DB22-T2024-2014-大白菜霜霉病抗性鑒定技術(shù)規(guī)范-吉林省

ICS65.020.20B05DB22吉林省地方標(biāo)準(zhǔn)DB22/T2024—2014大白菜霜霉病抗性鑒定技術(shù)規(guī)范ThetechnicalstandardofresistanceidentificationtodownymildewforChineseCabbage吉林省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布DB22/T2024—2014前言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由吉林省農(nóng)業(yè)委員會(huì)提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：王曉梅、韓玉珠、張浩、馬貴龍、王薇、趙欣欣、劉樸、王雪。IDB22/T2024—2014大白菜霜霉病抗性鑒定技術(shù)規(guī)范1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了大白菜霜霉病抗性鑒定的接種體制備、接種方法、室內(nèi)抗性鑒定、病情調(diào)查、抗病性評(píng)價(jià)以及鑒定記載表格。本標(biāo)準(zhǔn)適用于大白菜資源對(duì)大白菜霜霉病抗性的室內(nèi)鑒定及評(píng)價(jià)。2術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。2.1霜霉病cabbagedownymildew由卵菌門霜霉菌屬蕓薹叉梗霜霉菌（PeronosporaparasiticaFr.）引起的一種氣傳病害，屬專性寄生性卵菌病害，該病害是我省大白菜最重要的葉部病害之一,不同生育期均嚴(yán)重發(fā)生，流行重病年份造成大白菜減產(chǎn)50%～60%，導(dǎo)致大白菜品質(zhì)下降、產(chǎn)量降低。參見附錄A。人工接種artificialinoculationscale在適宜條件下，通過(guò)人工操作將接種體置于植物體適當(dāng)部位并使之發(fā)病的過(guò)程。病情級(jí)別diseaserating1DB22/T2024—2014人為定量植物個(gè)體或群體發(fā)病程度的數(shù)值化描述。2.7病情指數(shù)diseaseindex(Dl)通過(guò)對(duì)植物個(gè)體發(fā)病程度（病情級(jí)別）數(shù)值的計(jì)算所獲得的群體發(fā)病程度的數(shù)值化描述形式。3接種體制備3.1采集從田間采集具有典型霜霉病病斑的大白菜病葉，用清水沖洗掉病斑上老的霉層后，置于20℃、濕度（RH)100％的培養(yǎng)箱中，黑暗保濕24h，待長(zhǎng)出灰色霉層后，將病葉浸于水中，用干凈的毛刷將病斑上新產(chǎn)生的孢子囊刷于盛有無(wú)菌水的燒杯中，獲得分離物。分離物經(jīng)形態(tài)學(xué)鑒定確認(rèn)為蕓薹叉梗霜霉菌PeronosporaparasiticaFr.后，直接用于接種或擴(kuò)繁備用。3.2接種體繁殖和制備3.2.1接種體繁殖常用的繁殖方法為：在溫室內(nèi)將霜霉病菌的分離物接種在感病品種上繁殖。3.2.2接種懸浮液制備接種前用干凈毛刷刷取葉片上長(zhǎng)出的新鮮孢子囊于盛有無(wú)菌水的燒杯中，再滴加0.06g/LTween-20，高速攪拌（1200r/min)3min～5min后即得孢子囊懸浮液，用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)稀釋至接種濃度。