THXCY-紫花苜蓿維生素E測定技術規(guī)程編制說明

團體標準《紫花苜蓿維生素E測定技術規(guī)程》編制說明《紫花苜蓿維生素E測定技術規(guī)程》團標制定組二〇二五年五月

目次一、任務來源及標準制定背景 31、任務來源 32、標準制定背景 3二、主要工作過程 4三、標準編制原則和主要技術內容確定的依據(jù) 51、標準編制原則 52、主要技術內容確定的論據(jù) 5四、采用的國際標準 6五、與現(xiàn)行法律法規(guī)和強制性標準的關系 6六、重大分歧意見的處理經過和依據(jù) 7七、標準作為強制性或推薦性標準的意見 7八、貫徹標準的要求和措施建議 7九、廢止現(xiàn)行有關標準的建議 7十、其他應予說明的事項 7

一、任務來源及標準制定背景1、任務來源本技術規(guī)程由中國農業(yè)大學，北京市營養(yǎng)源研究所有限公司，北京畜牧獸醫(yī)研究所共同申報。2、標準制定背景（1）政策支持推動苜蓿高值化應用國家《“十四五”全國飼草產業(yè)發(fā)展規(guī)劃》提出到2025年，全國牛羊飼草保障達到80%以上，苜蓿作為重要飼草被重點扶持。制定本技術規(guī)程符合農業(yè)農村部《促進農產品加工業(yè)發(fā)展三年行動方案(2024-2026年)》中“促進農產品加工技術標準化”要求。紫花苜蓿是全世界種植面積最大，應用最廣的豆科牧草，素有“牧草之王”的美譽。紫花苜蓿粗蛋白含量高、產量高，且富含維生素和礦物質及其他活性物質，是牛羊等反芻家畜的優(yōu)質飼草，在我國畜牧業(yè)結構調整以及健康可持續(xù)發(fā)展中具有不可或缺的作用。此外，紫花苜蓿還具有固氮能力，能夠培肥地力，減少化肥施用，顯著提高后茬作物產量。（2）維生素E對飼料開發(fā)具有重要意義維生素E（VitaminE，VE），又名生育酚，1922年由美國加州大學HerbertEvans發(fā)現(xiàn)，后經多年研究，分離出其生物分子結晶，并確定了其化學結構式為C29H50O2。1924年，阿肯色大學的Sure首次將其命名為VitaminE（VE）。維生素E是人和動物必需卻不能自主合成的維生素。缺乏維生素E會造成畜禽免疫力和卵巢機能下降甚至不孕不育等一系列問題。合理補充維生素E能夠提高畜禽的免疫力和繁育性能，改善肉、蛋、奶等畜產品的品質。肉牛飼養(yǎng)中，添加VE可以明顯提高肌肉的紅色度，延長肉品的貨架期；奶牛日糧中添加VE可以顯著提高牛奶的品質，抑制牛奶的氧化過程，大幅度延長牛奶的貯藏時間并使其保持鮮奶的特殊香味。維生素E在植物葉綠體中合成，天然合成的維生素E包括生育酚（Tocopherol）和生育三烯酚（Tocotrienol）兩大類，根據(jù)芳香環(huán)上甲基位置和數(shù)目的不同生育酚和生育三烯酚又進一步分為a、β、γ及δ四種類型。維生素E的積累能夠清除光合作用過程中產生的活性氧，抑制其對光合膜系統(tǒng)中不飽和脂肪酸長鏈的損傷，從而保證葉綠體結構和功能的完整。此外，維生素E還具有促進種子萌發(fā)、傳遞葉綠體信號、調節(jié)葉片茉莉酸含量和增強植物對多種逆境的抗性作用。紫花苜蓿中維生素E的含量約為15-30mg/kg，是黑麥草的2-3倍，青貯玉米的1.5倍，是畜禽維生素E的重要來源。飼喂維生素E含量高的紫花苜蓿可減少飼料中合成維生素E的添加量，降低養(yǎng)殖成本，但不同紫花苜蓿品種中維生素E含量不同，因此，精準地檢測紫花苜蓿維生素E含量對于選育高維生素E含量紫花苜蓿具有重要意義。（3）檢測技術研究現(xiàn)狀目前，生育酚測定方法主要有：比色法、熒光法、高效液相色譜法、氣相色譜法、氣相色譜-質譜法和電化學分析法等。比色法只能測定生育酚的總含量，不能區(qū)分各種單體的含量；光譜法前處理繁瑣，共存物對檢測結果干擾較大；氣相色譜法因生育酚分子量大、沸點高，導致其汽化度低，無法直接進樣檢測；氣相色譜-質譜法儀器昂貴，普適性低；電化學分析法雖然靈敏度高、具有一定的選擇性，但樣品中共存物的干擾會導致生育酚結果偏高；正相高效液相色譜法雖然前處理簡單，但生育酚易吸附在固定相表面，樣品殘留率高，準確性差，不適合大批量樣品的檢測；反相高效液相色譜法具有快速、靈敏、準確度和精密度高等優(yōu)點，適合于樣品中生育酚含量的測定。但目前對紫花苜蓿維生素E測定的研究較少，本規(guī)程采用高效液相色譜法測定紫花苜蓿中維生素E的含量，建立紫花苜蓿中維生素E測定技術規(guī)程，以期為紫花苜蓿維生素E的測定提供技術支持，提高紫花苜蓿維生素E的提取效率和質量，助力于推動紫花苜蓿高附加值產品的利用。二、主要工作過程2025.03月-2025.04月收集實驗數(shù)據(jù)，整理資料，形成工作組討論稿。2025.05月-2025.06月編寫征求意見稿標準文本和《編制說明》。