《植物組織培養(yǎng)》課件 模塊二-2 培養(yǎng)基的制備

任務一母液的配制任務二培養(yǎng)基的制備模塊二培養(yǎng)基的配制項目二

培養(yǎng)基的配制任務二培養(yǎng)基的配制知識目標培養(yǎng)基配制方法和步驟；一般掌握培養(yǎng)基的篩選辦法。12技能目標熟練掌握培養(yǎng)基配制方法和步驟；熟練掌握培養(yǎng)基的滅菌方法12任務講解第一節(jié)培養(yǎng)基配制流程第二節(jié)培養(yǎng)基的選擇第一節(jié)培養(yǎng)基配制流程分裝調(diào)PH值接種確定配方移母液定容培養(yǎng)基熬制滅菌稱取蔗糖、瓊脂扎口水培養(yǎng)基配制流程圖1.培養(yǎng)基熬制1.將2/3水倒入鋁鍋中，近開鍋時加入稱好的蔗糖和瓊脂，邊煮邊攪拌，防止糊底。2.用旺火煮開，再用文火加熱，直至瓊脂全部融化。3.將量好的培養(yǎng)基母液倒入鋁鍋中，攪拌均勻。1.培養(yǎng)基熬制培養(yǎng)基熬制視頻視頻2-3培養(yǎng)基熬制母液的量取視頻視頻2-4母液的量取母液的定容

2.定容培養(yǎng)基做好后在調(diào)整pH值之前，應對培養(yǎng)基進行定容，考慮培養(yǎng)基本身處于熱態(tài)并還需要滅菌等要損失部分，因此定容時需要多出近1/10。視頻2-5定容母液調(diào)pH3.調(diào)pH值用0.1MNaOH或HCl調(diào)PH值為5.8。在培養(yǎng)基配方不大變動的情況下可用經(jīng)驗法?？梢詫⑦B續(xù)三次測定所加入的酸或堿液的平均值作為以后調(diào)整的用量值。調(diào)后注意一定要搖動均勻。視頻2-6調(diào)整PH值4.激素的添加在激素的水平變化較小時，尤其在配制多種培養(yǎng)基時，激素可以在pH值調(diào)整后添加。要求嚴格時應添加激素后再調(diào)整pH值（因激素母液可能影響培養(yǎng)基的pH值）。激素的添加培養(yǎng)基分裝5.培養(yǎng)基分裝趁熱分裝，100ml的三角瓶約裝入30～40ml,30瓶/L。視頻2-7培養(yǎng)基分裝培養(yǎng)基的扎口與滅菌

6.扎口與滅菌要求封口松緊適宜，系活扣，便于接種操作。培養(yǎng)基應及時滅菌，防止變質(zhì)。視頻2-8培養(yǎng)基滅菌任務小結(jié)培養(yǎng)基配制的順序為：倒水加熱稱取瓊脂入鍋加熱熔解加入蔗糖待瓊脂溶化后加母液攪拌均勻然后加激素。培養(yǎng)基制作視頻視頻2-9培養(yǎng)基母液配制

0.5mg/ml的NAA配制方法，要求配100ml。某培養(yǎng)基為MS+BA2mg/l+NAA0.2mg/l.

問：如果做2升，應加激素各為多少毫升？（BA母液為0.5mg/ml，NAA為0.5mg/ml）。思考練習12第二節(jié)培養(yǎng)基的選擇

在建立一個新的實驗體系時，為了能研制出一種適合的培養(yǎng)基，最好先由一種已被廣泛使用的基本培養(yǎng)基(如MS培養(yǎng)基或B5培養(yǎng)基)開始。當通過一系列的實驗，對這種培養(yǎng)基做了某些定性和定量的小變動之后，即有可能得到一種能滿足實驗需要的新培養(yǎng)基，選擇最佳培養(yǎng)基。常用試驗方法主要有單因子試驗、多因子試驗及廣譜實驗等。單因子試驗