霜霉病菌孢子囊懸浮液放置時(shí)間最好不超過(guò)30min，從菌液制備到接種完成應(yīng)限制在2h內(nèi)。3.3.1活體植株保存法將霜霉病菌接種到易感霜霉病的大白菜品種葉片上，4d～5d后取發(fā)病葉，置于5%蔗糖液內(nèi)保濕，這種方法可保存霜霉菌30d，可產(chǎn)生大量接種體。病葉存于-20℃條件下，保存60d后孢子囊仍有致病力?？蓪⒋朔ㄅc寄主活體保存交替進(jìn)行。4室內(nèi)抗性鑒定4.1鑒定室人工接種鑒定室應(yīng)具備人工調(diào)節(jié)溫度、濕度及光照的條件，使人工接種后具備良好的發(fā)病環(huán)境。鑒定設(shè)計(jì)2DB22/T2024—2014鑒定材料隨機(jī)排列或順序排列，重復(fù)3次，每一處理10株苗。4.3鑒定對(duì)照材料設(shè)高抗品種為抗病對(duì)照品種，設(shè)當(dāng)?shù)匾赘胁∑贩N為感病對(duì)照品種。4.4鑒定材料育苗4.4.1種子消毒鑒定種子經(jīng)5%次氯酸鈉溶液浸種10min后，清水沖洗，放入墊有兩層濾紙的培養(yǎng)皿中，置于恒溫培養(yǎng)箱中28℃催芽。待胚根長(zhǎng)至0.5cm時(shí)，播種于育苗缽內(nèi)。4.4.2育苗基質(zhì)育苗基質(zhì)為草炭：蛭石：菜田土=2：1：1，經(jīng)134℃高溫蒸汽滅菌30min。4.4.3育苗在日光溫室里育苗，室內(nèi)溫度為20℃～25℃，每缽1苗。4.5接種4.5.1接種時(shí)期大白菜為9～10葉期。4.5.2接種體濃度5×104.5.3接種方法采用噴霧接種法。用小型手持噴霧器，將接種液均勻地噴于大白菜葉片正、反兩面欲下滴為止。3個(gè)孢子囊/mL。將植株置于18℃～20℃鑒定室內(nèi)黑暗保濕（RH為100%)24h，每日天光照14h，不再保濕。接種后管理期間適時(shí)澆水（每五天澆一次水），溫度控制在20℃～24℃范圍內(nèi)。5病情調(diào)查接種后7d調(diào)查病情。5.2病情級(jí)別劃分病情級(jí)別及其相對(duì)應(yīng)的癥狀描述見表1。3DB22/T2024—2014表1大白菜霜霉病病情級(jí)別劃分病情級(jí)別癥狀描述012345無(wú)癥狀病斑面積占葉面積的1/10以下病斑面積占葉面積的1/10～1/4病斑面積占葉面積的1/4～1/2病斑面積占葉面積的1/2～3/4病斑面積占葉面積的3/4，以至干枯5.3調(diào)查方法調(diào)查接種株發(fā)病情況，根據(jù)病害癥狀描述，進(jìn)行調(diào)查，記載單株病情級(jí)別，計(jì)算病情指數(shù)（DI）。病情指數(shù)按公式(1)計(jì)算：?(s×n)DI=×100...................................(1)N×S式中：DI—病情指數(shù)s―各病情級(jí)別代表數(shù)值；n―各病情級(jí)別病株（葉）數(shù)；N一調(diào)查總株（葉）數(shù)；病情指數(shù)（DI）DI=0抗性評(píng)價(jià)免疫（I）高抗（HR）抗?。≧）中抗（MR）感?。⊿）高感（HS）4DB22/T2024—2014當(dāng)感病對(duì)照材料達(dá)到其相應(yīng)感病程度（DI>50），該批次抗霜霉病鑒定視為有效。7鑒定記載表格大白菜霜霉病抗性鑒定結(jié)果記載表格見表3。表3大白菜霜霉病抗性鑒定結(jié)果記載表品種/種質(zhì)重復(fù)病情級(jí)別病情平均病指抗性評(píng)價(jià)編號(hào)來(lái)源名稱區(qū)號(hào)指數(shù)012345ⅠⅡⅢ播種日期接種日期接種生育期調(diào)查日期鑒定技術(shù)負(fù)責(zé)人（簽字）5DB22/T2024—2014AA附錄A（資料性附錄）大白菜霜霉病病原菌的相關(guān)資料A.1分類地位大白菜霜霉病病原菌（PeronosporaparasiticaFr.）