【信得科技】2025豬腹瀉病防控手冊(cè)

豬腹瀉病綜合SHANDONGSINDERTEP信得科技集團(tuán)成立于1999年，歷經(jīng)二十余年在動(dòng)保業(yè)的深耕，現(xiàn)已發(fā)展成為國(guó)內(nèi)集獸用化藥、中苗、診斷試劑、規(guī)?；B(yǎng)殖管理、蛋雞產(chǎn)業(yè)生態(tài)服務(wù)、動(dòng)物糞污有機(jī)肥、寵物功能食品等產(chǎn)品的國(guó)家級(jí)高新技術(shù)企業(yè)。公司旗下有17家控股、參股子公司(北京信得威特科技有限公司、青島信得藥業(yè)有限公司、山東信得動(dòng)物疫苗有限公司、四川華西動(dòng)物藥業(yè)有限公司、山東泰可豐生物科技有限公司、山東信達(dá)基因科技有限公術(shù)服務(wù)有限公司、得翔、信成等)?，F(xiàn)有員工1600余人，十年以上資深員工400余名，占集團(tuán)員工總數(shù)的25%。公司擁有國(guó)家認(rèn)定企業(yè)技術(shù)中心、博士后科研工作站2個(gè)國(guó)家級(jí)科研平臺(tái)；擁有山東省畜禽心、山東省生物制藥工程實(shí)驗(yàn)室、山東省院士工作站等10個(gè)省級(jí)科研技術(shù)創(chuàng)新平臺(tái)，是全國(guó)一，山東省獸藥產(chǎn)業(yè)技術(shù)創(chuàng)新聯(lián)盟理事長(zhǎng)單位，山東省獸藥協(xié)會(huì)會(huì)長(zhǎng)單位。迄今為止，公司主持或參與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)20項(xiàng)，榮獲各級(jí)科技進(jìn)步獎(jiǎng)18項(xiàng)，新獸藥證書(shū)19項(xiàng)，獲得各項(xiàng)發(fā)明專利28項(xiàng)、實(shí)用新型專利、外觀專利等共61項(xiàng)，承擔(dān)863計(jì)劃等各級(jí)科研項(xiàng)目57項(xiàng)。1豬腹瀉病綜合防控手冊(cè)SINDER信得 1一、豬腹瀉病的病原學(xué) 22.PEDV的病原學(xué) 2 9 5.其他導(dǎo)致腹瀉的病原學(xué)簡(jiǎn)介 二、豬腹瀉病的流行病學(xué) 2.豬輪狀病毒的流行病學(xué) 三、豬腹瀉病的監(jiān)測(cè)與診斷1.豬腹瀉病的臨床檢測(cè) 2.PEDV和輪狀病毒的分離鑒定 3.PEDV和輪狀病毒病原診斷方法 4.豬病毒性腹瀉的監(jiān)測(cè)預(yù)警 5.對(duì)疫苗的免疫效果的評(píng)估 四、豬腹瀉病的疫苗及研發(fā)進(jìn)展1.商品化弱毒疫苗 232.商品化滅活疫苗 233.亞單位疫苗 4.載體類疫苗 24 24 24豬腹瀉病綜合防控手冊(cè)SINDER信得2五、豬流行性腹瀉病的防控策略1.豬病毒性腹瀉防控關(guān)鍵點(diǎn) 26 263.后備母豬馴化關(guān)鍵點(diǎn) 284.PED馴化流程 295.PED發(fā)病場(chǎng)生物安全防控 306.發(fā)病豬場(chǎng)的處置措施 32六、豬輪狀病毒的防控策略 32.輪狀病毒發(fā)病場(chǎng)處置方案 343.輪狀病毒發(fā)病場(chǎng)生物安全 34七、大腸桿菌的防控策略 2.大腸桿菌誘因管理 3.大腸桿菌免疫方案 4.大腸桿菌發(fā)病場(chǎng)治療方案 36八、豬腹瀉病常見(jiàn)問(wèn)題解答1豬腹瀉病綜合防控手冊(cè)SINDER信得仔豬的腸道未發(fā)育完全，自身抵抗力弱，易受各種病原微生物的感染，其中以傳染性腹瀉病原感染導(dǎo)致死亡的損失最大。引起仔豬腹瀉的傳病原既有細(xì)菌性的，也有病毒性的。其中導(dǎo)致病毒性的病原gastroenteritisvirus,TGEV)、豬 豬流行性腹瀉(Porcineepidemicdiarrhea,PED)是由PEDV引起的一種以嘔吐，水樣腹瀉和脫水為主要特征的急性、高度接觸性傳染病。各年齡段豬對(duì)該病毒均易感，7日齡以內(nèi)的哺乳仔豬癥狀最為嚴(yán)重，感染致死率高達(dá)90%-100%,給養(yǎng)豬業(yè)造成了極大的經(jīng)濟(jì)損失。該病自被發(fā)現(xiàn)以來(lái)，長(zhǎng)期影響著養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展。2010年，我國(guó)乃至世界范圍內(nèi)均爆發(fā)大規(guī)模PEDV疫情，研究顯示，與傳統(tǒng)毒株CV777相比，流行毒株發(fā)生了較大的變異，尤其是S基因產(chǎn)生了較大的變異。中國(guó)在使用了GⅡb亞支目前該病仍主要依賴免疫母豬產(chǎn)生的母源抗體對(duì)哺乳仔豬進(jìn)行被動(dòng)保護(hù)，而疫苗免疫僅僅是其中一環(huán)，本手冊(cè)將從病原學(xué)、流行病學(xué)、疾病診斷檢測(cè)、疫苗及制劑和防控策略等多個(gè)維度為您梳理近年來(lái)2豬腹瀉病綜合防控手冊(cè)SINDER豬腹瀉病綜合防控手冊(cè)SINDER病毒和細(xì)菌是均可導(dǎo)致豬群出現(xiàn)腹瀉的癥狀。常見(jiàn)的病毒性病原有豬流行性腹瀉病毒(PEDV)、豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)、豬輪狀病毒(PoRV)、丁型冠狀病毒(PDCoV)、豬急性腹瀉綜合征冠狀病毒(SADS-CoV)、杯狀病毒(SV)、豬捷申病毒(PTV),其分類地位及流行現(xiàn)狀如表病毒(Norovirus,NV)、豬腸道病毒(Entervirus)、博卡病毒(Bocavirus)、豬峭病毒(Kobuvirus,PKV)、星狀病毒(Astrovirus,PAstVAV)和呼腸弧病毒(MammalianReavirus)等也能導(dǎo)致豬腹瀉但表1主要豬病毒性腹瀉病原的種類1α冠狀病毒屬<10日齡2α冠狀病毒屬3豬輪狀病毒(PoRV)4δ冠狀病毒10日齡左右5狀病毒(SADS-CoV)α冠狀病毒屬<10日齡6杯狀病毒(SV)札如病毒屬7豬捷申病毒(PTV)細(xì)菌和寄生蟲(chóng)也能導(dǎo)致豬出現(xiàn)腹瀉癥狀。到導(dǎo)致腹瀉的細(xì)菌性病原有致病性大腸桿菌、梭菌、沙門(mén)氏菌、胞內(nèi)勞森菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌、痢疾密螺旋體、彎曲桿菌等。寄生蟲(chóng)如仔豬胞屬球蟲(chóng)、隱胞子蟲(chóng)、蛔蟲(chóng)、豬胃線蟲(chóng)、弓形蟲(chóng)、豬類圓線蟲(chóng)、小袋纖毛蟲(chóng)也能導(dǎo)致豬出現(xiàn)腹瀉癥狀。需要特別指出的是，病毒性腹瀉往往會(huì)損傷消化道細(xì)胞，進(jìn)而為細(xì)菌的定植創(chuàng)造條件，此外由于小腸絨毛在哺乳期更新速度較慢，如遭到破壞將嚴(yán)重影響仔豬對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收，因此應(yīng)優(yōu)先防控病毒性腹瀉的感染，其中對(duì)PEDV和輪狀病毒的防控尤其需要重視。PEDV和輪狀病毒感染后常容易繼發(fā)大腸桿菌病，因此以上三種2.1分類地位1971年，英國(guó)某豬場(chǎng)發(fā)生了嚴(yán)重的腹瀉；此后幾年，歐洲的多個(gè)國(guó)家相繼發(fā)生了嚴(yán)重的腹瀉疫情。PEDV首次被證實(shí)于1978年，比利時(shí)科學(xué)家收集了幾份腹瀉的仔豬樣品，并在顯微鏡中發(fā)現(xiàn)了一株具有典型冠狀病毒特征的病毒，將其命名為CV777。后來(lái)科學(xué)家研究發(fā)現(xiàn)這株病毒并不是由已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的豬傳3隨后我國(guó)各地均發(fā)生了嚴(yán)重的腹瀉疫情。我國(guó)學(xué)者對(duì)PEDV進(jìn)行分離測(cè)序，與經(jīng)典PEDV毒株進(jìn)行對(duì)比分析發(fā)現(xiàn)，我國(guó)新流行的PEDV毒株發(fā)生了明顯的變異，主要毒力基因S基因出現(xiàn)了插入、缺失和突變。經(jīng)過(guò)遺傳進(jìn)化分析，PEDV變異株為新出現(xiàn)的GⅡ群，與傳統(tǒng)毒株CV777 (GI群)等親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。豬流行性腹瀉病毒被病毒分類委員會(huì)(TheInternationalCommitteeonTaxonomyofViruses,ITCV)歸類于套式病毒目(Nidovirales)、冠狀病毒科(Coronaviridae)、冠狀病毒屬(Coronavirus)。冠狀病毒屬(Coronavirus)總共被分為4個(gè)亞群：α-冠狀病毒(Alphacoronavirus),β-冠狀病毒(Betacoronavirus),γ-冠狀病毒(Gammacoronavirus)和δ-冠狀病毒(Deltacoronavirus)。