2/TIMP