生物化學復習

第二章 蛋白質1、凱氏定氮法：蛋白質含量總含氮量無機含氮量）6.25例如：100%的蛋白質中含 N量為 16%，則含 N量 8%的蛋白質含量為 50%100% /xg=16% /1g x=6.25g2、根據(jù) R基的化學結構，可將氨基酸分為脂肪族氨基酸、芳香族氨基酸、雜環(huán)氨基酸和雜環(huán)亞氨基酸。按照 R基的極性，可分為非極性 R基氨基酸、不帶電荷的極性 R基氨基酸、極性帶負電荷的 R基氨基酸、極性帶正電荷的氨基酸。類別 氨基酸名稱縮寫符號簡寫符號丙氨酸 Ala A纈氨酸 Val V亮氨酸 Leu L異亮氨酸 Ile I苯丙氨酸 Phe F甲硫氨酸（蛋氨酸）Met M脯氨酸 Pro P非極性色氨酸 Trp W甘氨酸 Gly G絲氨酸 Ser S蘇氨酸 Thr T天冬酰胺 Asn N谷氨酰胺 Gln Q酪氨酸 Tyr Y極性不帶電荷半胱氨酸 Cys C天冬氨酸 Asp D極性帶負電荷（酸性氨基酸）谷氨酸 Glu E組氨酸 His H賴氨酸 Lys K極性帶正電荷（堿性氨基酸） 精氨酸 Arg R3、氨基酸的重要理化性質（1）一般物理性質無色晶體，熔點極高（200以上） ，不同味道；水中溶解度差別較大（極性和非極性） ，不溶于有機溶劑。氨基酸是兩性電解質。氨基酸等電點的確定：酸堿確定，根據(jù) pK值（該基團在此 pH一半解離）計算：等電點等于兩性離子兩側 pK值的算術平均數(shù)。（2） 化學性質與水合茚三酮的反應：Pro 產(chǎn)生黃色物質，其它為藍紫色。在 570nm（藍紫色）或 440nm（黃色）定量測定（幾 g） 。與甲醛的反應：氨基酸的甲醛滴定法與 2,4-二硝基氟苯(DNFB)的反應：形成黃色的 DNP-氨基酸，用來鑒定多肽或蛋白質的 N端氨基酸，又稱 Sanger法?；蚴褂?5-二甲氨基萘磺酰氯（DNS-Cl，又稱丹磺酰氯）也可測定蛋白質 N端氨基酸。與異硫氰酸苯酯（PITC）的反應：多肽鏈 N端氨基酸的 -氨基也可與 PITC反應，生成 PTC-蛋白質，用來測定 N端的氨基酸。4、肽的結構線性肽鏈，書寫時規(guī)定 N端放在左邊，C 端放在右邊，用連字符將氨基酸的三字符號從 N端到 C端連接起來，如 Ser-Gly-Tyr-Ala-Leu。命名時從 N端開始，連續(xù)讀出氨基酸殘基的名稱，除 C端氨基酸外，其他氨基酸殘基的名稱均將“酸”改為“酰” ，如絲氨酰甘氨酰酪氨酰丙氨酰亮氨酸。若只知道氨基酸的組成而不清楚氨基酸序列時，可將氨基酸組成寫在括號中，并以逗號隔開，如（Ala，Cys 2，Gly） ，表明此肽有一個 Ala、兩個 Cys和一個 Gly組成，但氨基酸序列不清楚。由于 C-N鍵有部分雙鍵的性質，不能旋轉，使相關的 6個原子處于同一個平面，稱作肽平面或酰胺平面。5、 、蛋白質的結構（一）蛋白質的一級結構（化學結構）一級結構中包含的共價鍵主要指肽鍵和二硫鍵。（二）蛋白質的二級結構（1）-螺旋（如毛發(fā)）結構要點：螺旋的每圈有 3.6個氨基酸，螺旋間距離為 0.54nm，每個殘基沿軸旋轉 100。（2）-折疊結構（如蠶絲）（3）-轉角（4）-凸起（5）無規(guī)卷曲（三）蛋白質的三級結構（如肌紅蛋白）（四）蛋白質的四級結構（如血紅蛋白）6、蛋白質分子中氨基酸序列的測定氨基酸組成的分析： 酸水解：破壞 Trp,使 Gln變成 Glu, Asn變成 Asp 堿水解：Trp 保持完整，其余氨基酸均受到破壞。N-末端殘基的鑒定：鑒定 N-末端的氨基酸殘基常用 2,4-二硝基氟苯（DNFB）的反應或丹磺酰氯反應。異硫氰酸苯酯（PITC）反應也可用于鑒定 N-末端的氨基酸殘基，但主要是用于測定肽段的氨基酸序列。C-末端殘基的鑒定： 肼解法：蛋白質或多肽與無水肼加熱發(fā)生肼解，反應中只有 C端氨基酸以游離形式存在。 還原法：肽鏈 C端氨基酸可用硼化鋰還原成相應的 -氨基醇，可用層析法加以鑒別。 羧肽酶法：羧肽酶從羧基端（C 端）一個一個切。