實(shí)驗(yàn)四動(dòng)物細(xì)胞線粒體的超活染色與油鏡觀察.ppt

實(shí)驗(yàn)四動(dòng)物細(xì)胞線粒體的超活染色與油鏡觀察,一.實(shí)驗(yàn)原理活體染色是指對(duì)生活有機(jī)體的細(xì)胞或組織能著色但又無(wú)毒害的一種染色方法。它的目的是顯示生活細(xì)胞內(nèi)的某些結(jié)構(gòu)，而不影響細(xì)胞的生命活動(dòng)和產(chǎn)生任何物理、化學(xué)變化以致引起細(xì)胞的死亡。線粒體是細(xì)胞進(jìn)行呼吸作用的場(chǎng)所，其形態(tài)和數(shù)量隨物種、組織器官和生理狀態(tài)的不同而發(fā)生變化。詹納斯綠B可專一性地對(duì)線粒體進(jìn)行超活染色，這是由于線粒體內(nèi)的細(xì)胞色素氧化酶系的作用，使染料始終保持氧化狀態(tài)(即有色狀態(tài))，呈藍(lán)綠色；而線粒體周圍的細(xì)胞質(zhì)中，這些染料被還原為無(wú)色的色基(即無(wú)色狀態(tài))。二.試劑與器械1.器材:顯微鏡、恒溫水浴鍋、解剖盤、剪刀、鑷子、雙面刀片、解剖盤載玻片、凹面載玻片、蓋玻片、表面皿、吸管、牙簽、吸水紙。2.試劑：Ringer溶液、10%中性紅溶液、1%詹納斯綠B溶液,三實(shí)驗(yàn)步驟（一）線粒體的超活染色取清潔載玻片放在37恒溫水浴鍋的金屬板上，滴2滴1/5000詹納斯綠B染液。實(shí)驗(yàn)者用牙簽寬頭在自己口腔頰粘膜處稍用力刮取上皮細(xì)胞，將刮下的粘液狀物放大載玻片的染液滴中，染色10l5min(注意不可使染液干燥，必要時(shí)可再加滴染液)，蓋上蓋玻片，用吸水紙吸去四周溢出的染液，置顯微鏡下觀察。在低倍鏡下，選擇平展的口腔上皮細(xì)胞，換高倍鏡或油鏡進(jìn)行觀察?？梢姳馄綘钌掀ぜ?xì)胞的核周圍胞質(zhì)中，分布著一些被染或藍(lán)綠色的顆粒狀或短棒狀的結(jié)構(gòu)，即是線粒體。（二）油鏡的觀察操作1.把鏡筒向上提升約15cm(有的是載物臺(tái)向下降15cm)，再把油鏡轉(zhuǎn)到工作位置。,2.在聚光器和蓋玻片上所要觀察的位置各滴一小滴香柏油或石蠟油，一邊從側(cè)面觀察油鏡頭，一邊細(xì)心擰動(dòng)粗調(diào)焦螺旋，使油鏡頭的前端與油滴接觸，再慢慢下降油鏡，使其前端接近蓋玻片為止，最后，一邊觀察視野中的圖像，一邊擰動(dòng)細(xì)調(diào)焦螺旋，使鏡筒稍為上下升降看清標(biāo)本。3.觀察完畢后，提升物鏡約lcm，把油鏡轉(zhuǎn)離光軸，及時(shí)做清潔工作。油鏡先用干的擦鏡紙擦1一2次，把部分油去掉，再用清潔劑(70%乙醚+30%無(wú)水乙醇)或二甲苯滴濕的擦鏡紙擦2次，最后用于擦鏡紙擦1次。擦拭要小心，動(dòng)作要輕，聚光器上的油也用同樣方法處理。,四.注意事項(xiàng)應(yīng)稍用力刮取口腔頰粘膜處上皮細(xì)胞，否則無(wú)活細(xì)胞染色不能成功。五.實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見扁平狀上皮細(xì)胞的核周圍胞質(zhì)中，分布著一些被染或藍(lán)綠色的顆粒狀