PEDV屬于α-冠狀病毒，而冠狀病毒四個(gè)亞群分類見(jiàn)表2。表2冠狀病毒種類冠狀病毒屬PEDV、TGEV、HCoV-229E、PRCβ-冠狀病毒IBV、SW1、TCoV等2.2.PEDV的理化特性為：①熱穩(wěn)定性差，經(jīng)60℃或60℃以上為：①熱穩(wěn)定性差，經(jīng)60℃或60℃以上感，如：過(guò)氧乙酸(1:500)、二氯異氰脲酸鈉(1:1000)、脂質(zhì)溶劑如戊二醛(1:1%氫氧化鈉(燒堿)等，皆可使PEDV失去感染力；④糞便中存活力強(qiáng)(見(jiàn)表3),N蛋白E蛋白4表3PEDV在糞便中不同條件下存活時(shí)間存活時(shí)間≥28天14-28天10分鐘(75%滅活)30分鐘10分鐘9個(gè)月PEDV基因組約為28kb左右，擁有5'端帽子結(jié)構(gòu)和3'端尾巴結(jié)構(gòu)，基因組含有九個(gè)基因：兩個(gè)非翻譯區(qū)(untranslatedregion,UTR)、兩個(gè)多聚蛋白、纖突蛋白(Spike,S)、小膜蛋白(Envelope,E)、膜糖蛋白(Membrane,M)、核衣殼蛋白(Nucleoprotein,N)以及一個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白(ORF3)。其中兩個(gè)多聚蛋白ppla和pp1b,可在蛋白酶的切割作用下分解為16個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白(NSP1-NSP16),功能如表4所示。PEDV的基因組從5端到3端依次為：5'UTR-ppla/pp1b-S基因-ORF3-E基因-M基因-N基因-3'UTR,基因組結(jié)構(gòu)如圖2所示，結(jié)構(gòu)蛋白功能如表5所示。PEDV的5′端及3'端的非翻譯區(qū)在UTR的ORF中存在著頸環(huán)的結(jié)構(gòu)，是冠狀病毒基因表達(dá)或復(fù)制轉(zhuǎn)錄調(diào)控所必需的。NonstructuralgenesMERdRpHELExoNEndoUN7-MTase圖2PEDV的基因組結(jié)構(gòu)35抑制宿主蛋白的合成，引起宿主mRNA的衰與病毒在細(xì)胞內(nèi)的增殖有關(guān)，影響病毒的蛋白質(zhì)表達(dá)。病毒的的木瓜樣蛋白酶(PLP),具有去泛素化酶(DUB)活性，可以識(shí)別NSP1/2,NSP2/3和NSP3/4之間NSP1、NSP2和NSP3,從而有利于病毒的復(fù)制，也可以調(diào)先天性免疫應(yīng)答。屬于3C樣蛋白酶，主要參與冠狀病毒蛋白的切NSP16切割釋放，與病毒各個(gè)階段的復(fù)制有關(guān)并在病毒的期中發(fā)揮作用。激活omegasome通路使內(nèi)質(zhì)網(wǎng)產(chǎn)生自噬體，提高內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的Ptdlns3P水平，直接或間接通過(guò)MTOR信號(hào)通路的制自噬體的擴(kuò)張。具有拮抗I型IFN啟動(dòng)子活性和應(yīng)答的功能。參與nsp12基因的合成，實(shí)現(xiàn)病毒基因組的完全轉(zhuǎn)錄和復(fù)程中發(fā)揮了重要作用。目前功能尚未發(fā)現(xiàn)。是PEDV的RNA依賴的RNA聚合酶，N轉(zhuǎn)錄復(fù)合體的中心酶。DNA和RNA。主要編碼具有尿苷酸活性的特異性核糖核酸加工過(guò)程中發(fā)揮作用。主要編碼S-腺苷甲硫氨酸依賴型核苷-2-O′甲基轉(zhuǎn)移酶。是PEDV基因組中的輔助蛋白，是一個(gè)能提高病毒增殖能力的離子通道蛋白，可以促進(jìn)囊泡的形成及病毒的增殖。豬腹瀉病綜合防控手冊(cè)SINDER信得6編碼蛋白E編碼PEDV的跨膜蛋白，主要參與病毒蛋白的搬運(yùn)M編碼病毒的膜糖蛋白，蛋白上含有3個(gè)跨膜N編碼PEDV的核衣殼蛋白，具有磷酸化功能，2.4.PEDV的致病機(jī)理隨著體液的流動(dòng)，主要聚集在小腸的上皮細(xì)胞，病毒進(jìn)入細(xì)胞后不斷進(jìn)行增殖，并向周圍健康組織擴(kuò)散，直至小腸全部病變，小腸絨毛變短或者脫落，造成吸收表面積大幅度減少，從而導(dǎo)致消化不良，同時(shí)大量小分子物質(zhì)在腸細(xì)胞表面堆積造成表面滲透壓升高，從而引起滲透性腹瀉，最終機(jī)體衰竭死亡。由于成年豬的小腸絨毛2-4天可更新一代，但乳豬-絨毛更新需要7-10天，PEDV在早期感染會(huì)導(dǎo)致仔豬小腸變薄，影響對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收，因此PEDV發(fā)病日齡越早，造成的損失越大(見(jiàn)圖3)。Penpheralbhoodvess7豬腹瀉病綜合防控手冊(cè)SINDER豬腹瀉病綜合防控手冊(cè)SINDERPEDV感染后也會(huì)引起母豬流產(chǎn)，對(duì)妊娠后0-40天的母豬影響極大。根據(jù)溫氏大華農(nóng)的研究數(shù)據(jù)，PEDV感染后會(huì)導(dǎo)致母豬分娩率降低、返情率升高、流產(chǎn)率升高等臨床表現(xiàn)，其次母豬的泌乳減少甚至停止回乳，情期紊亂，平均會(huì)耽誤1個(gè)發(fā)情周期(見(jiàn)表6)。胰島素生長(zhǎng)因子及瘦素起到維持孕期穩(wěn)定并抑制排卵的作用。PEDV的感染影響可能造成孕激素變化進(jìn)而(3)營(yíng)養(yǎng)不良；PEDV感染后，病毒在腸絨毛上皮細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，腸絨毛萎縮；小腸酶吸收能力的降低造成吸收不良型腹瀉，導(dǎo)致妊娠失敗或胚胎/胎兒死亡。2.5.PED的臨床癥狀及病理變化PEDV可以感染各個(gè)日齡段的豬只，日齡越小的豬只臨床癥狀越嚴(yán)重。PEDV的自然感染潛伏期一般為5~8天，人工感染潛伏期為10~30小時(shí)。仔豬PED發(fā)病后，2小時(shí)開(kāi)始精神沉郁，食欲不振，4小時(shí)左右開(kāi)始出現(xiàn)吐奶癥狀，6小時(shí)左右出現(xiàn)腹瀉癥狀，12小時(shí)左右癥狀加劇，出現(xiàn)脫水癥狀，24小時(shí)左右出現(xiàn)水樣腹瀉，脫水嚴(yán)重，仔豬頻死，36小時(shí)左右仔豬開(kāi)始死亡，若仔豬耐過(guò)，則會(huì)在72小時(shí)左右出現(xiàn)細(xì)菌性繼發(fā)感染，需要輔助以抗生素治療，病程如圖4所示。PED產(chǎn)房發(fā)病非常急，并迅速擴(kuò)散至8PED免疫較好的場(chǎng)區(qū)，在產(chǎn)房有母源抗體的保護(hù)，仔豬感染后不會(huì)發(fā)病，但是會(huì)體內(nèi)帶毒，仔豬轉(zhuǎn)至下游保育段，受到環(huán)境應(yīng)激的影響，會(huì)表現(xiàn)出不食、腹瀉及脫水的癥狀，如圖5所示。生長(zhǎng)段的豬感染一般不會(huì)導(dǎo)致死亡，但是會(huì)損傷腸道，引起腸絨毛損傷，嚴(yán)重者會(huì)導(dǎo)致細(xì)菌的繼發(fā)感染，造成持續(xù)性腹瀉，影響生產(chǎn)成績(jī)。圖5保育豬感染PED臨床癥狀及剖檢圖片2.5.2PED臨床感染癥狀PEDV感染后可引起豬只腹瀉、嘔吐和脫水等癥狀，感染率可達(dá)90-100%。通常來(lái)說(shuō)，危害最大的是一周齡內(nèi)的仔豬，仔豬感染后，精神狀態(tài)較差，畏寒，缺少食欲，常常伴隨嚴(yán)重的嘔吐及脫水，最嚴(yán)重的癥狀是腹瀉。其他年齡段豬只感染后出現(xiàn)腹瀉，但可以恢復(fù)正常(見(jiàn)圖6)。9圖6仔豬感染癥狀深度的比值降低(見(jiàn)圖7)。圖7腸道組織學(xué)切片3.輪狀病毒的病原學(xué)3.1輪狀病毒結(jié)構(gòu)及分類地位豬腹瀉病綜合防控手冊(cè)SINDER信得表7輪狀病毒基因及功能核蛋白，刺激病毒的RNA復(fù)制甲基轉(zhuǎn)移酶內(nèi)衣殼蛋白其病毒粒子由外至內(nèi)為三層結(jié)構(gòu)，最外層為VP7蛋白和VP4蛋白，下層為VP6蛋白，最內(nèi)層為VP2、VP1和VP3錨定在VP2蛋白內(nèi)側(cè)，在病毒復(fù)制發(fā)揮作用(見(jiàn)圖8)。VP7蛋白上含有病毒的主要中和表位區(qū)，VP4蛋白上含有血凝素抗原，VP6蛋白在病毒粒子中占比超過(guò)50%,是最豐富的抗原，通過(guò)序列對(duì)比分析VP6基因確定病毒的基因型，核苷酸同源性>53%的毒株為同一基因型，共劃分為10種輪狀病毒(A-J)。根據(jù)VP4和VP7的基因還可以把輪狀病毒進(jìn)一步分成37個(gè)P型和27個(gè)G型，臨床上毒株以G型命名的較為普遍，但需要指出的是即使是同一種G型，差異也可能會(huì)很大。