高中生物 1.1.1 微生物培養(yǎng)基的配制同步課件 蘇教版選修1.ppt

第一章無菌操作技術(shù)實踐 第一章無菌操作技術(shù)實踐 第一節(jié)微生物的培養(yǎng)和應(yīng)用 一 微生物培養(yǎng)基的配制 學(xué)習(xí)導(dǎo)航1 掌握培養(yǎng)基的用途和種類 重點 2 能區(qū)別消毒和滅菌 會運用常用的消毒 滅菌方法 難點 3 了解培養(yǎng)基的配制過程及培養(yǎng)基的配制原則 重點 繁殖 代謝產(chǎn)物 天然培養(yǎng)基 2 按物理狀態(tài)可分為液體培養(yǎng)基 半固體培養(yǎng)基和 培養(yǎng)基 是最理想的凝固劑 3 按功能可分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基 加富培養(yǎng)基 和鑒別培養(yǎng)基 培養(yǎng)基中加入鏈霉素 即可達到抑制 的生長 將 分離出來 培養(yǎng)基中添加 能區(qū)分大腸桿菌和產(chǎn)氣腸桿菌 固體 瓊脂 選擇培養(yǎng)基 細菌和放線菌 真菌 伊紅 美藍 1 1 天然培養(yǎng)基取材便利 營養(yǎng)豐富 配制簡便 實驗結(jié)果的重復(fù)性好 2 各種培養(yǎng)基盡管配方不同 但一般都有水 無機鹽 碳源 氮源和生長因子 3 利用無氮培養(yǎng)基可篩選出固氮細菌 這屬于鑒別培養(yǎng)基的應(yīng)用 4 液體培養(yǎng)基 半固體培養(yǎng)基及固體培養(yǎng)基的主要區(qū)別在于是否加入瓊脂及加入的多少 判一判 二 消毒與滅菌 溫和 病原微生物 營養(yǎng)細胞 強烈 干熱 濕熱 高溫滅菌是利用高溫的致死作用 使微生物的蛋白質(zhì)和核酸等重要的生物大分子發(fā)生不可逆轉(zhuǎn)的變性 你知道高溫破壞的是蛋白質(zhì)的哪一結(jié)構(gòu)嗎 提示 高溫使蛋白質(zhì)內(nèi)部的氫鍵斷裂 從而破壞其空間結(jié)構(gòu) 但并不破壞肽鍵 想一想 三 細菌培養(yǎng)基的配制過程1 配制過程配制培養(yǎng)液 分裝 包扎 2 幾種天然有機營養(yǎng)物質(zhì)的主要成分 調(diào)節(jié)ph 滅菌 擱置斜面 水溶性糖類 有機氮化合物 3 細菌 放線菌 真菌生長的最適ph分別為 維生素 6 5 7 5 7 5 8 5 5 0 6 0 2 1 培養(yǎng)基調(diào)節(jié)合適的ph后就可以接種使用 2 牛肉膏只能為微生物提供碳源和氮源 3 制備細菌培養(yǎng)基操作順序為配制培養(yǎng)液 調(diào)節(jié)ph 滅菌 分裝 判一判 特別提醒判定培養(yǎng)基的類型及所培養(yǎng)微生物的生活方式的方法 培養(yǎng)基中是否含有有機物 若有 則培養(yǎng)的微生物為異養(yǎng)型微生物 若無 則培養(yǎng)的微生物為自養(yǎng)型微生物 是否含有瓊脂 若有 則該培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基 是否含有一些特殊物質(zhì) 如含有青霉素 高濃度鹽等 用于抑制不需要的微生物的生長 而促進所需微生物的生長的培養(yǎng)基為選擇培養(yǎng)基 如含有伊紅 美藍等 用于區(qū)分不同微生物種類的培養(yǎng)基為鑒別培養(yǎng)基 根據(jù)各類微生物的形態(tài)結(jié)構(gòu)特點和新陳代謝類型 利用選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基 結(jié)合顯微鏡鏡檢 以及菌落特征 可以把混雜在一起的大腸桿菌 硝化細菌 乳酸細菌 酵母菌 金黃色葡萄球菌 圓褐固氮菌分離開來 下面是分離篩選的方法步驟 請根據(jù)各個步驟的條件 填寫空格中的內(nèi)容 首先配制一系列不同性質(zhì)的固體培養(yǎng)基 然后進行高溫滅菌 再將上述微生物的混合液分別接種到各種培養(yǎng)基上培養(yǎng) 1 用無氮培養(yǎng)基可篩選出 2 用不含有機碳源的選擇性培養(yǎng)基可篩選出 3 酵母菌的篩選需要在常規(guī)培養(yǎng)基中另加入 4 用加了較高濃度nacl的培養(yǎng)基可選擇出 或者根據(jù)菌落的顏色呈現(xiàn) 色 將其挑取單獨培養(yǎng) 5 利用伊紅 美藍培養(yǎng)基培養(yǎng)混合菌 