DB21-T3286－2020-水質5種磺胺類抗生素的測定固相萃取高效液相色譜-三重四極桿串聯質譜法-遼寧省

ICS13.020.40DB21Z10遼寧省地方標準DB21/T3286—2020水質5種磺胺類抗生素的測定固相萃取/高效液相色譜-三重四極桿串聯質譜法遼寧省市場監(jiān)督管理局發(fā)布DB21/T3286—2020目次前言..............................................................................II1適用范圍.............................................................................12規(guī)范性引用文件.......................................................................13方法原理.............................................................................14干擾和消除...........................................................................15試劑.................................................................................16儀器和設備...........................................................................27樣品.................................................................................28分析步驟.............................................................................39結果計算與表示.......................................................................510精密度和準確度......................................................................611質量保證和質量控制..................................................................712廢物處理............................................................................7附錄A（資料性附錄）方法的精密度和準確度..............................................8DB21/T3286—2020前言本標準按照GB/T1.1—2009《標準化工作導則第1部分：標準的結構和編寫》給出的規(guī)則編寫。本標準附錄A為資料性附錄。本標準由大連市市場監(jiān)督管理局提出。本標準由遼寧省生態(tài)環(huán)境廳歸口。本標準主要起草單位：遼寧省大連生態(tài)環(huán)境監(jiān)測中心。本標準主要起草人：付曉燕、劉蓮蓮、楊碩、楊萌。本標準發(fā)布實施后，任何單位和個人如有問題和意見建議，均可以通過來電和來函等方式進行反饋，我們將及時答復并認真處理，根據實際情況依法進行評估及復審。歸口管理部門通訊地址：遼寧省生態(tài)環(huán)境廳（沈陽市渾南區(qū)雙園路30甲），聯系電話標準起草單位通訊地址：遼寧省大連生態(tài)環(huán)境監(jiān)測中心（遼寧省大連市沙河口區(qū)連山街58號），聯系電話DB21/T3286—2020水質5種磺胺類抗生素的測定固相萃取/高效液相色譜-三重四極桿串聯質譜法警告：實驗中所使用的甲醇、磺胺類抗生素屬于有毒有機物，實驗操作時應避免接觸皮膚和衣物，溶液配制過程應在通風櫥內進行。