多肽鏈的裂解：酶切位點或作用特點： 胰蛋白酶：Lys 賴, Arg 精的 C側 糜蛋白酶（胰凝乳蛋白酶）：Phe 苯丙, Tyr 酪, Trp 色的 C側 嗜熱菌蛋白酶：Leu, Ile, Val 的 N側 氨肽酶：從氨基端（N 端）一個一個切 溴化氰（CNBr）: Met 的 C端 羥胺：Asp 的 C側，Gly 的 N側7、蛋白質的沉淀反應：加高濃度鹽類；加有機溶劑；加重金屬鹽類；加某些酸類；加熱。8、氨基酸的顏色反應第三章 核酸1、核苷酸由含氮堿基（嘌呤或嘧啶） ，戊糖（核糖或脫氧核糖）和磷酸組成。核酸是核苷酸的多聚物，其連接鍵是 3，5-磷酸二酯鍵。2、生物體內的 AMP（腺苷酸）可與一分子磷酸結合，生成 ADP（腺苷二磷酸） ，ADP再與一分子磷酸結合，生成腺苷三磷酸（ATP） ，各種核苷三磷酸（ATP、GTP、CTP 和 UTP）是體內 RNA合成的直接原料，各種脫氧核苷三磷酸（dATP、dGTP、dCTP、dTTP）是 DNA合成的直接原料。在體內能量代謝中的作用：ATP能量“貨幣”UTP參加糖的互相轉化與合成CTP參加磷脂的合成GTP參加蛋白質和嘌呤的合成第二信使cAMP(3,5-環(huán)狀腺苷酸)3、核苷酸的性質：（一）一般理化性質：為兩性電解質，通常表現(xiàn)為酸性；DNA 為白色纖維狀固體，RNA 為白色粉末，不溶于有機溶劑；DNA 溶液的粘度極高，而 RNA溶液要小得多；RNA 能在室溫條件下被稀堿水解而 DNA對堿穩(wěn)定；利用核糖和脫氧核糖不同的顯色反應鑒定 DNA與 RNA。（二）核酸的紫外吸收性質：核酸的堿基具有共軛雙鍵，因而有紫外吸收性質，吸收峰在 260nm（蛋白質的紫外吸收峰在 280nm） 。增色效應；減色效應。核酸結構的穩(wěn)定性：堿基對間的氫鍵；堿基堆積力；環(huán)境中的正離子。核酸的變性：將紫外吸收的增加量達到最大增量一半時的溫度稱熔解溫度（ ） 。核酸的復性： 。 4、雙螺旋結構模型要點（1）兩條多核苷酸鏈反向平行。（2）堿基內側，A 與 T、G 與 C配對，分別形成 2和 3個氫鍵。（3）雙螺旋每轉一周有 10個（bp）堿基對，每轉的高度（螺距）為 3.4nm，直徑為 2nm。5、雙螺旋結構的穩(wěn)定因素（1）氫鍵（太弱） ；（2）堿基堆積力是穩(wěn)定 DNA最重要的因素；（3）離子鍵（減少雙鏈間的靜電斥力） 。6、DNA 的三級結構線形分子、雙鏈環(huán)狀(dcDNA)超螺旋7、tRNA 主要作用是轉運氨基酸用于合成蛋白質。RNAi(RNA干擾)用雙鏈 RNA抑制特定基因表達的技術稱 RNA干擾。snRNA（核小 RNA）主要存于細胞核中，占細胞 RNA總量的 0.11%，與蛋白質以RNP（核糖核酸蛋白）的形式存在，在 hnRNA和 rRNA的加工、細胞分裂和分化、協(xié)助細胞內物質運輸、構成染色質等方面有重要作用。第四章 糖類1、還原糖是指具有還原性的糖類。在糖類中，分子中含有游離醛基或酮基的單糖和含有游離醛基的而糖都具有還原性。還原性糖包括葡萄糖、果糖、半乳糖、乳糖、麥芽糖等。2、 在 多 羥 基 醛 或 多 羥 基 酮 中 ， 有 些 羥 基 上 的 氫 原 子 可 以 和 酮 基 （ 羰 基 ） 發(fā)生 加 成 反 應 ， 這 樣 會 生 成 一 個 羥 基 ， 這 就 是 半 縮 醛 羥 基 。3、如果沒有半縮醛，羥基就沒有還原性。4、單糖分船式構象和椅式構象。常見單糖衍生物有糖醇、糖醛酸、氨基糖及糖苷等。5、多糖沒有還原性和變旋現(xiàn)象。多糖的結構包括單糖的組成、糖苷鍵的類型、單糖的排列順序 3個基本結構因素。代表物有： 淀粉：淀粉與碘的呈色反應與淀粉糖苷鏈的長度有關：鏈長小于 6個葡萄糖基，不能呈色。鏈長為 20個葡萄糖基，呈紅色。鏈長大于 60個葡萄糖基，呈藍色。 糖原：糖原又稱動物淀粉，與支鏈淀粉相似，與碘反應呈紅紫色。 纖維素； 半纖維素； 瓊脂； 殼多糖（幾丁質） ；第五章 脂質和生物膜1、必需脂肪酸包括：亞油酸、亞麻酸和花生四烯酸。2、3、生物膜的組成：膜蛋白質（膜周邊蛋白和膜內在蛋白） 、膜質（磷脂、固醇及糖脂）和膜糖類。