無菌工藝和無菌檢驗

無菌工藝和驗證,指導思想：產品質量是檢驗出來的標志：抽樣檢驗理論關注點：樣品檢驗,質量管理基本方法一：,抽樣檢驗的應用 抽樣檢驗：通過樣本，推斷整體。 抽樣檢驗是數理統(tǒng)計的分支，它用盡 量少的樣本盡可能反映全部產品的質量。,抽樣檢驗的應用 抽樣檢驗：通過樣本，推斷整體。 抽樣檢驗是數理統(tǒng)計的分支，它用盡 量少的樣本盡可能反映全部產品的質量。,樣品抽樣檢驗的結果是判別藥品質量的唯一法定依據。樣品按USP(美國藥典)和USP-NF（國家處方集）的要求檢驗合格，即判合格；反之，則判為不合格。,FDA的觀點： 一個科學的、龐大的抽樣計劃，通過擴大抽樣檢查的辦法可以實現保證藥品質量的目標。,FDA面臨新的挑戰(zhàn)- 樣品是否有代表性- 抽樣檢驗不可能發(fā)現藥品生產中的污染/ 混淆- 低劑量高活性藥物的混合是否均勻- 無菌藥物的滅菌是否有效,抽樣檢驗的困境：抽查批號的產品、其相應的原料、半成品及成品均經過抽樣檢驗且檢驗結果符合標準，抽樣和檢驗方法方面毫無問題。但FDA查不到所采用的工藝能始終如一地生產出符合規(guī)定質量標準產品的證據。,FDA官員的感慨： “我們這些藥政管理的官員，經歷了許多年的經驗和教訓之后終于明白，我們在制訂法規(guī)過程中并沒真正研究過工藝過程的本身，我們以往的立足點是在質量檢驗上，而不是在質量保證上”。,FDA的結論： “工藝驗證應當是我們的立足點。 ” 產品質量是生產出來的， 不是靠檢驗來的。,無菌無菌工藝無菌檢驗,無菌工藝和無菌檢驗,沒有活體微生物（細胞繁殖體）的存在。,無菌：,無菌藥品是指法定藥品標準中列有無菌檢查項目的制劑和無 菌原料藥，包括注射劑、眼用制劑、無菌軟膏劑、 無菌混懸液等。例如：大容量注射劑、小容量注射劑、無菌粉針、 無菌凍干粉針、無菌眼藥水、無菌混懸劑、 無菌原料藥等。,無菌藥品：,1、濕熱滅菌法2、干熱滅菌法3、輻射滅菌法4、氣體滅菌法5、過濾滅菌法6、無菌生產工藝,如何達到無菌？中國藥典2010年版 附錄 滅菌法,1.殘存概率法（Bioburden based process） 2.過度殺滅法（Overkill process） 3.生物指示劑/殘存概率相結合的滅菌工藝（Biological indicator/bioburden combined process）,USP 滅菌方式: 32版 1222章,以生物負荷（產品滅菌前微生物污染水平）為基礎的方法，用于生產過程中很少檢出芽孢，產品穩(wěn)定性較差，只能適度滅菌的產品。,殘存概率法Bioburden basedprocess,適用于穩(wěn)定性很好，能經受苛刻滅菌條件的產品。,過度殺滅法Overkill process,過度殺滅法 VS 殘存概率法,滅菌抉擇樹：,能否121、15分鐘濕熱滅菌,能否采用F08的濕熱滅菌，SAL10-6,否,121、15分鐘濕熱滅菌,是,采用F08的濕熱滅菌，SAL10-6,能否對藥液除菌過濾,否,是,無菌原料、無菌配制、無菌灌封,藥液除菌過濾及無菌灌封,否,是,滅菌工藝的選擇：,滅菌工藝與生物負荷的關系：,1、終端滅菌工藝 2、無菌生產工藝,無菌藥品的生產工藝,可以最后用熱力學方法除去微生物的生產工藝。 如：大容量注射劑、水針等產品生產。,終端滅菌生產工藝,嚴格原料微生物標準嚴格控制微生物污染、制定滅菌前生物負荷的限度標準控制藥液存放溫度和時間 藥液取樣、污染菌的鑒別目的：控制生物負荷,終端滅菌生產工藝的質量保證：,空載熱分布滿載熱分布熱穿透試驗微生物挑戰(zhàn)試驗,終端滅菌生產工藝驗證要點：,過濾除菌工藝無菌分裝工藝如：凍干粉針、粉針、無菌原料藥、生物 疫苗、血液制品等產品生產。,無菌生產工藝：,對進入無菌區(qū)的物料充分滅菌，消除污染源。所有接觸經除菌過濾的藥液的設備都經過清潔和滅菌驗證避免人員直接接觸除菌后的藥液、容器防止人員活動干擾層流目的：以防止污染為目的，消除生產工藝中潛 在污染的各種可能性。,無菌生產工藝的質量保證：,終端滅菌工藝 VS 無菌生產工藝,無菌工藝模擬或培養(yǎng)基灌裝驗證,無菌生產工藝工藝驗證要點：,Process Simulation Testing for Aseptically Filled Products無菌灌裝產品的工藝模擬試驗,解讀：PDA Technical Report N0.22,評價無菌工藝操作能力最有效的方法。