屬管毛生物界(Stramenopila)，卵菌門(Oomycota)，卵菌綱（Oomycetes），霜霉目(Peronosporales)，霜霉科（Peronosporaceae），霜霉屬（Peronospora）。A.2形態(tài)描述菌絲體無(wú)色，無(wú)隔，在絲胞間生長(zhǎng)，靠吸器伸入細(xì)胞內(nèi)吸水分和營(yíng)養(yǎng)，吸器為囊狀、球狀或分叉狀。無(wú)性繁殖時(shí)，從菌絲上生出孢囊梗，由氣孔伸出，無(wú)色，無(wú)隔，單生或2～4根束生，長(zhǎng)260μm～300μm，主枝基部稍膨大，重復(fù)的兩叉分枝，頂端2～5次分枝，主軸和分枝呈銳角，頂端的小梗尖銳，彎曲，每端長(zhǎng)一個(gè)孢子囊。孢子囊無(wú)色，單胞，長(zhǎng)圓形至卵圓形，（24～27）μm×（15～20）μm，萌發(fā)時(shí)多從側(cè)面產(chǎn)生芽管，不形成游動(dòng)孢子。卵孢子單胞，球形，黃褐色，直徑30μm～40μm，表面光滑，胞壁厚，表面皺縮或光滑，抗逆性強(qiáng)，條件適宜時(shí)可直接萌生芽管侵染寄主。A.3寄主范圍大白菜霜霉病菌可以侵染大白菜、小白菜、蘿卜、油菜、花椰菜、芥菜等十字花科蔬菜。A.4病害癥狀幼苗受害,子葉正面產(chǎn)生黃綠色斑點(diǎn),葉背面有白色霜狀霉層；成株期發(fā)病,主要為害葉片,最初葉正面出現(xiàn)淡黃色或黃綠色不明顯病斑,后擴(kuò)大變?yōu)辄S褐色病斑,病斑因受葉脈限制呈多角形或不規(guī)則形,葉背密生灰白色霜狀霉層；留種株莖部、花梗發(fā)病呈肥腫彎曲畸形；種莢染病表現(xiàn)黑褐色壞死斑。大白菜霜霉病發(fā)病特性與環(huán)境濕度密切相關(guān)，天氣潮濕時(shí)，葉背面產(chǎn)生白色稀疏的霉層，病斑連片，常造成大白菜葉片變黃枯死，嚴(yán)重影響大白菜包心。低溫多雨、溫度忽高忽低、晝夜溫差大、露水大易發(fā)生霜霉病，而且病害癥狀易發(fā)生變化，為病害正確診斷造成了困難。A.5傳播途徑大白菜霜霉病菌主要由病斑上長(zhǎng)出的孢子囊通過(guò)風(fēng)、雨傳播，從植株的表皮和氣孔侵入，引起發(fā)病。病菌隨病殘?bào)w在土壤中或十字花科蔬菜植株上或冬貯種株的根頭上越冬，有時(shí)還可混在種子中越夏或越冬，次年春季條件適宜時(shí)萌發(fā)侵染幼苗，由春播十字花科蔬菜傳到白菜等秋播十字花科蔬菜上，混在秋播種子上的病菌，播后直接為害幼苗。南方全年種植十字花科蔬菜的地區(qū)，病菌可在寄主上全年傳播為害。A.6大白菜霜霉病發(fā)生規(guī)律6DB22/T2024—2014A.6.1侵染循環(huán)病菌主要以卵孢子隨病殘?bào)w在土壤中越冬，或以休眠菌絲潛伏在白菜留種株組織內(nèi)越冬，也可以卵孢子附著在種子表面或隨病殘?bào)w混雜在種子中越冬。來(lái)年春季，越冬卵孢子萌發(fā)侵染小白菜、白菜、甘藍(lán)、薹菜等，以后再侵染大白菜，引起發(fā)病。秋季大白菜播種越早發(fā)病越重；病毒病流行年份霜霉病也大發(fā)生。A.6.2影響病害發(fā)生發(fā)展的主要因素A.6.2.1溫度菌絲生長(zhǎng)溫度為20℃～24℃，產(chǎn)生孢子囊的適溫為8℃～12℃，孢子囊萌發(fā)適溫為7℃～13℃，侵入寄主的最適溫度為16℃。孢子囊形成、萌發(fā)和侵入均需要較高濕度，最好有水滴存在。孢子囊對(duì)光敏感，不耐干燥。A.6.2.2濕度高濕是孢子囊形成、萌發(fā)和侵染的重要條件，多雨時(shí)病害常嚴(yán)