1適用范圍本標準規(guī)定了測定水中磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶和磺胺甲惡唑等5種磺胺類抗生素的高效液相色譜-三重四極桿串聯質譜法。本標準適用于地表水、地下水、海水、工業(yè)廢水和生活污水中5種磺胺類抗生素的測定。當樣品體積為100ml，濃縮定容至1.0ml，進樣體積為10.0μl時，本方法磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶和磺胺甲惡唑的檢出限分別為0.01μg/L、0.01μg/L、0.01μg/L、0.009μg/L和0.01μg/L，測定下限分別為0.04μg/L、0.04μg/L、0.04μg/L、0.036μg/L和0.04μg/L，測定上限均為100μg/L。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB/T14581水質湖泊和水庫采樣技術指導HJ91.1污水監(jiān)測技術規(guī)范（部分代替HJ/T91污水監(jiān)測技術規(guī)范）HJ/T91地表水和污水監(jiān)測技術規(guī)范HJ493水質樣品的保存和管理技術規(guī)定3水樣經固相萃取后，水中磺胺類抗生素經液相色譜儀分離，用串聯質譜儀在多反應監(jiān)測（MRM）條4當樣品中存在基質干擾時，可通過優(yōu)化色譜條件、稀釋樣品、減少進樣體積以及對樣品進行預處理5DB21/T3286—2020除非另有說明，分析時均使用符合國家標準的優(yōu)級純試劑，實驗用水符合GB/T6682，一級。5.1甲醇（CH3OH）：液相色譜純。5.2甲酸（HCOOH）。5.3甲酸溶液：1+1000（V/V）。量取1.0ml甲酸（5.2）緩慢加入1L實驗用水中，混勻。5.4標準物質5.4.1磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺甲惡唑標準物質：純度≥99%。5.4.2磺胺甲基嘧啶-13C6內標標準物質：純度≥99%。5.5標準溶液5.5.1磺胺類抗生素標準貯備液：ρ=100.0mg/L。準確稱取適量的每種磺胺類標準物質（5.4.1），用甲醇配成100.0mg/L的標準貯備液，或直接購買有證標準溶液，貯備液在0~4℃冷藏避光保存，可穩(wěn)定保存20天，或參照制造商的產品說明保存。5.5.2磺胺類抗生素標準使用液：ρ=1.00mg/L。將磺胺類抗生素標準貯備溶液（5.5.1）用甲醇稀釋至1.0mg/L，現用現配。5.5.3磺胺甲基嘧啶-13C6標準貯備液：ρ=100.0mg/L。C6標準物質（5.4.2），用甲醇（5.1）配成100.0mg/L的標準貯備準確稱取適量的磺胺甲基嘧啶-13液，或直接購買有證標準溶液，貯備液在0~4℃冷藏避光保存或參照制造商的產品說明保存使用。5.5.4磺胺甲基嘧啶-13C6標準使用液：ρ=1.0mg/L。將磺胺甲基嘧啶-C6標準貯備溶液（5.5.3）用甲醇（5.1）稀釋至1.0mg/L，現用現配。135.6氮氣：純度≥99.9%。66.1高效液相色譜/三重四極桿質譜儀：高效液相色譜儀具備梯度洗脫功能；三重四極桿質譜儀配有電噴霧離子化源（ESI）。6.2色譜柱：填料為硅膠基質C18，粒徑1.8μm，柱長100mm，內徑2.1mm，或其他等效色譜柱。6.3固相萃取裝置。6.4濃縮裝置：K-D濃縮器、氮吹儀等性能相當的設備。6.5濾膜：針式有機相過濾器，孔徑0.22μm，直徑13mm，玻璃纖維、親水性聚丙烯、親水性聚四氟乙烯（PTFE）或其它等效材質。6.6固相萃取柱：填料為二乙烯苯和N-乙烯基吡咯烷酮共聚物或同等柱效的萃取柱，規(guī)格為6ml/500mg。7DB21/T3286—2020按照GB/T14581、HJ91.1、HJ/T91、HJ/T164、HJ442和HJ493的相關規(guī)定進行樣品的采集和保存。采集樣品時，向采樣瓶（6.8）中加入甲酸（5.2）500μl，然后采集樣品至滿瓶，擰緊螺旋蓋密封，搖勻。水樣0~4℃冷藏避光保存，48h內完成分析。7.2試樣制備活化：用10ml甲醇（5.1）活化固相萃取柱，保證固相萃取柱柱頭浸潤。再用10ml實驗用水活化固相萃取柱，保證固相萃取柱柱頭浸潤。