圖8輪狀病毒的病毒粒子結(jié)構(gòu)豬腹瀉病綜合防控手冊(cè)SINDER信得輪狀病毒不同基因型差異較大的一個(gè)原因是其基因組由11個(gè)獨(dú)立的雙鏈RNA片段組成(見(jiàn)圖9),即基因組RNA是11段不連續(xù)的RNA,在復(fù)制時(shí)11個(gè)RNA片段分別復(fù)制，與禽流感病毒類似，這種分圖9輪狀病毒的病毒的RNA分11個(gè)節(jié)段3.2輪狀病毒的理化性質(zhì)輪狀病毒的理化性質(zhì)較為穩(wěn)定，對(duì)環(huán)境因素如溫度、pH變化等具有較強(qiáng)的抵抗力。存在于病豬所排糞便中的病毒可在室溫下存活3個(gè)月，60℃時(shí)仍可存活30min。由于沒(méi)有囊膜，輪狀病毒對(duì)化學(xué)類消毒劑抵抗能力很強(qiáng)，對(duì)次氯酸鹽，乙醚，氯仿等均具有一定的抵抗力，因此在豬場(chǎng)中很難徹底清除豬的3.3輪狀病毒的致病機(jī)理PoRV經(jīng)口鼻感染動(dòng)物機(jī)體，由于能抵抗蛋白分解酶和胃酸的作用，所以能順利通過(guò)胃而到達(dá)小腸，經(jīng)胰蛋白酶激活而感染小腸絨毛頂部上皮，在其中增殖并使之發(fā)生變要在小腸上皮細(xì)胞中復(fù)制，外衣殼蛋白VP4通過(guò)與唾液酸相互作用，與易感細(xì)胞結(jié)合，進(jìn)入細(xì)胞破壞腸絨毛，導(dǎo)致液體吸收不足，造成吸收不良性腹瀉。此外，病毒NSP4基因也會(huì)破壞細(xì)胞內(nèi)鈣離子通道，導(dǎo)致氯離子外流，引起分泌性腹瀉(如圖10所示)。Neurotransmitters實(shí)驗(yàn)證明，感染后小豬的小腸絨毛上皮細(xì)胞的功能發(fā)生了改變，如葡萄糖偶聯(lián)的鈉轉(zhuǎn)運(yùn)破壞，雙糖酶的活性降低，胸腺嘧啶激酶活性增加等，這些病理生理變化均會(huì)促進(jìn)吸收不良性腹瀉的發(fā)生，加重輪豬腹瀉病綜合防控手冊(cè)SINDER信得體外研究表明，豬輪狀病毒與致病性大腸桿菌混和感染時(shí)，由于二者在致病過(guò)程更多毒素進(jìn)入細(xì)胞，導(dǎo)致細(xì)菌和毒素吸收增加，以致于輪狀病毒與產(chǎn)腸毒素大腸桿菌混合感染可引起敗血癥，所造成的危害要遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于二者之和，斷奶仔豬單獨(dú)接種輪狀病毒或β產(chǎn)腸毒素大腸桿菌可能會(huì)導(dǎo)致短暫的腹瀉或幾乎不產(chǎn)生腹瀉，然而，先接種β產(chǎn)腸毒素大腸桿菌，然后再接種輪狀病毒，就會(huì)使β3.4輪狀病毒的臨床癥狀輪狀病毒可感染各日齡段豬只，病變主要限于消化道。發(fā)病早期精神委頓，常瀉，糞便水樣或糊狀，色黃白或暗黑，腹瀉越久，脫水越明顯，體重因此可減輕30%,有時(shí)小腸廣泛出血，腸系膜淋巴結(jié)腫大。自然感染潛伏期一般為1~4天，7日齡以內(nèi)仔豬感染腹瀉持續(xù)時(shí)間久，死亡率低于10%。7日齡以上仔豬癥狀較輕，多為亞臨床感染，豬只大于40日齡后，一般不表現(xiàn)明顯的癥狀。豬場(chǎng)感染輪狀病毒后，病原會(huì)長(zhǎng)期存在，母豬感染后，體內(nèi)會(huì)產(chǎn)生抗體，此時(shí)小源抗體的保護(hù)，不會(huì)產(chǎn)生明顯癥狀，當(dāng)仔豬14日齡至斷奶前后，母源抗體降低，豬只會(huì)出現(xiàn)腹瀉癥狀。若仔豬發(fā)病日齡較晚，此時(shí)不會(huì)表現(xiàn)出典型的的水樣腹瀉，多表現(xiàn)出牙膏狀的腹瀉，往往會(huì)認(rèn)為是換料導(dǎo)致的應(yīng)激而忽略掉，輪狀對(duì)大日齡的仔豬影響較低，但是會(huì)損傷仔豬腸道，加重?cái)嗄毯蟮募?xì)菌性繼發(fā)4.1大腸桿菌的分類地位大腸桿菌屬于革蘭氏陰性短桿菌，長(zhǎng)1-3微米、寬0.4-0.7微米，有莢膜或微莢膜結(jié)構(gòu)，無(wú)芽孢。以周身菌毛粘附，以鞭毛運(yùn)動(dòng)，需氧或兼性厭氧。大腸桿菌可通過(guò)毒力因子劃分為產(chǎn)腸毒素大腸桿菌 (ETEC)、腸道致病性大腸桿菌(EPEC)和產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌(STEC)等，如表8所示。表8豬源大腸桿菌主要疾病斷奶仔豬腹瀉/Eae(緊密黏附素)//Eae(緊密黏附素)敗血病/多發(fā)性漿膜炎豬腹瀉病綜合防控手冊(cè)SINDER信得4.2大腸桿菌的致病機(jī)理內(nèi)毒素是革蘭陰性菌細(xì)胞壁外膜上的一種脂多糖(LPS)和微量蛋白質(zhì)的復(fù)合物，LPS是細(xì)菌的主要抗原及致病性部分。LPS是細(xì)菌死亡或解體后才釋放出來(lái)的一種具有廣泛生物活性的細(xì)菌結(jié)構(gòu)成分。腸黏膜功能正常時(shí)，內(nèi)毒素不會(huì)引起損傷，還會(huì)增強(qiáng)機(jī)體的特異性和非特異性免疫力。腸道菌群失調(diào)的情況下，腸道內(nèi)的致病菌，特別是腸道內(nèi)的致病菌革蘭陰性菌就會(huì)大量生長(zhǎng)、繁殖并釋放大可引起腸源性內(nèi)毒素移位。大量?jī)?nèi)毒素進(jìn)入血液循環(huán)，可激活巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞IL-8、IL-12等細(xì)胞因子、黏附分子及NO等炎癥介質(zhì)和溶菌酶的釋放及ROS的生成，嚴(yán)重者可導(dǎo)大腸桿菌引起的腹瀉致病機(jī)理與病毒性腹瀉總結(jié)如表9。表9大腸桿菌引起的腹瀉與病毒性腹瀉致病機(jī)理的差異產(chǎn)腸毒素大腸桿菌(ETEC)特異性受體結(jié)合，破壞腸上皮細(xì)胞膜的功能和液腸道致病性大腸桿菌(EPEC)4.3大腸桿菌病臨床癥狀和危害產(chǎn)腸毒素大腸桿菌主要引起分泌性腹瀉，會(huì)變薄、松弛，伴有黃色透明液體，有時(shí)有氣體，腸腸道致病性大腸桿菌多引起滲透性腹瀉，仔豬最開(kāi)始表現(xiàn)為消化道癥狀，進(jìn)一步發(fā)展成為腸毒素血癥或敗血癥，伴發(fā)脫水癥狀，口鼻發(fā)紫，四肢發(fā)紺，精神抑郁，體重下降，不久仔豬死亡。剖檢后，腸道擴(kuò)張、液體充脹，充血、腸黏膜粗糙，呈顆粒狀(腸上皮壞死、絨毛萎縮),急性炎癥、纖產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌又稱水腫病，會(huì)伴發(fā)分泌性腹瀉，眼臉、頸部腹側(cè)(下頜)、胃和結(jié)腸系膜水腫，精神萎靡抑郁，脫水衰竭，震顫，叫聲嘶5.1豬德?tīng)査跔畈《?.1.1病原學(xué)豬德?tīng)査跔畈《?，又稱豬δ冠狀病毒、豬丁型冠狀病毒。PDCoV屬于尼羅病毒目，冠狀病毒科，德?tīng)査《緦?δ冠狀病毒)。PDCoV有直徑60-180nm。PDCoV基因組約25.4kb,含有四種結(jié)構(gòu)蛋白：纖突蛋白(S),小膜蛋白(E),膜蛋白(M),核衣殼(N),結(jié)構(gòu)如圖6所示。豬腹瀉病綜合防控手冊(cè)pplapplab2323圖11PDCoV基因組結(jié)構(gòu)豬德?tīng)査谂R床上發(fā)病率不高，造成的損失也并不持續(xù)，呈區(qū)域性流行，在臨床防控中以生物安全5.1.2臨床癥狀食欲減退或廢絕。斷奶豬、母豬常呈精神委頓、厭食和持續(xù)性腹瀉大約1周，逐漸恢復(fù)正常，少數(shù)豬恢復(fù)后生長(zhǎng)發(fā)育不良。育肥豬在感染后常發(fā)生腹瀉，多1周后康復(fù)。成年豬癥狀較輕，有的僅表現(xiàn)嘔吐，重者水樣腹瀉3~4天可自愈。5.2.1病原學(xué)豬傳染性胃腸炎病毒屬于冠狀病毒科冠狀病毒屬，病毒粒子呈圓形、橢圓形或多邊形。病毒直徑為90-200nm,有雙層膜，外膜覆有花瓣樣突起，突起長(zhǎng)約18-24nm,突起以極小的柄連接于囊膜的表層，其末端呈球狀。TGEV為單股RNA病毒，基因組全長(zhǎng)約為28kb,病毒粒子由3種主要結(jié)構(gòu)蛋白構(gòu)成，一種是磷蛋白(N,即核蛋白),它包裹著基因組RNA;另一種是膜結(jié)合蛋白(M),主要包埋在脂質(zhì)囊膜中；An3AnEAnMAn7豬腹瀉病綜合防控手冊(cè)SINDER信得第三種為大的糖蛋白(S),它形成病毒的突起。據(jù)推測(cè)，E2在決定宿主細(xì)胞親嗜性方面起作用，還具有膜融合作用，使病毒核蛋白進(jìn)入細(xì)胞漿，E2還攜帶主要的B淋巴細(xì)胞抗原決定簇，在提高獲得免疫力中一般2周齡以內(nèi)的仔豬感染后12-24小時(shí)會(huì)出現(xiàn)嘔吐，繼而出現(xiàn)嚴(yán)重的水樣或糊狀腹瀉，糞便呈黃色，常夾有未消化的凝乳塊，惡臭，體重迅速下降，7日齡內(nèi)仔豬發(fā)病死亡率可達(dá)100%。斷奶仔豬感染有些母豬與患病仔豬密切接觸反復(fù)感染，癥狀較重，體溫升高，泌乳停止，嘔吐、食欲不振和腹瀉，也過(guò)PRCV的哺乳仔豬和斷奶仔豬，使用TGEV野毒進(jìn)行攻毒，可部分對(duì)TGEV產(chǎn)生保護(hù)作用，且縮短了TGEV的病程，減少了仔豬排毒量和腹瀉程度。