菌落呈 色并帶有金屬光澤的是 挑取該菌落單獨培養(yǎng) 結(jié)合顯微鏡鏡檢和進一步用伊紅 美藍培養(yǎng)基鑒別來確定 6 在無氧環(huán)境下培養(yǎng)混合菌 可以生長 加入一定濃度的乳酸 使培養(yǎng)基ph充分降低 可抑制 微生物的生長 利用菌落特征 結(jié)合顯微鏡鏡檢 選取生長優(yōu)勢的菌落 即可分離出 解析 若培養(yǎng)基中無氮 則凡是不能自生固氮的微生物均不能生存 題中所列微生物中 只有圓褐固氮菌能固氮 因而無氮培養(yǎng)基可選出該菌 若用不含有機碳的培養(yǎng)基則可選出自養(yǎng)型微生物 真菌的篩選可在培養(yǎng)基中加入青霉素 高濃度nacl可選出耐鹽微生物 如金黃色葡萄球菌 用伊紅 美藍培養(yǎng)基可鑒定大腸桿菌 在無氧環(huán)境中 厭氧型及兼性厭氧型微生物才能生長 需氧型微生物將被抑制 答案 1 圓褐固氮菌 2 硝化細菌 3 青霉素 4 金黃色葡萄球菌桔紅 金黃 5 綠大腸桿菌 6 大腸桿菌 乳酸細菌 酵母菌大腸桿菌和酵母菌乳酸細菌 1 在培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基中加入某些物質(zhì)能分離出所需的微生物 下列選項中 前者是在培養(yǎng)基中加入的物質(zhì) 后者是能被分離出的微生物 其中正確的是 a 氫氧化鈉 酵母菌b 鹽酸 放線菌c 適量的青霉素 霉菌d 適量的伊紅 美藍 大腸桿菌 變式訓(xùn)練 解析 選c 氫氧化鈉 鹽酸分別為強堿 強酸 酵母菌和放線菌都不能生存 加入伊紅 美藍的培養(yǎng)基是用來鑒定大腸桿菌 并不能分離大腸桿菌 適量的青霉素對原核生物有抑制作用 對真核生物的生命活動并不影響 1 營養(yǎng)要素微生物的化學(xué)組成與其他生物大體相同 也是由c h o n p s等元素組成 其中c h o n占細胞干重的90 以上 這些元素主要來自外界環(huán)境中的各種無機化合物和有機化合物 這些化合物歸納成碳源 氮源 生長因子 無機鹽和水這五大類營養(yǎng)要素 特別提醒 對異養(yǎng)微生物來說 含c n的化合物既是碳源 也是氮源 即有些化合物作為營養(yǎng)要素成分時并不是單一方面的作用 有些微生物需添加特殊營養(yǎng)物質(zhì) 原因是它們自身缺乏合成這些物質(zhì)所需要的酶或合成能力有限 2 配制原則 1 目的要明確 根據(jù)微生物的種類 培養(yǎng)目的等 如培養(yǎng)基可由簡單的無機物組成 生產(chǎn)用培養(yǎng)基內(nèi)可加入化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì) 而分類 鑒定用培養(yǎng)基內(nèi)必須加入已知化學(xué)成分的物質(zhì) 2 營養(yǎng)要協(xié)調(diào) 注意各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例 3 ph要適宜 各種微生物適宜生長的ph范圍不同 如細菌 放線菌和真菌的最適ph分別為 6 5 7 5 7 5 8 5和5 0 6 0 2012 鹽城高二檢測 分析有關(guān)微生物的資料 回答問題 1 1982年澳大利亞學(xué)者從胃活檢組織中分離出幽門螺桿菌 幽門螺桿菌的遺傳物質(zhì)集中分布的區(qū)域稱為 2 如圖4支試管分別代表4種微生物在半固體培養(yǎng)基 瓊脂含量3 5g l 中的生長狀態(tài) 其中 號試管代表幽門螺桿菌的生長狀態(tài) 由圖判斷 該菌在 條件下不能生長 3 下表是某培養(yǎng)基的配方 將幽門螺桿菌接種到ph適宜的該培養(yǎng)基中 置于37 下培養(yǎng)一段時間后 在該培養(yǎng)基中幽門螺桿菌的數(shù)目比剛接種時 主要原因是 4 幽門螺桿菌形態(tài)如圖所示 該菌在人體中可引起胃潰瘍等胃部疾病 幽門螺桿菌生長的最適ph為6 7 人體胃腔內(nèi)ph在1 2之間 但胃黏膜的黏液層靠近上皮細胞側(cè)ph為7 4左右 若幽門螺桿菌隨食物進入胃腔 結(jié)合其結(jié)構(gòu)特點以及能導(dǎo)致胃潰瘍的特性 推測該菌在胃內(nèi)如何存活 思路點撥 本題主要考查微生物培養(yǎng)的相關(guān)知識 解答本題應(yīng)明確以下幾點 了解幽門螺桿菌的生活習(xí)性 了解培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分組成 