4、流動鑲嵌模型：生物膜是一種流動的、嵌有各種蛋白質的脂質雙分子層結構。5、膜的流動鑲嵌模型結構要點：膜結構的連續(xù)主體是極性的脂質雙分子層。脂質雙分子層具有流動性。膜的內在蛋白“溶解”于脂質雙分子層的中心疏水部分。外周蛋白與脂質雙分子層的極性頭部連接。雙分子層中的脂質分子之間或蛋白質組分與脂質之間無共價結合。膜蛋白可作橫向運動。6、生物膜的功能：物質傳遞作用。保護作用。信息傳遞作用。細胞識別作用。能量轉換作用（線粒體內膜和葉綠體類囊體膜） 。蛋白質合成與運輸（糙面內質網(wǎng)膜） 。內部運輸（高爾基體膜） 。核質分開（核膜） 。第六章 酶的概念與特點1、酶的催化特點：高效性、專一性、敏感性和可調性。2、酶的化學本質：除核酶外，大多數(shù)酶的化學本質是蛋白質。3、酶的化學組成：根據(jù)化學組成，酶可分為單純蛋白質的酶和綴合蛋白質的酶（又稱全酶） 。全酶中的蛋白質部分為脫輔酶，非蛋白質部分稱為輔因子。兩者單獨存在時均無催化活性。脫輔酶通常具有結合底物的作用，決定了酶作用的專一性，輔因子通常是作為電子、原子或某些化學基團的載體。4、酶的類型：根據(jù)酶蛋白分子結構不同，酶可分為單體酶、寡聚酶和多酶復合體三類。5、根據(jù)酶促反應的類型，把酶分為六大類：（1）氧化還原酶類氧化酶脫氫酶（2）轉移酶類（3）水解酶類（4）裂合酶類（5）異構酶類（6）合成酶類v = Vmax/2，則： km= S當 km大，說明 ES容易解離，酶與底物結合的親和力小。（4）從 km的大小，可以知道正確測定酶活力時所需的底物濃度。在進行酶活力測定時，通常用 4km的底物濃度即可。（5） km還可以推斷某一代謝物在體內可能的代謝途徑。當丙酮酸濃度較低時，代謝走哪條途徑?jīng)Q定于 km最小的酶。9、米氏常數(shù)可根據(jù)實驗數(shù)據(jù)作圖法直接求得：先測定不同底物濃度的反應初速度，從 v與S的關系曲線求得 V，然后再從 1/2V求得相應的S即為 km（近似值） 。通常用 Lineweaver-Burk作圖法（雙倒數(shù)作圖法）10、11、在最適的反應條件（25）下，每分鐘內催化一微摩爾底物轉化為產(chǎn)物的酶量定為一個酶活力單位，即 ：1IU=1mol/min酶分離純化的三個基本步驟：抽提，純化，結晶或制劑。方法：1.根據(jù)溶解度不同（鹽析法、有機溶劑沉淀法、等電點沉淀法、選擇性沉淀法） ；2.根據(jù)酶與雜蛋白分子大小的差別（凝膠過濾法、超離心法） ；2.3.根據(jù)酶和雜蛋白與吸附劑之間吸附與解吸附性質的不同（吸附分離法） ；3.4.根據(jù)帶電性質（離子交換層析法、電泳分離法、等電聚焦層析法） ；4.5.根據(jù)酶與雜蛋白的穩(wěn)定性差別（選擇性變性法） ；6.根據(jù)酶與底物、輔因子或抑制劑之間的專一性親和作用（親和層析法） 。第七章 維生素和輔酶各種維生素的主要活性形式及其功能類型 人體內的主要活性形式主要功能 缺乏導致病癥維生素 A 11順視黃醛 暗視覺形成 夜盲癥、干眼病維生素 D 1,25二羥維生素 D3 調節(jié)鈣與磷的代謝 佝僂病、軟骨病維生素 E（生育酚） 生育酚抗氧化作用、維持動物正常生殖功能生殖器官受損不育，心肌受損，貧血維生素 K（凝血維生素）維生素 K1和 K2參與凝血因子的激活過程，促進凝血凝血時間延長維生素 B1（硫胺素） 硫胺素焦磷酸（TPP）參與 酮轉移、酮酸的脫羧和羥酮的形成與裂解等反應腳氣?。ǘ喟l(fā)性神經(jīng)炎、皮膚麻木、心力衰竭、肌肉萎縮）維生素 B2（硫胺素）黃素單核苷酸（FMN）黃素腺嘌呤二核苷酸（FAD）參與氧化還原反應，傳遞氫和電子空腔發(fā)炎、舌炎、角膜炎、皮炎維生素 PP 煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD +）煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP +）參與氧化還原反應，轉移氫和電子癩皮癥（皮炎、腹瀉及癡呆）泛酸（遍多酸）輔酶 A（CoA） ?；D移作