上樣：水樣上樣前放置至室溫，準確量取100ml水樣，水樣以3~5ml/min的流速通過固相萃取柱。淋洗：用10ml實驗用水淋洗固相萃取柱，將在固相萃取柱上保留較弱的雜質淋洗下來，棄去淋洗液。洗脫：用10ml甲醇（5.1）洗脫富集后的固相萃取柱，并用接收管接收甲醇洗脫液。濃縮：將上述提取溶液濃縮至低于1.0ml近干，加甲酸溶液（5.3）定容到1.0ml，最后加入內標使用液10.0μl，經0.22μm濾膜（6.5）過濾，置于棕色樣品瓶（6.7）中，待測定。7.3空白試樣的制備用實驗用水代替樣品按照試樣制備（7.2）相同操作步驟，制備空白試樣。8分析步驟柱溫：40℃；表1液相色譜流動相線性梯度洗脫程序DB21/T3286—2020正離子模式（ESI）；+離子化電壓：3000V；離子源溫度：120℃；檢測方式：MRM，多反應監(jiān)測條件見表2。表2目標化合物的多反應監(jiān)測條件目標化合物磺胺嘧啶檢測離子對（m/z）駐留時間（ms）錐孔電壓（V）碰撞電壓（V）251.0→92.0*20251.0→156.03015281628152815302030265.1→156.120265.1→108.1*磺胺甲基嘧啶磺胺二甲嘧啶磺胺間甲氧嘧啶磺胺甲惡唑353030279.1→92.2*20279.1→186.1281.1→92.1*20281.1→156.1254.0→92.2*20254.0→156.23035磺胺甲基嘧啶-13C6271.0→162.0*2028注：帶*的為定量離子對校準8.2取一定量磺胺類抗生素標準使用液（5.5.2）于甲酸（5.3）水溶液中，制備至少5個濃度點的標準系列，磺胺類抗生素的質量濃度分別為4.0μg/L、10.0μg/L、20.0μg/L、50.0μg/L和100μg/L，每毫升標準系列溶液中加入10.0μl內標使用液（5.5.4），貯存在棕色樣品瓶（6.7）中。將標準系列溶液按濃度由低到高的順序依次進樣，以標準系列溶液中磺胺類抗生素的質量濃度為橫坐標，磺胺類抗生素的峰面積（或峰高）與內標物的峰面積（或峰高）比值和內標物濃度的乘積為縱坐標，繪制校準曲線。DB21/T3286—2020圖1磺胺類抗生素和內標物的總離子流圖（注：1：磺胺嘧啶、2：磺胺甲基嘧啶、3：磺胺甲基嘧啶-C6、4：磺胺二甲嘧啶、5：磺胺間甲氧嘧13啶、6：磺胺甲惡唑）8.3測定按照與校準曲線的建立（8.1）相同的參考條件，進樣10μl，進行試樣（7.2）的測定。注：若樣品中磺胺類抗生素濃度過高，超出校準曲線范圍，應稀釋后測定，采用甲酸（5.3）水溶液進行稀釋。按照與校準曲線的建立（8.1）相同的參考條件，進樣10μl，進行空白試樣（7.3）的測定。9按照表2中確定的母離子和子離子進行檢測，在相同實驗條件下，試樣中磺胺類抗生素的保留時間與標準樣品中磺胺類抗生素的保留時間相對偏差的絕對值應小于2.5%；且待測樣品中定性離子的相對豐度（Ksam）與濃度接近的標準溶液中對應的定性離子相對豐度（Kstd）進行比較，所得偏差在表3規(guī)定的最大允許偏差范圍內，則可判定為樣品中存在磺胺類抗生素。A=2×100%...........................................（1）DB21/T3286—2020A1——樣品中磺胺類抗生素定量離子的峰面積（或峰高）。AKstd=std2×100%..........................................（2）Astd1式中：Kstd——標準樣品中磺胺類抗生素定性離子的相對豐度，%；Astd2——標準樣品中磺胺類抗生素定性離子的峰面積（或峰高）；Astd1——標準樣品中磺胺類抗生素酸定量離子的峰面積（或峰高）。表3定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差KstdK相對于K的最大允許偏差samstdKstd＞5020＜Kstd≤5010＜Kstd≤20Kstd≤1020%25%30%50%9.2定量分析當磺胺類抗生素采用標準曲線法進行定量時，樣品中磺胺類抗生素的質量濃度ρx按公式（3）計算：1Vρ1——計算磺胺類抗生素的峰面積（或峰高）與內標物的峰面積（或峰高）比值和內標物濃度的D——樣品稀釋倍數。當測定結果小于1mg/L時，保留至小數點后三位；當測定結果大于或等于1mg/L時，保留三位有效數字。