實(shí)驗(yàn)試卷07-08(上)A(參考答案).doc

課程名稱： 生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn) 考試時(shí)間： 120分鐘 生物信息 專業(yè) 年級(jí) 班 學(xué)號(hào) 姓名 題號(hào)一二三四五六七八九十總得分得分評(píng)卷人簽字復(fù)核人簽字得分一、填空題（每空1分，共25）1、移液管使用中，調(diào)整液面時(shí)， 視線 、 液面 、和標(biāo)線均應(yīng)在同一水平面上。2、凝膠電泳根據(jù)支持物不同主要有 聚丙烯酰胺凝膠電泳 和 瓊脂糖凝膠電泳 。3、SDS-PAGE中樣品緩沖液包括 溴酚蘭 ， SDS ，甘油， 巰基乙醇 ，Tris-HCl緩沖液這些成分。4、SDS-PAGE實(shí)驗(yàn)中的5電極緩沖液中5表示 5倍濃度 。5、用苯酚提取酵母細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)中， RNA 溶于上層水溶液中， DNA 和蛋白質(zhì)在酚層。6、含有核糖的RNA與濃鹽酸及3，5二羥甲苯在沸水浴中加熱后，會(huì)產(chǎn)生 綠 色復(fù)合物。含有脫氧核糖的DNA在酸性條件下，和 二苯胺 作用產(chǎn)生和 藍(lán) 色物質(zhì)。6、DNA電泳檢測(cè)時(shí)，上樣緩沖液中蔗糖的作用是 沉淀DNA ； 溴酚藍(lán)的作用是 指示劑 。7、在堿性裂解法提取質(zhì)粒中，溶液溶液III的主要成分有 醋酸鉀 、 醋酸 。8、PCR加樣中使用的dNTP是 ATP 、 CTP 、 GTP 和 TTP 的混合物。9、在分離DNA時(shí)要使用金屬離子螯合劑，如EDTA和檸檬酸鈉等，其目的是_螯合鎂離子從而抑制DNA酶的作用_10、DNA分離過(guò)程中造成DNA分子斷裂的因素很多，主要有 核酸酶降解 、 化學(xué)降解 、 物理剪切 。得分二、名詞解釋（每小題2分，共10分1、離心：將懸浮于溶劑中的樣品裝入離心管中，施加一定的離心力，樣品中各溶質(zhì)顆粒由于大小、形狀和密度的差異而彼此分離。2、核酸變性：指雙螺旋區(qū)氫鍵斷裂，空間結(jié)構(gòu)破壞，形成單鏈無(wú)規(guī)則線團(tuán)的過(guò)程。3、模板DNA：DNA復(fù)制過(guò)程中起模板作用的親代DNA4、DNA 聚合酶：合成子代DNA 鏈(在DNA 模板的指導(dǎo)下)的酶?？赡茉谛迯?fù)或復(fù)制中涉及。5、退火：變性核酸的互補(bǔ)鏈在適當(dāng)條件下重新形成雙螺旋的過(guò)程得分三、單項(xiàng)選擇題（每空1分，共15分）1、用紫外吸收法測(cè)定核酸的含量的原理是核酸、核苷酸及其衍生物能吸收紫外光。RNA和DNA的紫外吸收高峰在（ E ）納米波長(zhǎng)處?？梢杂茫?F ）/（ G ）的比值來(lái)判斷核酸的純度，純凈的RNA溶液，該值（ A ）；純凈的DNA溶液，該值（ B ）。A、2 B、1.8 C、RNA D、DNA E、260 F、A260 G、A280 2、某一蛋白質(zhì)在pH為5.0時(shí)，在電場(chǎng)中向陽(yáng)極移動(dòng)，其pI（ C ）A、等于5.0 B、大于5.0 C、小于5.0 D、無(wú)法確定3、植物總DNA提取中，能夠作為細(xì)胞破壁的試劑是？（ B ） A、SDS B、CTAB C、乙二醇 D、NaOH4、在提取核酸的過(guò)程添加氯仿的目的是？（ C ） A、使細(xì)胞破裂 B、使核酸變性 C、去除雜質(zhì)蛋白 D、沉淀核酸5、在堿性裂解法提取質(zhì)粒中，由于溶液I中含有以下哪種物質(zhì)，因此高壓滅菌需要注意？（ C ） A、酪蛋白 B、酵母粉 C、蔗糖 D、葡萄糖6、不連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠電泳比一般電泳的分辨率高，是因?yàn)榫哂邢铝心姆N效應(yīng)？