T-SPOT的臨床意義.doc

T-spot的臨床意義結(jié)核病目前仍是全球公共衛(wèi)生的主要問題。干擾素釋放試驗通過結(jié)核分枝桿菌特異性抗原刺激外周血單個核細胞釋放的 干擾素，明確有無結(jié)核分枝桿菌感染，不會與卡介苗接種和其他環(huán)境分枝桿菌感染產(chǎn)生交叉反應(yīng)，特異度優(yōu)于結(jié)核菌素皮試。目前有兩種商業(yè)化的試劑盒用于體外檢測 干擾素，一種是基于酶聯(lián)免疫吸附試驗法，檢測全血干擾素濃度；另一種是基于酶聯(lián)免疫斑點方法檢測結(jié)核分枝桿菌特異性效應(yīng)栽細胞斑點數(shù)，如結(jié)核感染栽細胞斑點實驗（T-SPOT ），其敏感度優(yōu)于ILISA方法。病原學(xué)檢查是目前結(jié)核病診斷的金標準，但兒童痰標本不易獲得，且常合并肺外結(jié)核，因此兒童痰細菌學(xué)檢查陽性的肺結(jié)核患病率僅為12310萬。目前PPD試驗作為潛伏結(jié)核感染診斷的主要工具，在成人結(jié)核病患者的檢出率僅為039。BCG接種后PPD常呈陽性反應(yīng)，目前尚無可靠標準區(qū)別出自然結(jié)核桿菌感染與卡介苗接種后的結(jié)素反應(yīng)；同時機體對PPD的反應(yīng)程度受機體免疫系統(tǒng)狀態(tài)的影響。以結(jié)核分枝桿菌特異性抗原ESAT-6和CFP一10抗原為基礎(chǔ)的ELlSPOT試驗方法敏感性高、特異性強。國外的大量研究數(shù)據(jù)表明，ELISPOT試驗檢測結(jié)核感染的特異性達95以上，敏感性達7597，尤其適用于免疫抑制人群、潛伏結(jié)核感染者的診斷。北京兒童醫(yī)院孫琳、趙順英報道：活動性結(jié)核病組中，21例患兒存在活動性結(jié)核病癥狀，其PPD試驗陽性，隨后行ELISPOT試驗陽性19例，臨床可以確診結(jié)核??；另6例患兒PPD試驗陰性，而ELISPOT試驗陽性5例，其中4例患兒臨床診斷血行播散性重癥結(jié)核病，CD4水平低于正常，推測4例患兒PPD試驗陰性可能由于機體免疫功能低下，機體遲發(fā)型免疫應(yīng)答減弱所致；這一實驗結(jié)果也進一步驗證了ELISPOT方法受機體免疫功能狀態(tài)影響小，尤其是年幼兒在免疫功能低下或重癥患兒使用免疫抑制劑時仍具有較理想的敏感性。該結(jié)果為臨床診斷提供了有力證據(jù)，尤其是可以為免疫力降低的PPD陰性結(jié)核病重癥患者的臨床診斷提供診斷依據(jù)。國外研究指出，ELISPOT試驗受機體免疫狀態(tài)影響較小，只有當外周血CIM數(shù)小于100細胞L時，其敏感性才會降低。但同時，在我們研究結(jié)果中也發(fā)現(xiàn)，在27例活動性結(jié)核病患兒中有3例為ELISPOT試驗陰性，考慮為ELISPOT假陰性結(jié)果(取血量少造成細胞數(shù)量少、實驗操作誤差等)，此時應(yīng)該結(jié)合臨床資料綜合分析做出臨床診斷。需要指出的是，病原學(xué)檢測均陰性的27例活動性結(jié)核病患者中889ELISPOT陽性，提示該實驗對于肺外結(jié)核或者難以獲取痰標本的兒童結(jié)核病患者具有較高的診斷價值，但仍需要進一步擴大樣本量進行驗證。非結(jié)核性肺疾病組中，8例患兒PPD陽性臨床考慮結(jié)核感染，進一步應(yīng)用ELISPOT方法檢測后，僅有1例患兒為陽性，ELISPOT陰性的7例患兒均有卡介苗接種史，且為中等強度反應(yīng)。因此7例PPD陽性患兒臨床應(yīng)首先考慮為卡介苗接種后的交叉反應(yīng)，并定期隨訪排除潛伏結(jié)核感染。1例ELISPOT陽性患兒應(yīng)結(jié)合臨床考慮結(jié)核感染的診斷。該試驗結(jié)果與國外研究結(jié)果一致，證明了ELISPOT試驗具有較高的特異性，是當前健康人群篩查潛伏結(jié)核的較有潛力的新方法。但由于ELISPOT試驗存在操作技術(shù)要求高，費用昂貴等缺點，限制了其在經(jīng)濟發(fā)展水平低的發(fā)展中國家的應(yīng)用。本研究認為，當l臨床醫(yī)師不能準確判斷結(jié)核分枝桿菌自然感染和卡介苗接種的PPD陽性結(jié)果時，或當患兒PPD試驗陰性，臨床結(jié)合病史、影像學(xué)檢查等綜合分析不能除外結(jié)核病存在時，ELISPOT試驗可以作為一個重要的輔助診斷工具。因此，在臨床實際應(yīng)用中將ELISPOT和PPD相結(jié)合應(yīng)是我國目前較為合理、經(jīng)濟的診斷流程。其他情況也可以引起T-SPOT陽性：（1）自身免疫疾病引起的機體免疫紊亂，導(dǎo)致T 淋巴細胞中非特異性IFN- 釋放增多；（2）重癥膿毒癥患者機體T 淋巴細胞處于高度活化狀態(tài)，導(dǎo)致T 淋巴細胞中非特異性IFN-釋放增多；（3）胞內(nèi)病毒或胞內(nèi)細菌嚴重感染時，T 淋巴細胞處于活化狀態(tài)，也會導(dǎo)致T 淋巴細胞中的非特異性INF- 釋放增多?？赡苡绊慣-SPOT 檢測的各項影響因素發(fā)現(xiàn)T-SPOT 結(jié)果與性別、年齡、卡介苗接種史、結(jié)核病接觸史、機體免疫狀態(tài)和感染部位均無關(guān)，與孫琳等的報道符合，說明T-SPOT 在兒童結(jié)核