分析real-time PCR數(shù)據(jù).doc

學(xué)習(xí)資料收集于網(wǎng)絡(luò)，僅供參考用2-Ct法分析real-time PCR數(shù)據(jù)-聯(lián)合應(yīng)用LightCycler Data Analysis軟件和MS ExcelBy netmee，引用請(qǐng)注明作者。1、打開存取的數(shù)據(jù)文件，點(diǎn)擊2、依次點(diǎn)擊，這是適合SYBR green為染料的選項(xiàng)。點(diǎn)擊step1：Baseline下的“change graph settings”小圖標(biāo)。取消彈出的Customize Graph選項(xiàng)卡中的Logarithmis選項(xiàng)，點(diǎn)擊“OK”按鈕，退出選項(xiàng)卡。3、點(diǎn)擊下的“change graph settings”小圖標(biāo)，取消彈出的Customize Graph選項(xiàng)卡中的Logarithmis選項(xiàng)，點(diǎn)擊“OK”按鈕，退出選項(xiàng)卡。4、在選項(xiàng)卡中拖動(dòng)紅色標(biāo)記線，選取個(gè)條曲線都為直線上升部位。5、可以在選項(xiàng)卡中觀察是否需選取的是曲線直線上升部分。觀察綠線部分與S型曲線交叉的部分是否為直線。6、如果確為直線，則左側(cè)的“Crossing Point”值為所需要的Ct值。7、依次選取下圖菜單：將數(shù)據(jù)導(dǎo)出為文本文件。8、打開所保存的文本文件，如圖選取9、將數(shù)據(jù)粘貼入新建的excel文件，“Crossing Point”列即是Ct值，刪除“Standard”和“Calculated Concentration”列。10、將目的基因，本例中為“iNOS”的Ct值按標(biāo)本對(duì)應(yīng)剪切入beta-actin值右側(cè)一列。分別標(biāo)記兩列數(shù)據(jù)為“beta-actin”和“iNOS”。11、設(shè)置所有Ct值的單元格格式12、數(shù)字選項(xiàng)卡，分類選擇為數(shù)值，點(diǎn)擊確定。13、將E列（目的基因Ct值右側(cè)一列）輸入公式“=D4-C4”，求出目的基因與同管beta-actin Ct值之差，即Ct。14、向下拉復(fù)制公式，將Ct列數(shù)值計(jì)算出。15、在Ct 列右側(cè)一列插入公式“=POWER(2,(0-E4)”，此即目的基因相對(duì)beta-actin的相對(duì)表達(dá)量，即2-Ct（2的-Ct次方）。16、在2-Ct列右側(cè)插入公式“=F4/$F$4”，此列即“2-Ct”列，復(fù)制公式填滿所有標(biāo)本對(duì)應(yīng)的2-Ct空格。17、至此，2