（ A ）A、濃縮效應(yīng) B、電荷效應(yīng) C、 分子篩效應(yīng) D、 黏度效應(yīng)7、從細(xì)胞或組織中分離DNA時(shí)，常用蔗糖溶液，目的是（B）A、抑制核酸酶的活性 B、保護(hù)DNA，防止斷裂 C、加速蛋白質(zhì)變性 D、有利于細(xì)胞破碎8、變色的酚中含有氧化物，這種酚不能用于DNA分離，原因主要是（A）A、氧化物可使DNA的磷酸二酯鍵斷裂B、氧化物同DNA形成復(fù)合物 C、氧化物會(huì)改變pH值 D、氧化物在DNA分離后不易除去9、在分離DNA時(shí)，異戊醇的作用是（D）A、使蛋白質(zhì)脫水B、使DNA脫水C、幫助DNA進(jìn)入水相D、減少氣泡，促進(jìn)分相10、以下那個(gè)不是影響有機(jī)溶劑沉淀的因素 （ D ）A、溫度 B、樣品濃度 C、pH值 D、氣泡11、離心時(shí)常用相對(duì)離心力表示，相對(duì)離心力指的是 （ B ）A、rpm B、g C、RCF D、rpm/min得分四、判斷題（每小題1分，共10分）1、離心時(shí)，在轉(zhuǎn)速一定的條件下，顆粒距離心軸越遠(yuǎn)，其所受的離心力越大。 （ ）2、移液器使用完畢要將量程調(diào)至最小，以保證彈簧的使用壽命。 （ ） 3、有機(jī)溶劑沉淀中的操作溫度應(yīng)在37下進(jìn)行。 （ ）4、SDS-PAGE的凝膠脫色是以能夠看見(jiàn)譜帶即為脫色完全。 （ ）5、植物總DNA提取時(shí)選擇的植物材料來(lái)源不影響提取的效果。 （ ）6、由于核酸在pH8.0的條件下帶負(fù)電，因此瓊脂糖電泳上樣的位置在負(fù)極。 （ ）7、電泳檢測(cè)經(jīng)過(guò)處理的質(zhì)粒時(shí)，如果有4條條帶，說(shuō)明有4種不同的質(zhì)粒。 （ ）8、提取植物總DNA中，離心操作沒(méi)有在低溫環(huán)境進(jìn)行會(huì)影響實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。 （ ）9、所有大腸桿菌菌株都可以在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。 （ ）10、在堿性裂解法提取質(zhì)粒中，NaOH的作用是細(xì)胞破壁。 （ ）得分三、簡(jiǎn)答題（每小題5分，共40分）1、鹽析與鹽溶分別是什么？其原理是什么？答：在低鹽濃度的情況下，蛋白質(zhì)的溶解度隨鹽濃度的升高而增加，該現(xiàn)象稱為鹽溶（2分）。 而在鹽濃度升高到一定濃度后，蛋白質(zhì)的溶解度又升高而降低（1分）。機(jī)理：破壞蛋白質(zhì)的水化膜，中和表面的凈電荷（2分）。2、為什么SDS-凝膠電泳會(huì)不受蛋白質(zhì)分子所帶電荷及分子形狀的影響？答：SDS是一種陰離子型去污劑，在蛋白質(zhì)溶解液中加入SDS和巰基乙醇后，巰基乙醇可使蛋白質(zhì)分子中的二硫鍵還原（2分）。SDS能使蛋白質(zhì)的非共價(jià)鍵（氫鍵、疏水鍵）打開(kāi)，并結(jié)合帶蛋白質(zhì)分子上（在一定條件下，大多數(shù)蛋白質(zhì)SDS的結(jié)合比為1.4g SDS/g蛋白質(zhì)），形成蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物。由于SDS帶有大量負(fù)電荷，當(dāng)它與蛋白質(zhì)結(jié)合時(shí)，所帶的負(fù)電荷的量大大超過(guò)了蛋白質(zhì)分子原有的電荷量，因而掩蓋了不同種類蛋白質(zhì)間原有的電荷差異（1.5分）。SDS與蛋白質(zhì)結(jié)合后，還引起了蛋白質(zhì)構(gòu)象的改變。蛋白質(zhì)SDS復(fù)合物的流體力學(xué)和光學(xué)性質(zhì)表明，它們?cè)谒芤褐械男螤?，近似于雪茄煙形的長(zhǎng)橢圓棒。不同蛋白質(zhì)的SDS復(fù)合物的短軸長(zhǎng)度都一樣，而長(zhǎng)軸則隨蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量的大小成正比的變化。這樣的蛋白質(zhì)。SDS復(fù)合物在凝膠中遷移率，不再受蛋白質(zhì)原有電荷和形狀的影響，而只是橢圓棒的長(zhǎng)度，也就是蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量的函數(shù)（1.5分）。