二葉綠體的分離與觀察

1、 實驗二實驗二 葉綠體的分離與觀察葉綠體的分離與觀察一、一、 實驗?zāi)康呐c原理實驗?zāi)康呐c原理 原理：原理：采用差速離心分離細(xì)胞器采用差速離心分離細(xì)胞器 組織勻漿后懸浮在等滲介質(zhì)中進(jìn)行差速離心，是分離細(xì)胞器的常用方法。一組織勻漿后懸浮在等滲介質(zhì)中進(jìn)行差速離心，是分離細(xì)胞器的常用方法。一個顆粒在離心場中的沉降速率取決于顆粒的大小、形狀和密度，也同離心力以及個顆粒在離心場中的沉降速率取決于顆粒的大小、形狀和密度，也同離心力以及懸浮介質(zhì)的粘度有關(guān)。在一給定的離心場中，同一時間內(nèi)，密度和大小不同的顆懸浮介質(zhì)的粘度有關(guān)。在一給定的離心場中，同一時間內(nèi)，密度和大小不同的顆粒其沉降速率不同。依次增加離心力和離心

2、時間，就能使非均一懸浮液中的顆粒粒其沉降速率不同。依次增加離心力和離心時間，就能使非均一懸浮液中的顆粒按其大小、密度先后分批沉降在離心管底部，分批收集即可獲得各種亞細(xì)胞組分。按其大小、密度先后分批沉降在離心管底部，分批收集即可獲得各種亞細(xì)胞組分。 沉降順序：核沉降順序：核線粒體線粒體溶酶體與過氧化物酶體溶酶體與過氧化物酶體內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與高爾基內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與高爾基體體核蛋白體核蛋白體葉綠體具有熒光現(xiàn)象，可利用熒光顯微鏡觀察。葉綠體具有熒光現(xiàn)象，可利用熒光顯微鏡觀察。菠菜葉富含葉綠體，可采用徒手切片觀察其形態(tài)和分布；菠菜葉富含葉綠體，可采用徒手切片觀察其形態(tài)和分布； 目的目的：1、通過植物細(xì)胞葉綠體的分離，了

3、解細(xì)胞器分離的一般原理與方法；通過植物細(xì)胞葉綠體的分離，了解細(xì)胞器分離的一般原理與方法； 了解了解差速離心差速離心 （differential centrifugation）特點與用途）特點與用途. 2、了解菠菜葉綠體的形態(tài)、分布與數(shù)量了解菠菜葉綠體的形態(tài)、分布與數(shù)量。low speedhigh speeddifferential centrifugation二、實驗用品二、實驗用品1.材料：新鮮菠菜材料：新鮮菠菜2.器材：離心機(jī)，研缽，漏斗，試管架，紗布，器材：離心機(jī)，研缽，漏斗，試管架，紗布，顯微鏡、載顯微鏡、載玻片、蓋玻片、鑷子、玻片、蓋玻片、鑷子、50ml50ml燒杯燒杯2個、個、10

4、ml刻度離心管刻度離心管20支支3.3.試劑試劑: : 0.35m 0.35m 氯化鈉溶液氯化鈉溶液三、實驗步驟三、實驗步驟（一）葉綠體的分離與觀察（一）葉綠體的分離與觀察 1.取新嫩菠菜葉，洗凈檫干、去梗，稱20g，分批放入研缽。 2.加入0.35mol/l氯化鈉溶液， 共20ml，研磨，制成勻漿； 3.將勻漿用層紗布過濾于燒杯中； 4.取過濾液ml，放入5ml離心管中，1000r/min離心min； 5.取上清液轉(zhuǎn)入另一5ml離心管中，3000r/min離心min； 6.去上清，沉淀即為葉綠體（混有部分細(xì)胞核），加入0.35mol/l nacl 溶液100ul懸浮沉淀； 7.取含有葉綠體懸液滴于載玻片上，加蓋片，普通光鏡下觀察。 熒光顯微鏡下演示（二）菠菜葉徒手切片觀察（二）菠菜葉徒手切片觀察 用刀片將新鮮的嫩菠菜葉切削出一斜面（片）置于載玻片上，加入0.35mol/l氯化鈉溶液滴，加蓋片輕壓，光鏡下觀察葉綠體在表皮細(xì)胞和保衛(wèi)細(xì)胞中的分布。四、實驗結(jié)果四、實驗結(jié)果 普通光鏡下，可看到葉綠體為綠色橄欖形，在高倍普通光鏡下，可看到葉綠體為綠色橄欖形，在高倍鏡下可看到葉綠體內(nèi)部含有較深的綠色小顆粒，即基粒。鏡下可看到葉綠體內(nèi)部含有較深的綠色小顆粒，即基粒。五、實驗報告五、實驗報告