在單因子試驗中，由于培養(yǎng)基中其他成分都維持在一般水平上，所以只變動一個因子，就可以找出這一因子對試驗的影響和影響的程度。例如MS基本培養(yǎng)基的其他成分和用量都不變，只變動NAA用量對某一培養(yǎng)物生根的影響，這種只研究一個因素的試驗就是單因子試驗。單因子試驗

試驗中要求對照組與試驗組中的試驗個體，即植物組織塊或其他培養(yǎng)物，必須在遺傳性、生理狀態(tài)、前培養(yǎng)條件等方面，盡可能完全一致。以保證試驗結(jié)果是來源于試驗因子，而不是由于試驗材料的不一致導致的。試驗中各處理一般都要設有一定的重復，以取得可靠的試驗結(jié)果。隨試驗規(guī)模和要求不同，大多每個項目要有4～10瓶，每瓶至少3塊培養(yǎng)物或3叢小幼苗。多因子試驗

對培養(yǎng)基中兩個或兩個以上因素進行研究的試驗稱為多因子實驗，試驗可采用完全試驗方案，也可選用正交設計方案，完全試驗方案具有均衡完全的特點，各個因子的每個水平都相互搭配，構(gòu)成了所有可能的處理組合，如研究NAA和6－BA的最佳濃度組合，每個因子各設5個濃度水平(0，0.5，2.5，5，10mg／L)，這兩種因子各種濃度的所有組合，就構(gòu)成了一個具有25項處理的試驗見下表。多因子試驗2種激素5種濃度的實驗組合6-BA(mg/L）00.52.5510NAA012345(mg/L)0.56789102.5111213141551617181920102122232425廣譜實驗法

在廣譜實驗法中，把培養(yǎng)基中所有組分分為4大類：無機鹽、有機營養(yǎng)物質(zhì)(蔗糖、氨基酸和肌醇等)、生長素、細胞分裂素。對每一類物質(zhì)選定低(L)、中(M)、和高(H)3個濃度。4類物質(zhì)各3種濃度的自由組合即構(gòu)成了一項包括81個處理的實驗。在這81個處理中最好的一個可用4個字母表示。例如，一個包含中等濃度無機鹽，低等濃度生長素、中等濃度細胞分裂素和高等濃度有機營養(yǎng)物質(zhì)的處理即可表示為MLMH。最佳組培方案篩選技巧

一、技術(shù)資料的收集

查：學名、品種及商品名，文獻資料（近3-5年）。查不到時，查相近的、同屬內(nèi)其他文獻。

信息：外植體取材時間、類型；初始培養(yǎng)基、繼代、生根培養(yǎng)基；培養(yǎng)基類型，附加成分，尤其激素及特殊成分，pH；培養(yǎng)條件，尤其溫度；馴化營養(yǎng)土配方及馴化條件。最佳組培方案篩選技巧

二、預備試驗分析上述信息，結(jié)合自身工作經(jīng)驗，針對關(guān)鍵因素，擬定方案。一般接種到現(xiàn)有培養(yǎng)基上，觀察和判斷，找出突破口。

三、正交試驗例：蘋果生根：在1/4MS，取IBAVB1間苯三酚炭暗培養(yǎng)5個因子，每因子4水平，選用L16(45)正交表。最佳組培方案篩選技巧Ln(tk)列號數(shù)（安排的因子數(shù)）水平數(shù)處理數(shù)最佳組培方案篩選技巧最佳組培方案的篩選找出主導因子：IBA、暗培養(yǎng)天數(shù)經(jīng)組合試驗：IBA:1.5，2.0，2.5，3.0，5.0暗培養(yǎng)天數(shù)：1[2]3[4]5選出：IBA3mg/L暗培養(yǎng)3天

只研究一個因素的試驗就是單因子試驗；對培養(yǎng)基中兩個或兩個以上因素進行研究的試驗稱為多因子實驗，試驗可采用完全試驗方案，也可選用正交設計方案；組培方案篩選的流程為：技術(shù)資料的收集

預備試