補充檢驗方法

附件銀杏葉提取物、銀杏葉片、銀杏葉膠囊中游離槲皮素、山柰素、異鼠李素檢查項補充檢驗方法【檢查】游離槲皮素、山柰素、異鼠李素 照高效液相色譜法（中國藥典2010年版一部附錄 D）測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.4%磷酸溶液（50:50）為流動相；檢測波長為360nm。理論板數(shù)按槲皮素峰計算應(yīng)不低于2500。對照品溶液的制備 分別取槲皮素對照品、山柰素對照品、異鼠李素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml分別含30g、30g、20g的混合溶液，作為對照品溶液。供試品溶液的制備 取銀杏葉提取物約40mg；或取銀杏葉片10片，糖衣片除去包衣，精密稱定，研細(xì)，取約相當(dāng)于總黃酮醇苷9.6mg的粉末；或取銀杏葉膠囊裝量差異項下的內(nèi)容物，混勻，研細(xì)，取約相當(dāng)于總黃酮醇苷9.6mg的粉末，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇溶液20ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率33kHz）20分鐘，取出，放冷，再稱定重量，用80%甲醇溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。測定法 分別精密吸取對照品溶液10l，供試品溶液210l，注入液相色譜儀，測定，分別計算槲皮素、山柰素、異鼠李素的含量。結(jié)果判斷：銀杏葉提取物：本品按干燥品計，每1g含槲皮素（C15H10O7）不得過10.0mg，山柰素（C15H10O6）不得過10.0mg，異鼠李素（C16H12O7）不得過4.0mg。銀杏葉片：規(guī)格（1）本品每片含槲皮素（C15H10O7）不得過0.40mg，山柰素（C15H10O6）不得過0.40mg，異鼠李素（C16H12O7）不得過0.16mg；規(guī)格（2）本品每片含槲皮素（C15H10O7）不得過0.80mg，山柰素（C15H10O6）不得過0.80mg，異鼠李素（C16H12O7）不得過0.32mg。銀杏葉膠囊：規(guī)格（1）本品每粒含槲皮素（C15H10O7）不得過0.40mg，山柰素（C15H10O6）不得過0.40mg，異鼠李素（C16H12O7）不得過0.16mg；規(guī)格（2）本品每粒含槲皮素（C15H10O7）不得過0.80mg，山柰素（C15H10O6）不得過0.80mg，異鼠李素（C16H12O7）不得過0.32mg；規(guī)格（3）本品每粒含槲皮素（C15H10O7）不得過1.67 mg，山柰素（C15H10O6）不得過1.67mg，異鼠李素（C16H12O7）不得過0.67mg。附注：銀杏葉片規(guī)格： （1）每片含總黃酮醇苷9.6mg，萜類內(nèi)酯2.4mg （2）每片含總黃酮醇苷19.2mg，萜類內(nèi)酯4.8mg銀杏葉膠囊規(guī)格：（1）每粒含總黃酮醇苷9.6mg，萜類內(nèi)酯2.4mg （2）每粒含總黃酮醇苷19.2mg，萜類內(nèi)酯4.8mg（3）每粒含總黃酮醇苷40mg，萜類內(nèi)酯10mg自從國家食品藥品監(jiān)督管理總局5月19日發(fā)布關(guān)于桂林興達(dá)藥業(yè)有限公司等企業(yè)違法生產(chǎn)銷售銀杏葉藥品的通告（2015年第15號）以來，銀杏葉藥品專項治理工作在全國的制藥企業(yè)內(nèi)逐漸擴大，愈演愈烈。截至6月4日，全國涉案中藥提取物生產(chǎn)企業(yè)：6家；涉案購買不合格原料進(jìn)行制劑生產(chǎn)的企業(yè)達(dá)43家（國內(nèi)使用銀杏葉提取物的制劑廠家共有113家，其中注射劑14家，口服制劑98家）幾乎一半企業(yè)被牽扯在內(nèi)，其中不乏大型制藥企業(yè)。業(yè)內(nèi)企業(yè)大多噤若寒蟬，新一輪的重點排查開始了。各省藥監(jiān)局雷厲風(fēng)行徹查各種銀杏制劑，各級醫(yī)院甚至擺出了2012年毒膠囊事件的架勢，清退全部銀杏制劑。