因此，推測(cè)TGEV的發(fā)病率降低與PRCV的廣泛流行具有1.豬流行性腹瀉病毒的流行病學(xué)1.2.豬流行性腹瀉病毒的分型方法20世紀(jì)70-80年代，PEDV廣泛流行于歐洲次發(fā)現(xiàn)PED的疫情。此后，直到21世紀(jì)初，在亞法國(guó)和比利時(shí)等歐洲國(guó)家分別報(bào)道了PEDV的爆有99%的同源性，且與韓國(guó)的PEDVGIb變異苗的研發(fā)，PEDV疫情的到控制。2010年10月份致死率達(dá)到80%-100%,在1年內(nèi)造成了100萬(wàn)株皆為PEDV變異株，屬于GⅡ群，說(shuō)明我國(guó)當(dāng)2010年以來(lái)發(fā)現(xiàn)的毒株被稱為新型PEDV毒株。傳進(jìn)化分析可以分為三個(gè)大群(如圖12),包括中國(guó)經(jīng)典毒株(LZC,CH/S/19與原型毒株(CV777DR13/1999)同屬GIa亞群，而GIb亞群主要包括細(xì)胞適應(yīng)疫苗毒株(弱SD-M,SQ2014SC1402)。GⅡ群也可分為GⅡa基因發(fā)生變異會(huì)導(dǎo)致PEDV的毒力發(fā)生改變?；谥袊?guó)地區(qū)分離的S基因繪制遺傳進(jìn)化樹(shù)(如圖13),發(fā)現(xiàn)2010年之后中國(guó)的PEDV毒株主要分豬腹瀉病綜合防控手冊(cè)SINDER豬腹瀉病綜合防控手冊(cè)SINDER為兩個(gè)大的分支(G1和G2),G1分支主要包含經(jīng)典PEDV毒株和重組毒株，而中國(guó)近幾年的PEDV流行株大多數(shù)屬于G2分支，此分支也是PEDV的新型變異株，G2分支的毒株主要包含GⅡa和GⅡb二個(gè)亞群。PEDV的優(yōu)勢(shì)毒株從最開(kāi)始的GI群，逐漸轉(zhuǎn)移為GⅡ群(GⅡb亞群),但是，近幾年P(guān)EDV的GⅡa亞型越來(lái)越多的被分離出來(lái)，PEDV的ORF3基因也是病毒的主要毒力基因，將其與中國(guó)地區(qū)不同時(shí)間不同地域分離的PEDV毒株進(jìn)行對(duì)比分析，繪制遺傳進(jìn)化樹(shù)(如圖14),結(jié)果表明ORF3基因被分成了兩個(gè)大群(A群和B群),其中A群主要包括GI群的部分和GⅡb亞群，而B(niǎo)群主要包括GI群的部分和圖14PEDVORF3基因遺傳進(jìn)化樹(shù)2013年，美國(guó)爆發(fā)PED疫情，同樣造成了巨大的損失。2013年，流行性腹瀉首次在美國(guó)暴發(fā)便造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。2014年，美國(guó)分離出OH851毒株，檢測(cè)為PEDV變異株，可能是由至2016年底，新型PEDV毒株(non毒株和SINDEL毒株)已經(jīng)傳播至北美洲、南美洲、亞洲和歐洲。PEDV屬于高變異毒株，變異還在持續(xù)進(jìn)行，在歐洲地區(qū)出現(xiàn)了PEDV和TGEV的重組冠狀病毒(SeCoV),例如意大利(2009-2012)、德國(guó)(2012)和東歐(2016)。1.3.豬流行性腹瀉病毒的變異1.4.豬流行性腹瀉病毒的傳播規(guī)律PEDV變異株相比于經(jīng)典PEDV毒株發(fā)生了較大的變異，基于PEDV的全基因組序列分析，發(fā)現(xiàn)有四個(gè)區(qū)域變異較大：①位于nsp2和nsp3區(qū)域之間；②位于S基因的S1區(qū)域；③位于S基因其中第三處變化可鑒別適應(yīng)細(xì)胞培養(yǎng)的疫苗毒株(GIb亞群)和野生型流行毒株(Gla亞群和GIlb亞群),ORF3基因在毒株適應(yīng)體外連續(xù)細(xì)胞傳代PEDV的流行具有明顯季節(jié)發(fā)病性，多發(fā)生于寒冷季節(jié)，我國(guó)常在冬春季節(jié)出現(xiàn)流行，每年的11月至次年的4月份是高發(fā)期。但是近幾年，豬流行性腹瀉的季節(jié)性發(fā)病特征越來(lái)越不明顯，許多豬在PEDV流行過(guò)的豬場(chǎng)，該病在豬群中豬腹瀉病綜合防控手冊(cè)SINDER信得生長(zhǎng)群往往會(huì)發(fā)生PED的疫情，會(huì)引起嚴(yán)重的細(xì)2.3輪狀病毒的傳播規(guī)律2.豬輪狀病毒的流行病學(xué)2.1輪狀病毒的分型編碼6個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白和5個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白，通過(guò)序列源性>53%的毒株為同一基因型，共劃分為10種ClassipcationWorkingGroup在第7次會(huì)議上談因決定的。VP4基因核苷酸同源性大干80%可認(rèn)大于85%可認(rèn)定為同一基因型(I型),VP7核苷2.2豬輪狀病毒的流行現(xiàn)狀中國(guó)地區(qū)流行的豬輪狀病毒G基因型有G5、G4和G3為主(如圖15所示)。P基因型2.4輪狀病毒的公共衛(wèi)生學(xué)播，但是檢測(cè)到動(dòng)物-人之間重排的RVA圖16),表明RVA具有人畜共患的潛力。豬腹瀉病綜合防控手冊(cè)SINDER豬腹瀉病綜合防控手冊(cè)SINDER1.豬腹瀉病的臨床檢測(cè)分泌性腹瀉。圖17廣泛pH試紙條2.PEDV和輪狀病毒的分離鑒定2.1PEDV的分離鑒定 豬腹瀉病綜合防控手冊(cè)豬腹瀉病綜合防控手冊(cè)SINDER2.2輪狀病毒的分離鑒定加入含的胰酶DMEM培養(yǎng)基6mL,待細(xì)胞出現(xiàn)明顯細(xì)胞病變(CPE)的時(shí)候(如圖19),超低溫冰箱3.PEDV和輪狀病毒病原診斷方法表10實(shí)驗(yàn)室診斷方法②靈敏度高；③可進(jìn)行規(guī)?；瘶悠窓z測(cè)；④操作容易。實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR技術(shù)的發(fā)現(xiàn)實(shí)現(xiàn)了RT-豬腹瀉病綜合防控手冊(cè)SINDER信得酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)是基于抗原抗體特異性結(jié)合的檢測(cè)方法，主要包含：①包被的抗原或抗體的固相支持物(聚苯乙烯塑料微孔或試管);②酶標(biāo)記的抗體或抗原；③酶的反應(yīng)底物。ELISA方法類型主要包括：直接ELISA,間接目前臨床檢測(cè)上用的較多的主要是間接ELISA和阻直接ELISA方法是最簡(jiǎn)單的一種，將抗原按再簡(jiǎn)單洗滌后進(jìn)行封閉，洗滌除去多余封閉液，加入稀釋好的特異性酶標(biāo)抗體，37℃吸附1h后，吸間接ELISA方法主要是采用PEDV滅活的病毒蛋白或重組表達(dá)的蛋白作為包被抗原，將待測(cè)抗體加入相應(yīng)抗原孔中37℃吸附1h,通過(guò)洗滌去除未結(jié)合牢靠的抗體，再加入酶標(biāo)二抗，通過(guò)洗滌去除未結(jié)合牢靠的抗體，再加入HRP底物顯色液與阻斷ELISA方法主要是采用PEDV滅活的病毒蛋白或重組表達(dá)的蛋白作為包被抗原，制備PEDV相對(duì)應(yīng)的特異性單克隆抗體或者多克隆抗度下與血清中特異性抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗原，當(dāng)血清中免疫熒光檢測(cè)方法是將熒光物質(zhì)標(biāo)記在目標(biāo)抗原(或抗體)上，通過(guò)特異性免疫反應(yīng)檢測(cè)抗體 (或抗原),如果二者可以結(jié)合形成帶有熒光物質(zhì)的復(fù)合物，可以在熒光顯微鏡下觀察到熒光，反所以在病毒檢測(cè)的診斷方法中，它的結(jié)果比較可靠且特異性高。PEDV進(jìn)行免疫熒光檢測(cè)時(shí)，需要將疑似樣品制作成冷凍切片或抹片，該方法檢測(cè)率較高，但是存在較多弊端：①檢測(cè)周期長(zhǎng)；②檢測(cè)過(guò)程中容易受到污染；③檢測(cè)方法不易操作。因4.豬病毒性腹瀉的監(jiān)測(cè)預(yù)警可通過(guò)監(jiān)測(cè)血清IgA抗體對(duì)PEDV進(jìn)行有效的預(yù)警。血清中的PEDV-IgA是單體IgA,在血清匯總含量低，一般只在PEDV感染時(shí)，才能在中檢測(cè)到。因此可以對(duì)產(chǎn)前30-60天的母豬進(jìn)行血清IgA抗體檢測(cè)，如果檢測(cè)為lgA陽(yáng)性，則表肛門(mén)拭子進(jìn)行病原學(xué)RT-PCR確診，并通過(guò)緊急免5.對(duì)疫苗的免疫效果的評(píng)估方式，而激發(fā)IgA抗體需要依靠活苗的刺激，而檢能夠中和病毒的抗體，檢測(cè)中和抗體雖然不能保證中和抗體和IgA抗體結(jié)果對(duì)比，發(fā)現(xiàn)選的場(chǎng)，IgA抗體的水平與中和抗體的值呈正相關(guān)。