由北京華夏草業(yè)產業(yè)技術創(chuàng)新戰(zhàn)略聯(lián)盟組織國內相關專家對《紫花苜蓿維生素E測定技術規(guī)程》征求意見稿及編制說明進行會議評審。三、標準編制原則和主要技術內容確定的依據(jù)1、標準編制原則按照GB/T1.1-2020《標準化工作導則第1部分：標準的結構和編寫》的要求和規(guī)定編寫本標準內容。本標準制定過程中，始終遵循密切聯(lián)系生產實踐，確保標準具有較強的科學性、可操作性；堅持促進行業(yè)規(guī)范發(fā)展的基本原則，以科學性、實用性、先進性作為編制標準的指導思想；在文字結構上力求嚴謹、簡潔、科學；在技術內容上力求覆蓋紫花苜蓿維生素E測定技術規(guī)程的關鍵環(huán)節(jié)。制定過程中除了認真總結紫花苜蓿維生素E測定技術遇到的問題，不斷完善，市場應用中深入研究，還參考了國內外相關文獻資料，符合紫花苜蓿維生素E測定技術生產實際，達到了內容全面、技術含量高、操作性強的要求。該標準與現(xiàn)行法律法規(guī)無沖突，并保證了對該標準最新版本的引用。2、主要技術內容確定的論據(jù)適用范圍本標準主要基于紫花苜蓿維生素E測定技術的多年應用，在實踐和不斷完善的基礎上初步制定形成了“紫花苜蓿維生素E測定技術規(guī)程”。本標準規(guī)定了紫花苜蓿維生素E測定技術的術語和定義、原理、試劑和材料、儀器設備、分析步驟、分析結果的表述、精密度等內容。本標準適用于紫花苜蓿維生素E的測定。規(guī)范性引用文件本標準制定時，參照了GB/T1.1-2020標準化工作導則，GB/T20000標準化工作指南，GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法。（3）術語與定義本標準中出現(xiàn)的術語和定義依據(jù)包括著作、專著、已發(fā)表的論文、各級標準等國內外相關文獻資料并結合標準起草單位研究應用實踐經驗，最后經參編人員討論確定了本標準的術語為“紫花苜蓿、維生素E”，并給出相應定義。（4）主要技術指標確定的依據(jù)本技術規(guī)程起草單位為中國農業(yè)大學、北京市營養(yǎng)源研究所有限公司。①試樣制備。稱取50mg新鮮葉片在液氮中研磨至均勻一致，儲存于離心管中，樣品現(xiàn)用現(xiàn)制備。②提取。向儲存樣品的離心管中加入1mL甲醇：三氯甲烷溶液（2：1，V：V），室溫避光放置20min。然后加入300μL三氯甲烷和600μL水，渦旋混合均勻后，14000g離心10min。棄去上層水相，將下層有機相轉入三角瓶中。③濃縮。將三角瓶接在旋轉蒸發(fā)儀上，于40°C水浴中減壓濃縮至近干，用400μL甲醇溶解三角瓶中的殘留物，溶液過0.45μm有機系濾膜后供高效液相色譜測定。④測定技術。文件規(guī)定了紫花苜蓿中維生素E測定的高效液相色譜測定方法。試樣中的維生素E經甲醇：三氯甲烷溶液提取、濃縮后，采用C30反相液相色譜柱分離，熒光檢測器檢測，外標法定量。優(yōu)化后確定采用C30色譜柱，柱長250mm，內徑4.6mm，粒徑5μm，或具同等性能的色譜柱；柱溫30℃；流動相采用甲醇：水溶液（95：5，V：V）等度洗脫；流速1mL/min；激發(fā)波長：294nm，發(fā)射波長：328nm。在30min內實現(xiàn)了α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚的基線分離，方法分離度好，響應靈敏度高，定量限低，可以滿足紫花苜蓿中維生素E的檢測要求。試驗將維生素E標準溶液分別注入高效液相色譜儀中，測定相應的峰面積，以峰面積為縱坐標，以標準測定液濃度為橫坐標繪制標準曲線，計算直線回歸方程，結果顯示，α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚含量在0.20μg/mL-10.00μg/mL范圍內線性關系良好，可以滿足檢測要求。以紫花苜蓿葉片為研究對象，平行測定8次，8次平行實驗測定結果的相對標準偏差＜10%，表明該方法的精密度良好，適合定量分析。按照紫花苜蓿中維生素E含量的0.5倍、1倍和2倍水平進行3水平6平行加標回收實驗，維生素E回收率的范圍在80~110%，表明本方法回收率高，符合檢測要求。四、采用的國際標準無。五、與現(xiàn)行法律法規(guī)和強制性標準的關系本標準與現(xiàn)行法律法規(guī)和強制性標準的相關條例沒有沖突。六、重大分歧意見的處理經過和依據(jù)無。七、標準作為強制性或推薦性標準的意見建議將本標準作為推薦性標準發(fā)布實施，并加強標準的宣貫。八、貫徹標準的要求和措施建議1、本標準屬于中國農業(yè)大學牽頭制定的團體標準，為成功實施紫花苜蓿中維生素E的測定技術，應認真執(zhí)行本標準的相關技術要求。2、應加強對標準的宣傳、講解和技術指導，促進實施者熟練掌握標準中的技術規(guī)范，保證本標準的廣泛推廣