究竟什么原因造成了這次事件呢？國家局曝光的信息：幾家生產(chǎn)企業(yè)，擅自將提取工藝從乙醇提取變成了3%的稀鹽酸提取。如果采用乙醇加熱回流的傳統(tǒng)方法，乙醇作為溶劑，蒸發(fā)損耗比較大。并且乙醇屬于高度易燃物，所以生產(chǎn)企業(yè)的期間制造成本非常高。所以要迎合“某些企業(yè)低價采購原料提取物降低藥品成本，最后得以低價中標(biāo)進(jìn)入醫(yī)院市場”的目的。部分企業(yè)將乙醇換成了3%的稀鹽酸作為溶劑進(jìn)行提取。稀鹽酸提取銀杏制劑的優(yōu)勢：1.加熱回流蒸發(fā)損耗比較少。2.根據(jù)相似相溶的原理，稀鹽酸作為溶劑更容易將銀杏葉中的雜質(zhì)成份銀杏酸清除出來。更容易達(dá)到國家標(biāo)準(zhǔn)中對銀杏酸的含量要求。3.雖然鹽酸會造成一定的銀杏黃酮類成份損耗（這點可以采用加大銀杏葉藥材投藥量；提取后迅速中和的辦法解決）但弱酸性環(huán)境有利于提高銀杏葉提取物中銀杏內(nèi)脂的穩(wěn)定性既然稀鹽酸相對乙醇提取有那么多的優(yōu)勢，為何國家藥監(jiān)總局要徹查此事，要求企業(yè)整改呢？NO.1：環(huán)境保護要求鹽酸提取銀杏葉后的廢水處理是一個難題，含有大量銀杏酸的酸性廢液，按照正常應(yīng)該是用生石灰中和后，經(jīng)過治污處理才能排放。但是由于氯化鈣的多孔性和其他原因，難以將廢水正常環(huán)?；幚怼Ｋ嵝詮U液會污染水體，上世紀(jì)90年代21世紀(jì)初，各地化工廠，制革廠、印染廠的廢水污染河流的情況，大多都是這樣的廢酸引起的。請企業(yè)家們計算下環(huán)保成本！地方政府單純?yōu)榱薌DP罔顧環(huán)保壓力發(fā)展經(jīng)濟的時代早該結(jié)束了！如果采用成本較高的乙醇提取銀杏葉，只會產(chǎn)生固體廢渣和少量廢液，環(huán)保無害化處理相對容易簡單。NO.2：GMP嚴(yán)格執(zhí)法的要求國家藥監(jiān)總局2014年7月下發(fā)的關(guān)于加強中藥生產(chǎn)中提取和提取物監(jiān)督管理的通知（食藥監(jiān)藥化監(jiān)2014135號）的要求組織生產(chǎn)、自主組織原料提取。并按照有關(guān)規(guī)定在總局登記。并要求2016年1月1日后各家中藥企業(yè)完全自主提取中藥材。實際實施過程中企業(yè)并不順利。并查出多家企業(yè)偽造進(jìn)貨記錄的情況。阿里巴巴上搜索“銀杏提取物”的情況結(jié)果獲得528條搜索記錄，賣家來自全國各地，銀杏提取物均滿足24/6的國家標(biāo)準(zhǔn)要求（銀杏黃酮含量大于24%，銀杏內(nèi)脂含量大于6%）國家局在借“銀杏葉事件”整頓整個中藥產(chǎn)業(yè)，甚至通過此事件，介入到保健品生產(chǎn)的上游進(jìn)行有關(guān)的監(jiān)管。消滅以往的監(jiān)管死角。建立從成份含量管理到方法控制的全過程監(jiān)管。長期來講，對國民健康是負(fù)責(zé)的，利好消息。NO.3：技術(shù)上優(yōu)勝劣汰，促進(jìn)中藥產(chǎn)業(yè)發(fā)展資料顯示，銀杏葉提取物自1965年被德國研制以來，在全球均有廣泛應(yīng)用，主要用于神經(jīng)內(nèi)科、心內(nèi)科、老年科、中醫(yī)科和保健品市場。到2013年，全球市場上銀杏葉制劑（含針劑）年銷售額達(dá)70億美元。由于其研發(fā)時間很早，故而質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)層次較低。提取的有效成份的含量只有30%【驚嘆銀杏療效的強大，70%的不明成份！一起進(jìn)入體內(nèi)的成份是敵是友都不知道】進(jìn)過幾十年的臨床研究和使用，銀杏制劑受制于老的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，難以有治療效果的全面提升。直到2011年銀杏內(nèi)酯上市，將其中最具有臨床療效的銀杏內(nèi)酯和白果內(nèi)酯按照最優(yōu)比52%:48%提取精制純化，有效含量達(dá)到99%第三代銀杏制劑才真正釋放出“銀杏”這個古老物種的魅力。