因此，選擇使用活苗免疫的豬場(chǎng)，可以通過(guò)培養(yǎng)自己的中和抗體檢測(cè)團(tuán)隊(duì)，使用檢測(cè)中和抗體的方案5.2中和抗體檢測(cè)步驟①標(biāo)記：在培養(yǎng)3天左右的Vero細(xì)胞板上標(biāo)記好血清編號(hào)、時(shí)間、檢測(cè)人、檢測(cè)日期，并設(shè)②配置接毒液：DMEM+1%雙抗+1%接毒③稀釋血清：把96孔細(xì)胞培養(yǎng)板整板加入用移液排槍在H列吹吸混合后吸取100ul混合液加入G列，依次2倍稀釋至A列，棄去最后100ul④配置病毒液：根據(jù)種毒效價(jià)把種毒加入接豬腹瀉病綜合防控手冊(cè)SINDER信得毒液中，得到效價(jià)為103的病毒液，將病毒液懸空加入96孔板中(病毒對(duì)照孔除外),每孔加入100ul⑤放入CO2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1個(gè)小時(shí)；⑥病毒對(duì)照：取100ul病毒液加入離心管中，連續(xù)稀釋至10-4,放入4℃冰箱冷藏備用⑦把備用細(xì)胞板內(nèi)溶液，用PBS潤(rùn)洗3遍，最后一遍要甩干凈(PBS提前37℃水浴);⑧把感作1個(gè)小時(shí)后的混合液從低濃度到高濃度列依次轉(zhuǎn)移到備用細(xì)胞板內(nèi)，放入CO2恒溫培養(yǎng)箱中孵育2個(gè)小時(shí)；⑨取出培養(yǎng)板棄去板內(nèi)溶液，PBS潤(rùn)洗3遍，每孔加入200ul的接毒液，病毒對(duì)照加100ul,病毒對(duì)照依次加入不同濃度的病毒液，醫(yī)用膠布封板，放入CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天；⑩待時(shí)間到達(dá)后，在光學(xué)顯微鏡下觀察病變，讀取中和抗體結(jié)果。豬腹瀉病綜合防控手冊(cè)豬腹瀉病綜合防控手冊(cè)SINDER滅活苗安全穩(wěn)定，但是相應(yīng)的需要更大的免疫劑量，而且存在免疫持續(xù)時(shí)間短等問(wèn)題。這些缺點(diǎn)促進(jìn)了PEDV弱毒疫苗的研發(fā)，細(xì)胞傳代致弱是篩選PEDV弱毒疫苗株的常用方法。伶有恩等與PED的防控。韓國(guó)學(xué)者將PEDV毒株DR13株在Vero細(xì)胞上傳代至F100代進(jìn)行致弱，研發(fā)的DR13弱毒疫苗用于韓國(guó)PED的預(yù)防。2010年開(kāi)始由于PEDV毒株發(fā)生變異，中國(guó)使用的TGE和PED二聯(lián)滅活和弱毒疫苗的保護(hù)力下降。馮力研究員等研發(fā)了PEDV,TGEV以及輪狀病毒三聯(lián)弱毒活疫苗(弱毒H毒株+弱毒產(chǎn)生免疫力，免疫期6個(gè)月，對(duì)混合感染和單一感染的仔豬均有較好的預(yù)防作用。隨后TGEV(HB08株)和PEDV(ZJ08株)二聯(lián)弱毒苗也被官方批準(zhǔn)應(yīng)用于中國(guó)PED的防控。由PEDV變異株AJ1102在針對(duì)輪狀病毒的防控中，目前輪狀病毒有商品化的弱毒苗(G5型),從上市以來(lái)，我國(guó)豬輪狀病毒的G5型得到了有效控制。多位學(xué)者通過(guò)③免疫期長(zhǎng)。滅活疫苗是用加熱或化學(xué)劑(通常是福爾馬林)等方法對(duì)病毒或細(xì)菌培養(yǎng)物進(jìn)行滅活。主要分是最早被研制成功的。王明研究員等用CV777毒株感染仔豬，取發(fā)病仔豬小腸粘膜及內(nèi)容物制備了PED氫氧化鋁滅活苗，制成了我國(guó)第一個(gè)PED疫苗。疫苗免疫后兩周開(kāi)始產(chǎn)生免疫力，免疫期可達(dá)6個(gè)月。還紅華等將從腹瀉糞便樣品中分離的PEDV毒株與TGEV毒株分別經(jīng)口接種未經(jīng)母乳喂養(yǎng)的新生仔豬，取典型發(fā)病豬的小腸，制成PED和TGE二聯(lián)油乳劑滅活苗，動(dòng)物試驗(yàn)的結(jié)果表明該疫苗有較好的效果。組織滅活苗有較好的保護(hù)性能，但是操作繁瑣且生產(chǎn)成本高以及質(zhì)量難以控制自從PEDV在Vero細(xì)胞上增殖的方法被發(fā)現(xiàn)以后，極大地促進(jìn)了細(xì)胞滅活苗的發(fā)展。馬思奇研究員等采用在病毒培養(yǎng)液中添加適量胰酶的培養(yǎng)方法，將PEDVCV777毒株適應(yīng)于Vero細(xì)胞，將PEDV傳代毒制備氫氧化鋁滅活苗，獲得較高的保護(hù)率。由于PED和TGE的經(jīng)?；旌细腥?，馬思奇研究員等將TGEV和PEDV毒株進(jìn)行細(xì)胞傳代，再次成功研發(fā)了滅活TGE和PED二聯(lián)氫氧化鋁滅活苗，在2003年之前用于中國(guó)PED的預(yù)防，有效的控制了PED和TGE的發(fā)生。自從2010年開(kāi)始，PEDV新毒株的出現(xiàn)導(dǎo)致了PED的發(fā)病率明顯提高，美國(guó)、韓國(guó)、加拿大疫情的控制。我國(guó)也通過(guò)分離新型變異株，研發(fā)了多種PEDV的滅活苗，如豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)滅活疫苗等，極大地控制了我國(guó)PEDV在輪狀病毒的防控中，弱毒苗具有較好的效果，但是要激發(fā)更高水平的抗體，需要滅活苗的輔助，目前還未有輪狀滅活苗上市。此外，輪狀病毒在中國(guó)地區(qū)流行基因型眾多，且不同基因型間毒株且不同基因型毒株存在交叉保護(hù)力，急需能夠有效利用體外表達(dá)系統(tǒng)大量獲得病毒的免疫原。因?yàn)槠渲胁缓胁≡w的遺傳信息和感染性組分，亞單位豬腹瀉病綜合防控手冊(cè)SINDER豬腹瀉病綜合防控手冊(cè)SINDER原核表達(dá)系統(tǒng)的蛋白表達(dá)量很大，可以滿足大劑量需求，常用的表達(dá)系統(tǒng)是大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)。Piao等將PEDV變異株S1區(qū)域氨基端基因以包涵體的形式在大腸桿菌菌株BL21中表達(dá)，蛋白免疫小鼠后可以產(chǎn)生高效價(jià)的IgG血清，表明純化后可以作為抗PEDV變異株的亞單位疫苗。原核表達(dá)系統(tǒng)中常常會(huì)影響蛋白的構(gòu)象和免疫原性，而真核表達(dá)會(huì)更接近于天然構(gòu)象真核表達(dá)系統(tǒng)常用的有多種不同的方法，常用的有真核細(xì)胞和昆蟲(chóng)細(xì)胞等。Oh等采用哺乳細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)將PEDVS1基因在PK-15細(xì)胞中獲得表達(dá)，蛋白加入佐劑后注射免疫妊娠母豬，新生仔豬對(duì)PEDV產(chǎn)生了有效免疫。Makadiya等將親和標(biāo)記的PEDVS1蛋白在酵母、昆蟲(chóng)和HEK-293T細(xì)胞中表達(dá)，發(fā)現(xiàn)HEK-293T細(xì)胞表達(dá)的蛋白有效誘導(dǎo)了母豬和仔豬產(chǎn)生抗PEDV的抗體，表明其適于作為PED亞單4.載體類疫苗活載體疫苗是指運(yùn)用基因工程的方法改造非致病性微生物，使其表達(dá)特定病原的抗原決定簇，從而進(jìn)行疫苗的研發(fā)，常用的微生物有酵母菌、乳酸桿菌以及副痘病毒等?；钶d體疫苗主要分為病毒活載體疫苗與細(xì)菌活載體疫苗，兩個(gè)疫苗的優(yōu)缺點(diǎn)如表11所示。核酸疫苗又名DNA疫苗，通過(guò)把目的基因插入到特定載體，再把載體注入動(dòng)物體內(nèi)，使動(dòng)物Harrisvaccines公司研發(fā)的RNA核酸疫苗依據(jù)甲病毒表達(dá)載體表達(dá)了PEDVS基因，但是對(duì)仔豬和張等用減毒鼠傷寒沙門(mén)氏菌表達(dá)TGEV和PEDVS基因構(gòu)建了二價(jià)DNA疫苗，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明可以促進(jìn)免疫應(yīng)答。Yi等也運(yùn)用PEDV的S基因構(gòu)建了通過(guò)分析大量的臨床發(fā)病案例，發(fā)現(xiàn)PED的防控僅靠疫苗免疫并不能有效地預(yù)防PED,需要一系列的管理手段，保證母源抗體傳遞給仔豬，而豬腹瀉病綜合防控手冊(cè)SINDER信得部分生物安全較差的豬場(chǎng)，即使做好了免疫，依舊會(huì)出現(xiàn)發(fā)病情況。仔豬口服對(duì)型的高效價(jià)抗體可以目前在研抗體分卵黃抗體和單克隆抗體兩類，其優(yōu)缺點(diǎn)見(jiàn)表12。卵黃抗體(Yolkimmunoglobulin,IgY)又類的法氏囊受到外界抗原刺激產(chǎn)生的特異性免疫應(yīng)特異性且無(wú)毒副作用，在禽類疾病的治療和預(yù)防中得到廣泛應(yīng)用。