完全模擬工藝配制和灌裝工藝，用一種可以促進微生物生長的培養(yǎng)基替代無菌產品。確認無菌生產工藝的無菌保證水平（SAL） 的方法。,工藝模擬實驗（培養(yǎng)基灌裝）,證明采用無菌工藝生產無菌產品的能力無菌工藝人員的資質和保證符合現行GMP要求,無菌工藝模擬的目的：,安裝干擾容器尺寸容器的密封灌裝速度灌裝體積灌裝持續(xù)時間生產批量、工藝模擬批量,工藝模擬實驗原理1,手動灌裝培養(yǎng)條件培養(yǎng)基的選擇容器檢查惰性氣體設施考慮人員考慮,工藝模擬實驗原理2,工藝人員設備環(huán)境,培養(yǎng)基灌裝驗證包含：,模擬工藝的定義:使用促微生物生長的培養(yǎng)基，及與無菌物料生產相似的方法評估無菌工藝的方法。包括工藝的所有步驟，從藥物成分、賦形劑（如果有）、容器、密封的滅菌到產品的密封。在無菌灌裝之前無菌藥物容器和密封后放置的最長時間必須包括在模擬范圍內。,工藝,非無菌物料進入無菌區(qū)域的“切入點”。未經滅菌或消毒的物料，滅菌后進入灌裝間的保護手工操作進入灌裝間前的防護。,設備：,生產環(huán)境始終符合無菌產品生產的要求保證系統(tǒng)和設備按照設定的目的正常運轉,無菌保證 環(huán)境監(jiān)測,取樣點的選擇取樣頻率行動限和警戒線方法學和數據解釋GMP附錄1：無菌藥品 第十條（二）： A級區(qū)監(jiān)測的頻率及取樣量，應能及時發(fā)現所有人為干預、 偶發(fā)事件及任何系統(tǒng)的損壞。,環(huán)境監(jiān)測：,最長的無菌生產、操作時間無菌生產中每次發(fā)生的干預事件冷凍干燥設備的無菌組裝人員數目和活動無菌條件的轉移交接班變化、中斷和衣物更換,模擬的無菌工藝應該包含（1）：（FDA的建議）,無菌設備連接和斷開無菌樣品的收集生產線速度和配置重量檢查設備、容器密閉檢查SOP的特殊規(guī)定,模擬的無菌工藝應該包含（2）：（FDA的建議）,滅菌系統(tǒng)潔凈環(huán)境系統(tǒng)公用輔助系統(tǒng)生產控制系統(tǒng)設備清洗,模擬工藝還涉及：,（一）選擇標準： 促生長能力、 低選擇性、澄明度、中 等濃度和過濾性。,培養(yǎng)基：,促生長能力 支持少量微生物的復壯和生長，10-100CFU或更少。低選擇性 1、適應廣譜微生物的生長，細菌、霉菌和酵母菌都可以生長。 2、企業(yè)自己的菌種庫（環(huán)境中分離的微生物）,培養(yǎng)基：,澄明 清澈，如果發(fā)生渾濁，能夠觀察到 中等濃度 遵循供應商的建議。其他濃度或經過驗證過濾性 培養(yǎng)基應當能夠穿過生產過程所使用的同樣級別的過濾器,培養(yǎng)基,（二）培養(yǎng)基靈敏度檢查：1、將無菌培養(yǎng)基分裝到一定數量的無菌試管。2、制備好的菌懸液（枯草桿菌、白色念珠菌） 10-100cfu/mL。3、加入上述菌懸液1mL進準備好的培養(yǎng)基內，每 份培養(yǎng)基至少加2管。4、培養(yǎng)7天。5、每種培養(yǎng)基50%發(fā)生渾濁，長菌。,培養(yǎng)基：,1、培養(yǎng)基儲罐滅菌，移入無菌區(qū)域。2、滅菌后的連接件、閥門、過濾器等和培養(yǎng) 基儲罐無菌連接。3、滅菌后的培養(yǎng)基經過濾器和儲罐無菌連接。4、儲罐另一端和灌裝機相連，連接時無菌的。USP,培養(yǎng)基的制備：,1、培養(yǎng)基的無菌檢驗 滅菌后，灌裝前的培養(yǎng)基取樣，進行無菌檢驗。 確認培養(yǎng)基是無菌的,微生物檢驗：,2、瓶子、瓶蓋和膠塞的無菌檢驗 灌裝前瓶子、瓶蓋和膠塞取樣，進行無菌檢驗。 確認進入灌裝線的瓶子、瓶蓋和膠塞是無菌的。,微生物檢驗：,3、灌裝后培養(yǎng)基的靈敏度檢驗 同培養(yǎng)基的靈敏度檢驗。 確認滅菌后的培養(yǎng)基的靈敏度符合規(guī)定。,微生物檢驗：,4、瓶子培養(yǎng)和破損檢查 灌裝培養(yǎng)基的瓶子編號后，按照預定的培養(yǎng)溫度培養(yǎng)至14天。記錄培養(yǎng)結果。