區(qū)別原核生物和真核生物 解析 1 幽門螺桿菌為原核生物 沒有核膜包圍的細胞核 遺傳物質(zhì)集中在擬核內(nèi) 2 幽門螺桿菌生活在半固體培養(yǎng)基的中部 說明它不能生活在氧氣濃度過高或過低的地方 3 培養(yǎng)基中缺乏氮源 幽門螺桿菌不能正常生活 數(shù)量會減少 4 幽門螺桿菌進入胃腔后 可以先依靠鞭毛運動至ph較高處緩沖 然后分泌蛋白中和胃酸 提高ph 以便繼續(xù)生存和繁殖 答案 1 擬核 核區(qū) 2 氧氣濃度過高或過低 3 少缺少氮源 缺少氮源和生長因子 4 幽門螺桿菌進入胃腔后 首先依靠鞭毛運動至ph較高處緩沖 然后分泌蛋白中和胃酸 提高ph 以便繼續(xù)生存和繁殖 變式訓(xùn)練2 微生物在生命活動過程中 需要不斷從外界吸收營養(yǎng)物質(zhì) 下列有關(guān)微生物營養(yǎng)物質(zhì)的敘述 正確的是 a 不同種類的微生物 對碳源的需要情況差別不大b 無機氮源不能為微生物的生命活動提供能源c 除水以外的無機物僅提供無機鹽 d 蛋白胨可以為微生物的生命活動提供碳源 氮源 生長因子解析 選d 異養(yǎng)型的微生物需要有機物作碳源 自養(yǎng)型微生物需無機物作碳源 無機物nh3不僅能為硝化細菌提供能量 還能作為其氮源 不僅能為其生命活動提供無機鹽 還能調(diào)節(jié)ph等 故前三項均錯 蛋白胨可為微生物提供碳源和氮源 水解后的氨基酸還可為微生物提供生長因子 下面對發(fā)酵過程中滅菌的理解不正確的是 a 防止雜菌污染b 消滅雜菌c 培養(yǎng)基和發(fā)酵設(shè)備都必須滅菌d 滅菌必須在接種前 解析 滅菌是微生物發(fā)酵過程的一個重要環(huán)節(jié) a項所述是滅菌的目的 因為發(fā)酵所用的菌種大多是單一純種 整個發(fā)酵過程不能混入其他微生物 雜菌 所以是正確的 b是錯誤的 因為滅菌的目的是防止雜菌污染 但實際操作中不可能只消滅雜菌 而是消滅全部微生物 c是正確的 因為與發(fā)酵有關(guān)的所有設(shè)備和物質(zhì)都要滅菌 發(fā)酵所用的微生物是滅菌后專門接種的 d也是正確的 滅菌必須在接種前 如果接種后再滅菌就會把所接菌種也殺死 答案 b 變式訓(xùn)練3 高溫滅菌的原理是 a 每種微生物生長的最適溫度都是一定的b 微生物對于高溫環(huán)境不適應(yīng)c 高溫破壞了微生物細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu) 從而使其失去侵染性d 高溫降低了環(huán)境中氧的濃度 解析 選c 蛋白質(zhì)是生物體生命活動的承擔(dān)者和體現(xiàn)者 核酸可控制生物體的代謝活動 高溫可使蛋白質(zhì)和核酸變性失活 從而影響微生物的生命活動 操作與實踐 細菌培養(yǎng)基的配制 問題與探究 1 培養(yǎng)基滅菌后 為什么需要冷卻到50 左右時 才能用來擱置斜面或倒平板 你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度 提示 瓊脂的凝固點為40 溫度太高易使培養(yǎng)皿破裂 低于40 培養(yǎng)基已凝固 倒不出 所以培養(yǎng)基滅菌后 需冷卻到50 左右時才能用來倒平板 可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的試管 感覺試管的溫度下降到剛剛不燙手時就可以進行倒平板了 2 為什么需要使試管口通過火焰 提示 通過灼燒滅菌 防止試管口的微生物污染培養(yǎng)基 3 為了能徹底滅菌 在操作過程中應(yīng)注意哪些事項 提示 使用高壓蒸汽滅菌鍋時 加壓之前一定要把原先的空氣排盡 注意恒溫滅菌 同時要注意高壓蒸汽滅菌鍋的壓力 100kpa 溫度 121 和滅菌時間 20min 例題 下表為牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的成分表 據(jù)表回答相關(guān)問題 1 蛋白胨在培養(yǎng)基中的主要作用是 2 若用表中成分材料配制觀察金黃色葡萄球菌菌落狀況的培養(yǎng)基 還需要添加的成分是 3 培養(yǎng)基配制好時 分裝前應(yīng)進行的工作程序是 4 從配制培養(yǎng)基直至接種培養(yǎng) 所采用的預(yù)防雜菌感染的方法是 5 對培養(yǎng)基進行擱置