世界各國銀杏葉提取物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)比較：銀杏內(nèi)酯其提取過程的非常復(fù)雜（原研德國企業(yè)幾十年也沒做到）除了普通的乙醇提取外，還需要大量的非極性溶劑（如乙酸乙酯）【如果換鹽酸那點節(jié)省的成本已經(jīng)完全忽略了】層析柱從普通的樹脂柱變成按照銀杏內(nèi)酯分子類型定制的“聚酰胺”分離柱按照歐盟GMP標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)：全程環(huán)保、高效、無污染。對于落后產(chǎn)能的嚴(yán)格管理和產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升，對于我國中藥資源的深度開發(fā)是非常有益的。銀杏葉提取物事件與2012年的毒膠囊事件不同，其中一個重要的特征是產(chǎn)品有效成份和雜質(zhì)等的檢測完全合格，只是采用了未經(jīng)許可的生產(chǎn)工藝，管理上有諸多不符合GMP規(guī)定的行為。本次事件上，國家藥監(jiān)總局更多的出發(fā)點是：國家產(chǎn)業(yè)政策優(yōu)化，經(jīng)濟可持續(xù)發(fā)展層面。中國的醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)發(fā)展必然要淘汰落后產(chǎn)能、落后工藝而更多追求更好療效和創(chuàng)新產(chǎn)品。為我們的孩子留下藍(lán)天綠水，為我們的父輩們制造有效而經(jīng)濟的藥物，醫(yī)藥同道們共勉。2015 年，由于采用劣質(zhì)原料，擅自改變銀杏葉提取物生產(chǎn)工藝，而造成的銀杏葉風(fēng)波牽連了的多家國內(nèi)生產(chǎn)企業(yè)。這些企業(yè)擅自更改提取工藝，用 3% 的稀鹽酸代替稀乙醇制備銀杏葉提取物。不僅每噸能節(jié)約 4000 元成本，而且還能提高出率，縮短基礎(chǔ)工藝流程時間。然而這種工藝嚴(yán)重影響藥品安全和療效，今天就幫助大家解釋稀鹽酸提取銀杏制劑的劣勢吧！1. 稀鹽酸提取方法會造成銀杏葉提取物中的有效成分降低、遠(yuǎn)達(dá)不到中國藥典的標(biāo)準(zhǔn)，特別是萜內(nèi)酯的大量分解，最終導(dǎo)致產(chǎn)品功效降低。2. 在安全性方面，鹽酸提取法會導(dǎo)致提取物中有害成分銀杏酸等的含量增加，從而影響產(chǎn)品的安全性。3. 鹽酸提取會對環(huán)境造成一定的危害。鹽酸提取銀杏葉后的廢水，含有大量銀杏酸的酸性廢液，這種酸性廢液如不妥當(dāng)處理會污染水體，對環(huán)境造成嚴(yán)重危害。說到銀杏葉的提取工藝，目前國內(nèi)外廣泛采用的有二類：水 - 丙酮提取法和水 - 乙醇提取法。以國際上銀杏葉提取物的標(biāo)桿產(chǎn)品達(dá)納康(成份為 Egb761) 為例，它是通過水 - 丙酮雙相提取法，生產(chǎn)工藝是以水 - 丙酮為起始溶劑粗提取，再經(jīng)脫脂、除去銀杏酚酸等、活性成分富集、純化等數(shù)十道復(fù)雜工序，制成提取物。這是一個專利過程，區(qū)別于國際上的任何一種銀杏葉提取物的提取工藝。由于丙酮對提取設(shè)備中的不銹鋼內(nèi)膽及密封橡膠圈有一定腐蝕性，提取設(shè)備需定期更換，成本增高，因此考慮到國內(nèi) - 的設(shè)備和成本現(xiàn)狀，我國藥典規(guī)定銀杏葉提取物制劑采用水 - 乙醇提取法。但相比而言，水 - 丙酮提取法對銀杏葉有效成分的提取率更高。眾所周知，植物藥的品質(zhì)取決于原料來源、質(zhì)量控制、生產(chǎn)工藝和設(shè)備等很多方面因素，而提取工藝無疑是最為重要的一個環(huán)節(jié)。某種程度上說，選擇一種產(chǎn)品，就是選擇一種工藝標(biāo)準(zhǔn)，就是選擇品質(zhì)與信譽。例如上文提到的 EGB761，它代表了行業(yè)的更高標(biāo)準(zhǔn)，具