,微生物檢驗：,1、FDA ： 20-35，目標值2.5，不少于14天； 如選擇兩個溫度，則每一溫度下至少培養(yǎng)7 天，從低溫開始。2、PIC ： 20-35下至少14天。 或先20-25下7天， 然后30-35下7天。,培養(yǎng)時間：,發(fā)現微生物生長的瓶子污染百分比 = 100% 灌裝瓶數 破損瓶數,評估結果：,生產部人員 灌裝人員（灌裝、膠塞、清洗瓶等）、清潔人員質量部人員 QA（IPC、監(jiān)測人員）、QC(取樣、檢驗)工程部人員 運行人員、維護人員,人員：,上崗前：至少參加一次無菌工藝模擬的考 核，為其上崗資質的重要內容。年度資質確認：無菌崗位操作員工每年至 少參加一次無菌工藝的模 擬。,人員資質,嚴禁“非無菌”儀器或器材接觸無菌材料。緩慢、有目的的移動。操作中身體始終處于A級層流之外無菌操作保證無菌工作服不受污染,無菌操作人員行為：,接受培訓人員 生產部人員、質量部人員、工程部人員,人員培訓：,首次驗證 至少連續(xù)成功灌裝3個批次。年度驗證 每條生產線每年不得少于2次。 6個月生產期間沒有有目的停止生產的無菌生產區(qū)域生產線退役驗證 生產線退役前必須進行一次無菌工藝模擬。,驗證頻率：,環(huán)境監(jiān)測數據水系統(tǒng)檢驗數據無菌檢驗數據關鍵的工藝變更、空調系統(tǒng)變更以上趨勢的評估，決定了周期性培養(yǎng)基灌裝驗證的次數。,培養(yǎng)基灌裝驗證的次數：,方案、報告和調查,定義被模擬的工藝定義使用的房間定義使用的灌裝線和設備使用的容器和密封類型線速度灌裝單位的數量干擾和中斷的數目和類型一起參加的人數使用的培養(yǎng)基,模擬方案的內容1：,灌裝到容器內的培養(yǎng)基體積培養(yǎng)條件同步的環(huán)境監(jiān)測批記錄的復印件全部測試的可接受標準最終報告的描述選擇“最差條件”的原理陽性數量和編號促生長試驗的要求和結果,模擬方案的內容2：,測試方法應該盡可能的模擬工藝選擇的方法和限度必須理由充分并且文件化試驗方法必須足夠靈敏，限度時可以達到的所有的陽性都應該鑒別全自動生產線發(fā)生的污染率接近于零在舊的設施中生產或是較長的生長處理步驟或是手工操作的情況下，污染率不應該超過1個（3000灌裝單位內）。在少于3000瓶的批量中，工藝模擬數量至少要等于批量，由于小批量的低靈敏度，不允許有陽性出現。大于3000瓶的批量，可以接受的陽性數量計算是應該謹慎。,建立可接受的限度標準：,是一組達到工藝極限值的上限或下限的情況，和那些在SOP范圍內，但與理想情況相比時有最大的可能造成工藝或產品失敗的情況。 最差條件不一定會導致產品或工藝的失敗。,最差條件：,使用的原料、組件和密封在無菌工藝區(qū)域保留時間超出范圍無菌操作人員的數量，超出正常生產所需的人員數量在特殊線上，以最快的速度灌裝最少的數量（操作困難），以最慢的速度灌裝最大的數量（最大的暴露）促生長培養(yǎng)基有抑制性或保護性處方,“最差條件”類型,污染容器應仔細調查其完整性。陽性應該鑒定到種、屬。全面取樣，查找污染源。確定潛在的污染源，污染源是如何進入工藝的?；仡櫳a記錄?；仡欔P鍵系統(tǒng)：HVAC等對所有的程序和工藝變更進行回顧。,失敗調查,失敗原因：可以指定。 污染為一個清晰、單一的來源。 糾正措施： 立刻糾正，而且文件化。,調查結果1：,失敗原因：不可以指定。 含糊的指定，多種系統(tǒng)和工藝的共同作 用。糾正措施： 工藝重新驗證，進行多次工藝模擬實驗來 證明可以持續(xù)生產出可以接受的產品。,調查結果2：,發(fā)生事件的摘要調查所有的系統(tǒng)，不僅僅是發(fā)生失敗的系統(tǒng)導致失敗的原因和支持文件對以前批次的潛在影響糾正活動額外的試驗適當的簽名調查進度報告,失敗調查報告應該包括：,粉劑的選擇： - 可以滅菌 - 可以上灌裝機灌裝 - 在培養(yǎng)基中可溶 - 對微生物無抑制性,粉針劑的灌裝驗證：,把重量確定的性粉劑加入到已灌有滅菌培養(yǎng)基的瓶里，加膠塞，封口。 相對于液體培養(yǎng)基的灌裝驗證，粉針的灌裝增加了一個步驟。,粉針劑的灌裝驗證：,向瓶內加入規(guī)定量的滅菌注射用水，接著進行冷凍、干燥，接下來再灌入一定量的滅菌液體培養(yǎng)基