隨著卵黃抗體使用技術(shù)的成熟，卵IgY與母豬初乳中的抗體具有相同功能，仔進(jìn)入血液中持續(xù)發(fā)揮作用。崔煥忠等(2012年)通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明卵黃抗體對(duì)病毒性腹瀉有很好的預(yù)防和治療效果。王建明等(2002年)通過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證卵黃抗體可以降低斷奶仔豬的發(fā)病率。李冰等(2014年)通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明了制備的抗流行性腹瀉卵黃抗體在進(jìn)行預(yù)防和治療PED具有顯著效果。陳魯勇等(2003年)通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明，卵黃抗體能夠提高斷奶仔豬的日增重量，提高飼料報(bào)酬。卵黃抗體在臨床中廣泛使用，并取得了較好的效果，在PED發(fā)病豬場(chǎng)用針對(duì)PEDV流行毒株制備的卵黃此外，有學(xué)者證明高免母牛初乳等也能對(duì)針對(duì)PEDV的主要毒力基因S基因制備篩選的單克隆抗體對(duì)于PEDV的防控也有較好的效果，有學(xué)者通過(guò)大腸桿菌來(lái)表達(dá)的針對(duì)PEDV的鼠源單克隆抗體，抗體可以有效中和PEDV,降低病毒對(duì)靶細(xì)胞的侵害(Zhangetal.,2016b)。表12抗體特點(diǎn)對(duì)比表毒副作用無(wú)毒副作用豬腹瀉病綜合防控手冊(cè)豬腹瀉病綜合防控手冊(cè)SINDER豬流行性腹瀉目前已成為一個(gè)免疫管理類疾病，僅僅通過(guò)免疫打造高抗豬群，不足以保護(hù)豬群不發(fā)病。豬流行性腹瀉的防控主要包含三個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)：①免疫管理：通過(guò)選擇合適的疫苗以及免疫程序，打造具有高水平抗體的母豬群，并通過(guò)抗體監(jiān)測(cè)手段保證豬群的抗體均一性，不留凈豬；②生物安全：外防病原入侵，加強(qiáng)人員與物資的進(jìn)場(chǎng)管理，內(nèi)控病原擴(kuò)散，通過(guò)初乳管理保證仔豬抗體水平，加強(qiáng)消殺降低環(huán)境中病原含量，控制病原擴(kuò)散；③緊急治療：發(fā)病早期快速灌服抗生素可以有而發(fā)病后期精準(zhǔn)用藥可以快速控制繼發(fā)細(xì)菌感染，幫助PEDV的防控主要通過(guò)免疫母豬，產(chǎn)生高水平抗體傳遞給仔豬。對(duì)于PEDV的防控最有效的抗體是slgA,它是局部粘膜免疫，抵抗腸道感染的主要抗體，含有分泌鏈，避免被腸胃消化酶的消化。母豬能夠產(chǎn)生高水平的slgA的關(guān)鍵是使用活毒感染，通過(guò)活毒刺激機(jī)體產(chǎn)生黏膜免疫應(yīng)答，并通過(guò)后續(xù)的加強(qiáng)免疫，可以保證母豬產(chǎn)前產(chǎn)生足量的slgA(如圖20)。滅活疫苗免疫滅活疫苗免疫刺激粘膜免疫產(chǎn)生更高水平的IgA抗體活毒刺激粘膜免疫應(yīng)答，特異性抗體遷移至乳腺通過(guò)母乳提供抗體被動(dòng)保護(hù)圖20局部黏膜面免疫的作用機(jī)理母豬免疫之后，體內(nèi)產(chǎn)生的能夠分泌抗體的特異性淋巴細(xì)胞，通過(guò)血液循環(huán)運(yùn)輸?shù)饺橄俨课坏难芴?，淋巴?xì)胞通過(guò)整合素α4β7與乳腺血管內(nèi)皮細(xì)胞MAdCAM-1受體結(jié)合進(jìn)入乳腺。此后，淋巴細(xì)胞通過(guò)表達(dá)CCR10與乳腺上皮表達(dá)的CCL28結(jié)合進(jìn)入乳腺腺泡，分泌抗體混合于乳汁中，傳遞給仔豬(如圖豬腹瀉病綜合防控手冊(cè)圖21腸道-乳腺軸抗體分泌機(jī)制目前，PED防控最有效的是“活+死”的免疫方案，通過(guò)活苗免疫刺激母豬產(chǎn)生高水平的slgA以及滅活苗的加強(qiáng)免疫，打造豬群整齊的高水平抗體?；蠲绲拿庖呖梢赃x擇弱毒苗或者使用強(qiáng)毒返飼，商品化弱毒苗可根據(jù)產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)使用，而生物安全條件較好的豬場(chǎng)可選擇強(qiáng)毒返飼，可刺激母豬產(chǎn)生更高水平的抗體，保護(hù)力相比于弱毒更強(qiáng)。PED的免疫方案需要根據(jù)豬場(chǎng)的情況，靈活選擇免疫方案，以下為推薦免疫方案，見(jiàn)表13。表13PEDV活+滅免疫方案制定PEDV免疫后，需要對(duì)豬群整體的抗體水平進(jìn)行監(jiān)測(cè)，保證母豬在生產(chǎn)的時(shí)候具有較高的母源抗體。目前，PEDV的抗體水平監(jiān)測(cè)具有完善的方案，可以選擇方案很多，不具備細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室的豬場(chǎng)可以選擇商品化的試劑盒，也可選擇外部機(jī)構(gòu)進(jìn)行檢測(cè)。具有細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室的豬場(chǎng)，可以選擇中和實(shí)驗(yàn)若選擇中和實(shí)驗(yàn)進(jìn)行監(jiān)測(cè)，可在母豬孕100天的時(shí)候采血檢測(cè)，母豬通過(guò)活苗和2針滅活苗的免疫，在孕100天時(shí)，中和抗體水平1:128的比例高于80%,若豬群抗體水平不合格，可在產(chǎn)前緊急補(bǔ)免1針滅活苗。中和試驗(yàn)也可以選擇在免疫過(guò)程中進(jìn)行監(jiān)測(cè)，通常在返飼21天后，豬群的中和抗體水平1:32的比例高于80%;在免疫1針滅活苗后2周左右，豬群的中和抗體水平1:64的比例高于80%;在免疫2針滅活苗后1周左右，豬群的中和抗體水平1:128的比例高于80%。此外，能存在抗體為0的豬，若出現(xiàn)不合格豬只，需要盡豬腹瀉病綜合防控手冊(cè)SINDER信得孕10d孕20dPOS左孕10d孕20dPOS左孕70d孕100dP08專P09左后備集中至孕60d進(jìn)行返飼，隔離15d返飼21d后，中和抗體可達(dá)1:32次產(chǎn)前40d+產(chǎn)前20d,免疫2針滅活苗一免后中和抗體達(dá)1:64二免后中和抗體達(dá)1:128龍州3.后備母豬馴化關(guān)鍵點(diǎn)陽(yáng)性病料返飼是比較傳統(tǒng)的方案，具有病毒含量不穩(wěn)定，返飼之后排毒時(shí)間長(zhǎng)的劣勢(shì)。目前使用較多且效果比較好的方法是使用穩(wěn)定傳代的病毒液，能夠較好的控制返飼劑量，保證豬群的感染均一性，達(dá)到母豬返飼通常是在后備段集中后統(tǒng)一進(jìn)行。選擇病毒液進(jìn)行返飼時(shí)，病毒感染母豬后，在感染2天左右出現(xiàn)腹瀉癥狀，在返飼7-10天時(shí)達(dá)到腹瀉高峰期，豬群整體腹瀉比例高于20%,若豬群之前接觸整體感染均一性的情況下，豬群排毒期通常在12天左右。在返飼7天后，豬群開(kāi)始產(chǎn)生中和抗體，約在3-4周后，抗體水平達(dá)到最高值。返飼對(duì)于成年豬的影響較低，僅會(huì)降低7天的采食量于日增重。返飼需要避開(kāi)配種前后時(shí)間，會(huì)影響場(chǎng)區(qū)約1%的配準(zhǔn)率。孕40d之前盡量不進(jìn)行返飼，小孕齡返飼會(huì)引起部分母豬的流產(chǎn)，主要原因是：①母豬感染PEDV后，機(jī)體會(huì)產(chǎn)生炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致前列腺素分泌增加，子宮肌肉收縮加劇，最終導(dǎo)致流產(chǎn)；②PEDV感染后，若腹瀉情況較為嚴(yán)重，會(huì)導(dǎo)致母豬腸道受損，應(yīng)激導(dǎo)致流產(chǎn)。母豬返飼規(guī)律豬腹瀉病綜合防控手冊(cè)SINDER信得返飼方案確認(rèn)返飼方案確認(rèn)生物安全標(biāo)準(zhǔn)確認(rèn)返飼效果及數(shù)據(jù)跟蹤全場(chǎng)返飼前培訓(xùn)返飼前責(zé)任劃分場(chǎng)區(qū)解封返飼物資準(zhǔn)備返飼執(zhí)行場(chǎng)區(qū)風(fēng)險(xiǎn)排查場(chǎng)區(qū)決定使用返飼方案后，獸醫(yī)需要和場(chǎng)長(zhǎng)等生產(chǎn)干部確認(rèn)人、車、物和豬流的規(guī)劃，需要預(yù)留出至少15天的返飼時(shí)間，返飼期間場(chǎng)區(qū)處于靜默狀態(tài)，豬流禁止移動(dòng)，必要情況下需要提前報(bào)備規(guī)劃，避開(kāi)返飼區(qū)域。