3家實驗室分別對磺胺類抗生素的加標濃度為0.050μg/L和0.500μg/L的地表水、廢水和海水進DB21/T3286—2020地表水實驗室內相對標準偏差分別在5.9%~10%、4.3%~12%之間，實驗室間相對標準偏差分別在1.5%~4.2%、0.6%~1.6%之間，重復性限分別在0.009μg/L~0.011μg/L、0.065μg/L~0.078μg/L之間，再現性限分別在0.009μg/L~0.012μg/L、0.065μg/L~0.078μg/L之間。廢水實驗室內相對標準偏差分別在5.0%~10%、3.4%~8.4%之間，實驗室間相對標準偏差分別在1.3%~4.5%、0.7%~2.9%之間，重復性限分別在0.009μg/L~0.011μg/L、0.066μg/L~0.077μg/L之間，再現性限分別在0.010μg/L~0.011μg/L、0.066μg/L~0.077μg/L之間。海水實驗室內相對標準偏差分別在5.1%~10%、4.3%~7.4%之間，實驗室間相對標準偏差分別在0.6%~4.1%、0.3%~1.3%之間，重復性限分別在0.008μg/L~0.0010μg/L、0.070μg/L~0.079μg/L之間，再現性限分別在0.008μg/L~0.010μg/L、0.071μg/L~0.079μg/L之間，具體見附錄A中表A.1。10.2準確度3家實驗室分別對磺胺類抗生素的加標濃度為0.050μg/L和0.500μg/L的地表水、廢水和海水進行了6次重復測定，其中地表水加標回收率范圍在80.2%~87.3%、86.8%-90.7%之間；廢水加標回收率范圍在79.1%~87.9%、84.1%-93.8%之間；海水加標回收率范圍在81.8%~87.9%、88.2%-92.1%之間，具體見附錄A中表A.2。11質量保證和質量控制校準曲線的相關系數r≥0.995，否則應重新繪制校準曲線；每批樣品（≤20個）應測定一個曲線中每批樣品應至少測定10%的平行雙樣，樣品數量少于10個時，應至少測定一個平行雙樣，平行雙樣每批樣品應至少測定5%的基體加標樣品，樣品數量少于20個時，應至少測定一個基體加標樣品，加實驗過程中產生的廢液和廢物應分類收集和保管，委托有資質的單位進行處理。DB21/T3286—2020附錄A（資料性附錄）方法的精密度和準確度三家實驗室分別對2種不同濃度的樣品進行了測定。精密度和準確度結果見表A.1和表A.2。表A.1方法的精密度精密度統(tǒng)計結果實驗室內相對標準偏差（%）實驗室間加標濃度重復性限r（μg/L）再現性限樣品類型化合物名稱相對標準偏差（μg/L）R（μg/L）（%）0.0500.5000.0500.5000.0500.5000.0500.5000.0500.5000.0500.5000.0500.5000.0500.5000.0500.5000.0500.5000.0500.5000.0500.5000.0500.5000.0500.5006.5~104.6~5.76.7~103.60.73.90.84.21.31.50.64.01.62.72.61.32.93.01.74.50.71.81.03.70.33.61.14.10.61.60.60.0090.0650.0100.0780.0110.0730.0090.0660.0090.0740.0100.0760.0100.0770.0100.0690.0090.0770.0110.0660.0090.0730.0090.0770.0080.0710.0090.0790.0090.0650.0100.0780.0120.0730.0090.0660.0100.0740.0100.0770.0100.0790.0100.0690.0100.0770.0110.0660.0090.0730.0090.0770.0080.0710.0090.079磺胺嘧啶磺胺甲基嘧啶磺胺二甲嘧啶5.7~7.27.8~12地表水5.2~6.35.9~9.64.3~5.86.2~9.85.5~6.77.2~9.53.4~7.25.1~9.63.5~8.45.8~10磺胺對甲氧嘧啶廢水海水DB21/T3286—20200.0500.5006.0~104.11.30.0100.0100.070磺胺甲惡唑4.9~6.