3、簡(jiǎn)述PCR反應(yīng)的原理答：PCR技術(shù)的基本原理類似于DNA的天然復(fù)制過(guò)程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物（2分）。PCR由變性退火延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成，復(fù)制鏈重復(fù)循環(huán)變性退火延伸三過(guò)程，就可獲得更多的“半保留復(fù)制鏈”，而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板（2）分）。每完成一個(gè)循環(huán)需要24分鐘，23小時(shí)就能將待擴(kuò)目的基因擴(kuò)增放大幾百萬(wàn)倍（1分）。4、SDS是分離DNA時(shí)常用的一種陰離子除垢劑，它在這里的主要作用是什么？答：（1）溶解膜蛋白及脂肪，從而使細(xì)胞膜破裂（1.5分）；（2）溶解核膜和核小體，使其解聚，將核酸釋放出來(lái)（1分）；（3）對(duì)RNase、DNase有一定的抑制作用；（1分）（4）SDS能夠與蛋白質(zhì)結(jié)合形成R-O-SO3-R-蛋白復(fù)合物，使蛋白質(zhì)變性沉淀（1.5分）。5、設(shè)計(jì)一個(gè)20L的PCR反應(yīng)加樣體系。答：PCRbuffer(Mg2+) 2.0ul, dNTPs 0.5 ul, 上游引物1.0 ul，下游引物1.0ulTaq酶0.2ul, 模板DNA1.0 ul，ddH2O 14.3ul.6、簡(jiǎn)述利用堿裂法提取質(zhì)粒的主要原理？答：十二烷基磺酸鈉（SDS）是一種陰離子表面活性劑，它既能使細(xì)菌細(xì)胞裂解，又能使一些蛋白質(zhì)變性。用SDS處理細(xì)菌后，會(huì)導(dǎo)致細(xì)菌細(xì)胞破裂，釋放出質(zhì)粒DNA和染色體DNA，兩種DNA在強(qiáng)堿環(huán)境都會(huì)變性（2分）。由于質(zhì)粒和主染色體的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)不同，變性時(shí)前者雖然兩條鏈分離，卻仍然纏繞在一起不分開(kāi)；但后者完全變性分甚至出現(xiàn)斷裂，因此，當(dāng)加入pH4.8的酸性乙酸鉀降低溶液pH值，使溶液pH值恢復(fù)較低的近中性水平時(shí)， 質(zhì)粒的兩條小分子單鏈可迅速?gòu)?fù)性恢復(fù)雙鏈結(jié)構(gòu)，但是主染色體DNA則難以復(fù)性（2分）。在離心時(shí)，大部分主染色體與細(xì)胞碎片，雜質(zhì)等纏繞一起被沉淀，而可溶性的質(zhì)粒DNA留在上清夜中。再由異丙醇沉淀、乙醇洗滌，可得到純化的質(zhì)粒DNA（1分）。7、請(qǐng)寫(xiě)出5條本實(shí)驗(yàn)課程中的注意事項(xiàng)。普通離心機(jī)的使用注意事項(xiàng)：(1).離心機(jī)要置水平位置,以保證旋轉(zhuǎn)軸垂直地球水平面。(2).使用前應(yīng)檢查套環(huán)是否平衡(臺(tái)稱)。(3).離心杯及其外套(離心管套)是否平衡(臺(tái)稱)。(4).樣品傾入離心杯后應(yīng)與離心管套一起兩兩平衡，平衡后把它們放置于轉(zhuǎn)子的對(duì)稱位置。(5).蓋好蓋子,打開(kāi)電源開(kāi)關(guān),調(diào)整離心時(shí)間。(6).啟動(dòng)離心時(shí)轉(zhuǎn)速應(yīng)由小至大,緩慢升速(一般要23min)。(8).離心完成后要調(diào)整調(diào)速連桿至零位,同時(shí)關(guān)上電源。(9).要等到轉(zhuǎn)速為零時(shí)才能打開(kāi)離心機(jī)蓋,取出樣品?？梢?jiàn)分光光度計(jì)的使用注意事項(xiàng)：（1） 使用過(guò)程中比色皿的四個(gè)面在槽中保持一定的位置,取用比色皿時(shí)手應(yīng)該捏住四個(gè)棱而不能碰到面。比色皿應(yīng)該避免磨損透光面。（2） 使用過(guò)程中不得打開(kāi)蓋子，保持儀器清潔,為避免溶液