DB22-T1987-2013-飼料中己烯雌酚的測定液相色譜-質(zhì)譜-質(zhì)譜法-吉林省

ICS65.120B46DB22備案號：吉林省地方標(biāo)準(zhǔn)DB22/T1987—2013飼料中己烯雌酚的測定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法吉林省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布DB22/T1987—2013前言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009和GB/T20001.4—2001給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由吉林省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：吉林省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗院、順德出入境檢驗檢疫局。本標(biāo)準(zhǔn)起草人：劉斌、邵秋榮、史艷宇、王宇、王瀟、王家旭、石金娥、李瀅倩、李媛媛。IDB22/T1987—2013料飼料中己烯雌酚的測定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了飼料中己烯雌酚含量的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于飼料中己烯雌酚含量的測定。本方法檢出限為0.01mg/kg。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB/T20195動物飼料試樣的制備3原理試料用乙腈提取，經(jīng)陰離子固相萃取柱凈化、濃縮后，液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜（HPLC-MS/MS）測定，外標(biāo)法定量。除另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純，實驗用水符合GB/T6682規(guī)定一級水的標(biāo)準(zhǔn)。4.1氫氧化鈉（NaOH）。4.2甲醇(CH3OH)。4.10己烯雌酚（diethylstilbestrol）標(biāo)準(zhǔn)品：C18H20O2，CAS：56-53-1，純度≥99.0%。4.11標(biāo)準(zhǔn)儲備液（1.0mg/mL）：準(zhǔn)確稱取0.0100g己烯雌酚標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇定容至10.0mL。4℃條件下避光保存，可使用1個月。4.12標(biāo)準(zhǔn)工作液：取標(biāo)準(zhǔn)儲備液（4.11）用70%甲醇溶液（4.7）稀釋，配制成濃度依次為0.05mg/L、0.10mg/L、0.20mg/L、0.50mg/L、1.00mg/L的己烯雌酚標(biāo)準(zhǔn)溶液，根據(jù)需要用2.0mL適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液溶解空白樣品濃縮殘渣，配制成相應(yīng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配。4.13弱陰離子交換固相萃取柱：60mg/3mL，或相當(dāng)者。1DB22/T1987—20134.14濾膜：0.22μm，有機相。5儀器和設(shè)備5.1液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀：配有電噴霧（ESI）離子源。5.2離心機：轉(zhuǎn)速≥8000r/min。5.3天平：感量0.0001g。5.4超聲波清洗器：40kHz。5.5固相萃取裝置。5.6氮吹儀。6分析步驟6.1試樣制備選取有代表性飼料樣品至少500g，按GB/T20195制備樣品。6.2提取稱取5g粉碎試樣（精確到0.001g）于50mL離心管中，加入40mL乙腈（4.4），混勻，超聲提取15min，5000r/min離心10min，上清液轉(zhuǎn)移至另一50mL離心管中；殘渣中加入10mL乙腈再次提取，合并兩次提取溶液，40℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，加5mL氫氧化鈉溶液（4.6）溶解殘渣，8000r/min離心5min，取上清液，待凈化。將陰離子固相萃取柱連接于真空固相萃取裝置下，先用2mL甲醇（4.2）、2mL水將柱子活化，將6.2的樣品上清液上柱，流速為1mL/min，依次用1mL氨水溶液(4.8)、0.5mL甲醇以3mL/min的流速淋洗，用4mL甲酸甲醇溶液(4.9)洗脫，流速為1mL/min。收集洗脫液，在40℃下經(jīng)氮氣吹干后，用2mL70%甲醇溶液（4.7）溶解殘渣，過0.22μm濾膜（4.14），供HPLC-MS/MS測定。c）霧化氣：氮氣，0.25MPa；2DB22/T1987—2013f）監(jiān)測離子：母離子m/z267.1，定量子離子m/z251.1，定性子離子m/z237.1；g）駐留時間：0.5s；h）脫溶劑氣、錐孔氣為氮氣，碰撞氣為高純氮氣；使用前應(yīng)調(diào)節(jié)各氣體流量以使質(zhì)譜靈敏度達(dá)到檢測要求；錐孔電壓、碰撞能量等電壓值應(yīng)優(yōu)化至最優(yōu)靈敏度。6.4.3液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測定6.4.3.1定性測定各檢測目標(biāo)化合物以保留時間和兩對離子（定性離子/定量離子）所對應(yīng)的LC-MS/MS色譜峰面積相對豐度進行定性。被測試樣中目標(biāo)化合物的保留時間與標(biāo)準(zhǔn)溶液中目標(biāo)化合物的保留時間一致，同時被測試樣中目標(biāo)化合物的定性離子相對豐度與濃度接近的相同條件下得到的標(biāo)準(zhǔn)溶液譜圖相比，誤差不超過表1規(guī)定的范圍，則可判定樣品中存在對應(yīng)的被測物。表1定性確證時相對離子豐度的最大允許誤差相對離子豐度＞50%±20%20～50%±25%10～20%±30%≤10%±50%允許的相對誤差6.4.3.2定量測定以標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（4.12）濃度對定量離子峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，待測樣液中己烯雌酚的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi)，超過線性范圍則應(yīng)稀釋后再進樣分析，外標(biāo)法定量。在上述色譜條件下，己烯雌酚標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）色譜圖參見附錄A。....................................(1)式中：8精密度8.1重復(fù)性在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的15%。8.2再現(xiàn)性在再現(xiàn)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的15%