車流需要提前規(guī)劃路線，嚴(yán)禁與返飼區(qū)域交叉，遵循先凈區(qū)后臟區(qū)的線路開(kāi)展生產(chǎn)工作，非必要活動(dòng)可以延后。物品做好15天的規(guī)劃，可提前進(jìn)入生產(chǎn)區(qū)域，返飼期間減少物品的移動(dòng)。返飼單元與待產(chǎn)單元的人員需要提前進(jìn)入單元，返飼期間居住于生產(chǎn)區(qū)，減少移動(dòng)，其他單元人員上下班嚴(yán)格規(guī)劃路線，禁止經(jīng)過(guò)返飼區(qū)域，后勤人員路線也需要嚴(yán)格制定順序，避免人員交叉，或?qū)⑴K區(qū)病原帶到管理干部需要提前準(zhǔn)備返飼物資。返飼種毒可以選擇陽(yáng)性病料或者病毒培養(yǎng)液，相較于陽(yáng)性病料，更加返飼種毒(配套的連續(xù)注射器或者口服飼喂槍)、5mL采血器、防護(hù)類物資(隔離服、口罩、乳膠手套)、泡沫盒、冰塊、開(kāi)瓶器、采樣拭子和人員生產(chǎn)生活物資(提前準(zhǔn)備好15天用量，非必要減少進(jìn)物資次數(shù))。返飼前獸醫(yī)需要對(duì)全場(chǎng)人員進(jìn)行會(huì)議培訓(xùn)，講解PEDV的特性，強(qiáng)調(diào)本次返飼使用的為強(qiáng)毒，若生物安全不到位，造成病原擴(kuò)散會(huì)產(chǎn)生極大的危害。并現(xiàn)場(chǎng)確認(rèn)返飼期間各個(gè)環(huán)節(jié)的責(zé)任人，確保返飼的4.2馴化期間操作目前，根據(jù)豬舍的模式，返飼方法可分為定位欄返飼和大圈返飼，豬場(chǎng)可根據(jù)場(chǎng)區(qū)情況選擇合適的定位欄返飼步驟：①返飼操作人員需要對(duì)返飼豬只提前一頓進(jìn)行控食，并確定各個(gè)單體欄每頭份的種毒用量；②飼養(yǎng)人員需要提前檢查打料期是否正常運(yùn)行，水槽水量是否過(guò)多，預(yù)留水量不沒(méi)過(guò)飼料為準(zhǔn)；③兩人操作，飼養(yǎng)人員逐頭打料，返飼人員將種毒加到飼料最上層，保證每頭豬都進(jìn)食到種毒；④對(duì)于不食豬做好標(biāo)記，待返飼結(jié)束后，保定不食豬，將種毒打到豬嘴里，保證感染均一性。豬腹瀉病綜合防控手冊(cè)大圈逐頭返飼步驟：①需要指導(dǎo)飼養(yǎng)人員提前兩天使用誘食劑(奶粉等)進(jìn)行誘食，每天兩次；②返飼人員確定好返飼劑量，返飼人員站在圈外使用飼喂槍逐頭進(jìn)行口服返飼，并做好標(biāo)記；③不食豬只，返飼人員沾腳消毒后，進(jìn)圈內(nèi)保定豬只，將種毒打逐頭飼喂返飼飼喂搶逐頭飼喂返飼飼喂搶返飼期間的高危時(shí)間段為3-10天，此時(shí)間段為排毒高峰期，場(chǎng)區(qū)環(huán)境中病原含量較高。場(chǎng)區(qū)除靜默15天的時(shí)間外，在高危期間尤其要注意各類工作，謹(jǐn)防散毒。返飼人員在單元內(nèi)封閉隔離，其他人員規(guī)避進(jìn)出返飼單元，單元封閉參考非瘟檢出返飼期間及返飼前1天應(yīng)該停止場(chǎng)區(qū)的水源消毒，避免水源中的消毒劑殺滅PEDV病原，影響返飼使用毒株為活毒，在運(yùn)送至場(chǎng)區(qū)的過(guò)程中需要保證全程冷凍。場(chǎng)區(qū)收到病毒培養(yǎng)液后，可提前置于冷藏中化凍，嚴(yán)禁加熱解凍，否則會(huì)損害病毒活力。此外，病毒液不可反復(fù)凍融，否則易導(dǎo)致病毒含量降低，且返飼操作需要在6小時(shí)內(nèi)完成，過(guò)以下兩個(gè)指標(biāo)進(jìn)行判斷：①抗原檢測(cè)，選擇返飼后3、5、7、11天采(腹瀉豬)肛門(mén)拭子，若檢測(cè)到PEDV抗原則判為排毒，后續(xù)不再進(jìn)行采樣重復(fù)檢測(cè)；②飼養(yǎng)員每天巡欄記錄豬群的腹瀉比例，按整體累計(jì)比例，不重復(fù)計(jì)算，大圈按圈統(tǒng)計(jì)(≥3頭腹瀉豬，定義為腹瀉圈),豬群的整體腹瀉比例應(yīng)高于20%。這兩個(gè)條件皆合格之后，方可判定為PED可能會(huì)導(dǎo)致腹瀉比例較低，可在返飼21天后采返飼后不可立即進(jìn)行單元消毒，需要整體腹瀉比例達(dá)到30%以上時(shí)，執(zhí)行環(huán)境消毒。在返飼結(jié)束前，需要對(duì)大環(huán)境采樣進(jìn)行采樣，采樣范圍要廣，對(duì)單元過(guò)道欄板、地面、墻壁、洗澡間等位置皆要采集，檢測(cè)結(jié)果均為陰性，確保安全后方可解返飼操作結(jié)束后，使用物品需要嚴(yán)格消毒后方可丟棄。返飼期間使用的隔離服，膠鞋，工裝等物品在單元內(nèi)使用消毒劑浸泡消毒，一次性手套或者P7瓶使用消毒劑浸泡消毒處理后，裝入到相應(yīng)返飼之后，需要對(duì)返飼效果進(jìn)行追蹤，可通5.PED發(fā)病場(chǎng)生物安全防控5.1豬流管理豬流在移動(dòng)前需要嚴(yán)格規(guī)劃路線，新上產(chǎn)房的母豬與發(fā)病斷奶豬需嚴(yán)格消毒后再移動(dòng)，豬群流轉(zhuǎn)路線、轉(zhuǎn)豬車輛和接豬人員不能交叉，轉(zhuǎn)豬前后豬腹瀉病綜合防控手冊(cè)SINDER信得后備進(jìn)群前1周采集糞便監(jiān)控排毒情況，每單元采集5份樣品，有異常延后進(jìn)群。發(fā)病單元內(nèi)豬場(chǎng)發(fā)生PED之后，需要全場(chǎng)執(zhí)行隔離，嚴(yán)禁發(fā)生PED單元飼養(yǎng)員進(jìn)入或接觸未發(fā)生單元、元必須刷鞋沾腳，隨身攜帶物品消毒之后方可進(jìn)入單元。飼養(yǎng)員需要定時(shí)巡欄，若發(fā)現(xiàn)腹瀉豬必須立豬場(chǎng)防疫人員在執(zhí)行免疫時(shí)，需要按區(qū)域和批次進(jìn)行劃分，嚴(yán)禁人員交叉跨區(qū)域進(jìn)行免疫，以需安排人員分開(kāi)免疫，防疫員進(jìn)出單元需要嚴(yán)格做后勤水電維修人員不可私自進(jìn)出單元，在需要進(jìn)入單元作業(yè)時(shí)，提前向場(chǎng)段長(zhǎng)報(bào)備，經(jīng)審批同意后方可進(jìn)入豬舍作業(yè)。后勤人員在進(jìn)入豬舍前需要執(zhí)行嚴(yán)格的消毒措施，攜帶工具浸泡消毒，并由飼養(yǎng)員進(jìn)行監(jiān)督，消毒合格后才可攜帶工具進(jìn)入。送飯、送物資與拉死豬等后勤人員，需要規(guī)劃好順序與路線，遵循先凈區(qū)后臟區(qū)，先仔豬后大豬的原則，不可隨意在場(chǎng)區(qū)流轉(zhuǎn)，嚴(yán)禁不同業(yè)務(wù)間發(fā)病單元內(nèi)需要執(zhí)行最小單元格管理，單元內(nèi)所有使用物品分門(mén)別類，正常圈與異常圈分開(kāi)飼養(yǎng)員間不準(zhǔn)相互借用物品，批次結(jié)束后，可浸泡物品需要浸泡消毒，不可浸泡物品隨批次轉(zhuǎn)至單元內(nèi)發(fā)病后，嚴(yán)禁開(kāi)展閹割斷尾和免疫的全群性操作，待發(fā)病高峰期結(jié)束，延后開(kāi)展。單元內(nèi)的腹瀉糞便病原含量極高，需要使用干燥粉進(jìn)行覆蓋，及時(shí)用沾有消毒劑的拖把進(jìn)行清理，再用干燥粉覆蓋圈舍，保持圈舍的干燥，待圈舍內(nèi)消毒完畢后，再對(duì)過(guò)道進(jìn)行霧化消毒，降低單元內(nèi)的病原醫(yī)療廢棄物與垃圾使用內(nèi)膜袋分類后，使用消毒劑進(jìn)行全面消毒后，統(tǒng)一清理出單元。單元走到及物發(fā)病單元批次結(jié)束后，需要嚴(yán)格執(zhí)行單元內(nèi)的刷圈清消，保證眼觀無(wú)糞污，采樣檢測(cè)病原為陰場(chǎng)區(qū)在進(jìn)行拉死豬業(yè)務(wù)時(shí)，需要遵循按照先且拉死豬人員工作前需要進(jìn)行洗澡換衣，并對(duì)車輛進(jìn)行嚴(yán)格的洗消烘，拉運(yùn)過(guò)程中不能與其他業(yè)務(wù)有交叉。拉死豬結(jié)束后，需要對(duì)道路進(jìn)行消毒，拉豬工具和車輛進(jìn)行消毒，人員洗澡消毒后方可進(jìn)入生場(chǎng)內(nèi)有轉(zhuǎn)豬業(yè)務(wù)時(shí)，需要提前規(guī)劃車輛移動(dòng)路線，人員工作前需要進(jìn)行洗澡換衣，并對(duì)車輛進(jìn)行嚴(yán)格的洗消烘，拉運(yùn)過(guò)程中不能與其他業(yè)務(wù)有交車輛的刷洗要干凈無(wú)死角，車斗、底盤(pán)、輪胎、擋泥板無(wú)肉眼可見(jiàn)糞便、血漬、動(dòng)物毛發(fā)、污物等。刷車要在洗車棚中，嚴(yán)禁露天刷車及污水橫流，清洗房必須頂部及四周密封，污水經(jīng)暗道收集。車輛刷洗干凈后，必須進(jìn)行烘干，溫度需要達(dá)到65°C,并維持30分鐘。5.5場(chǎng)區(qū)管理措施場(chǎng)區(qū)內(nèi)執(zhí)行臟凈道管理方案，將場(chǎng)區(qū)的道路分為臟道和凈道，場(chǎng)區(qū)業(yè)務(wù)開(kāi)展需要做好路線的規(guī)劃，避免不同業(yè)務(wù)間交叉。若無(wú)法進(jìn)行臟凈道分離豬腹瀉病綜合防控手冊(cè)SINDER信得不同批次飼養(yǎng)員上下班建議分時(shí)間，運(yùn)送物資需與正常單元分時(shí)段進(jìn)行，業(yè)務(wù)結(jié)束后灑水車對(duì)途徑地進(jìn)行全面消毒，嚴(yán)禁使用高壓沖洗，需選擇高壓霧化消毒的方式。場(chǎng)區(qū)不同區(qū)域的交界處，需設(shè)置消豬舍內(nèi)需要定期檢查墻壁及設(shè)備，墻體有縫場(chǎng)區(qū)還需定期開(kāi)展四害的防控，定期滅鼠、6.發(fā)病豬場(chǎng)的處置措施場(chǎng)區(qū)出現(xiàn)腹瀉癥狀，飼養(yǎng)員需要臨床快速初判，檢測(cè)腹瀉的類型，若判定為病毒性腹瀉，需要場(chǎng)區(qū)管理干部需緊急成立疾病專項(xiàng)群，指導(dǎo)場(chǎng)區(qū)人6.2緊急隔離確診病原為PEDV后，需要快速采樣確診感發(fā)病區(qū)域嚴(yán)格執(zhí)行隔離，禁止出入單元，與其他單元交叉，并快速預(yù)警上下游場(chǎng)區(qū)，避免病原跨場(chǎng)區(qū)管理干部盡快排查病原入口，查找場(chǎng)區(qū)的生物安全入口。外放入侵，排查進(jìn)入場(chǎng)區(qū)的風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)，盡快切斷外部病原的風(fēng)險(xiǎn)。內(nèi)控?cái)U(kuò)散，對(duì)場(chǎng)區(qū)PEDV的潛伏期最長(zhǎng)可達(dá)7天，場(chǎng)區(qū)需要整理發(fā)病前10天的業(yè)務(wù)，盡快梳理出業(yè)務(wù)開(kāi)展時(shí)間正常單元與發(fā)病單元，正常圈與發(fā)病圈的物糞刷、消毒桶各準(zhǔn)備4個(gè)，做好標(biāo)記。一個(gè)用于正常圈，其他三個(gè)用于異常圈，每使用一個(gè)的消毒時(shí)間都大于五分鐘，確保腹瀉圈的任何物品不接觸正發(fā)病期間嚴(yán)禁開(kāi)展全群性操作，例如全群治療、閹割斷尾等，需延后至發(fā)病高峰期結(jié)束開(kāi)展。注射治療時(shí)，先輕微圈后嚴(yán)重圈，一圈一針頭，打完一圈連續(xù)注射器進(jìn)行更換(配備2把連續(xù)注射器，交替使用，浸泡消毒),嚴(yán)禁將腹瀉仔豬拿到過(guò)道，進(jìn)行治療，腹瀉糞便污染過(guò)道，糞刷趕豬一圈一消毒進(jìn)行治療，飼養(yǎng)員治療異常圈穿隔離服，處理完噴淋關(guān)閉，可帶豬消毒。每天單元帶豬消毒，噴霧消毒4遍，消毒后需覆蓋蒙脫石干燥產(chǎn)床。連續(xù)3天；②適當(dāng)降低母豬的飼喂量，防止母豬出仔豬治療：①腹瀉豬灌服硫酸慶大霉素(早期使用，嚴(yán)重腹瀉豬無(wú)效);②全群灌服蒙脫石懸進(jìn)行腹腔補(bǔ)液，補(bǔ)液位置為仔豬倒數(shù)第二對(duì)乳頭左6.6測(cè)序分析需要將檢測(cè)為陽(yáng)性的腹瀉病料盡快測(cè)序，進(jìn)行毒株遺傳進(jìn)化分析，知曉場(chǎng)區(qū)流行毒株。根據(jù)測(cè)序結(jié)果選擇對(duì)型的疫苗進(jìn)行免疫，并及時(shí)調(diào)整后續(xù)豬腹瀉病綜合防控手冊(cè)豬腹瀉病綜合防控手冊(cè)SINDER豬輪狀病毒的免疫與PEDV類似，需要使用活苗刺激母豬的黏膜免疫，產(chǎn)生IgA抗體，方能達(dá)到較豬輪狀病毒能夠感染豬的G基因型有12種，不同基因型間的交叉保護(hù)力較差，選擇對(duì)型的基因型進(jìn)行免疫是最為有效的手段。因此，場(chǎng)區(qū)檢出輪狀病毒后，需要盡快進(jìn)行測(cè)序，知曉場(chǎng)區(qū)流行的輪狀病毒基因型，針對(duì)性的選擇疫苗產(chǎn)品，或者聯(lián)系生物公司分離本場(chǎng)毒株，進(jìn)行產(chǎn)品的定制，也是行之有效目前，中國(guó)地區(qū)流行的輪狀病毒基因型最多的是G9型，其次為G5、G4和G3型。輪狀病毒致弱時(shí)間久，可以選擇已經(jīng)致弱成熟的弱毒苗，再用與本場(chǎng)毒株匹配的滅活苗，可輪狀病毒的免疫日齡建議選擇在產(chǎn)前40天和產(chǎn)前20天免疫，具體的免疫針數(shù)需要根據(jù)場(chǎng)區(qū)的發(fā)病情況選擇(如表15),發(fā)病嚴(yán)重的豬場(chǎng)，建議選擇兩針活苗的免疫；發(fā)病比例較低，想要降低輪狀危害的豬場(chǎng)，可以選擇免疫一針活苗，發(fā)生過(guò)輪狀病毒疫情，想要維持場(chǎng)區(qū)安全生產(chǎn)的豬場(chǎng)，可以選擇兩輪狀病毒的活苗免疫有三種方案：①逐頭口服：建議每頭豬免疫2mL,使用VE槍逐頭免疫，免疫前可提前4h控水控料，將疫苗打在料上，保證每頭豬吃到疫苗；②飲水免疫：提前計(jì)算好免疫頭份，每次1頭份。其中免疫效果最佳的是前兩種進(jìn)行口服免疫。1.2免疫效果評(píng)估可以在產(chǎn)前采血檢測(cè)母豬的抗體水平來(lái)判斷免疫效使用活苗免疫的場(chǎng)也可以選擇中和抗體進(jìn)行檢測(cè)，1.2.2免疫后生產(chǎn)成績(jī)?cè)u(píng)估③21日齡矯正末重：通過(guò)對(duì)比免疫前后21④保育日增重：記錄保育段日增重和料比，豬腹瀉病綜合防控手冊(cè)2.1緊急隔離場(chǎng)區(qū)出現(xiàn)腹瀉癥狀，飼養(yǎng)員需要臨床快速初判，檢測(cè)腹瀉的類型，若判定為病毒性腹瀉，需要第一時(shí)間上報(bào)場(chǎng)區(qū)管理干部，并采樣送檢確診病原。確診病原為輪狀病毒后，需要快速采樣確診感染面積，檢出單元執(zhí)行靜默措施。發(fā)病區(qū)域嚴(yán)格執(zhí)連續(xù)3天；②適當(dāng)降低母豬的飼喂量，防止母豬仔豬治療：①腹瀉豬灌服硫酸慶大霉素(早期使用，嚴(yán)重腹瀉豬無(wú)效);②全群灌服蒙脫石懸液，可降低病原載量，每日兩次；③脫水嚴(yán)重豬可進(jìn)行腹腔補(bǔ)液，補(bǔ)液位置為仔豬倒數(shù)第二對(duì)乳頭左2.4測(cè)序分析2.2發(fā)病單元解決方案正常單元與發(fā)病單元，正常圈與發(fā)病圈的物糞刷、消毒桶各準(zhǔn)備4個(gè)，做好標(biāo)記。一個(gè)用于正常圈，其他三個(gè)用于異常圈，每使用一個(gè)的消毒時(shí)間都大于五分鐘，確保腹瀉圈的任何物品不接觸正發(fā)病期間嚴(yán)禁開(kāi)展全群性操作，例如全群治療、閹割斷尾等，需延后至發(fā)病高峰期結(jié)束開(kāi)展。注射治療時(shí)，先輕微圈后嚴(yán)重圈，一圈一針頭，打完一圈連續(xù)注射器進(jìn)行更換(配備2把連續(xù)注射器，交替使用，浸泡消毒),嚴(yán)禁將腹瀉仔豬拿到過(guò)道，進(jìn)行治療，腹瀉糞便污染過(guò)道，糞刷趕豬一圈一消毒進(jìn)行治療，飼養(yǎng)員治療異常圈穿隔離服，處理完需要將檢測(cè)為陽(yáng)性的腹瀉病料盡快測(cè)序，進(jìn)根據(jù)測(cè)序結(jié)果選擇對(duì)型的疫苗進(jìn)行免疫，并及時(shí)調(diào)2.5發(fā)病豬群的飼喂方案發(fā)病單元在轉(zhuǎn)群時(shí)，需要重視豬群的前七天飼喂，如果做好飼喂管理，后續(xù)豬群會(huì)降低細(xì)菌的要保證采食量最大化，保證第1天開(kāi)口率，遵循少加勤添的原則，按天按頓逐步遞增，每次飼喂不論不能一刀切，要根據(jù)每圈豬的體重決定飼喂量。針消毒4遍，消毒后需覆蓋蒙脫石干燥產(chǎn)床。2.3治療用藥方案母豬治療：①使用恩諾沙星治療，一天一針，發(fā)生輪狀疫情的場(chǎng)區(qū)生物安全同PED方案一致，輪狀疫情相對(duì)溫和，可以將生物安全措施限制豬腹瀉病綜合防控手冊(cè)SINDER豬腹瀉病綜合防控手冊(cè)SINDER大腸桿菌的防控一定是預(yù)防大于治療的，一定要在前期做好誘因的管理，避免豬群集體失衡，導(dǎo)致大腸桿菌發(fā)病后，需要遵循早發(fā)現(xiàn)、早預(yù)警和早治療的原則，快速行動(dòng)起來(lái)，才能避免造成更大2.大腸桿菌誘因管理單元接豬時(shí)的體感溫度低，容易造成冷應(yīng)激。單元內(nèi)接豬前需要進(jìn)行烘干及預(yù)升溫，烘干操作需要維持溫度在50-55℃,并持續(xù)4h。單元內(nèi)密封不嚴(yán)，有賊風(fēng)產(chǎn)生，也會(huì)導(dǎo)致豬群腹瀉。避免賊風(fēng)產(chǎn)生的做法有：①刷圈檢查，防止鋁管道被腐蝕，尤其是在采食區(qū)下方，飼料中的無(wú)機(jī)鹽會(huì)加速管道腐蝕；③單元首尾兩端的豬單元內(nèi)溫濕度調(diào)節(jié)不合理，噴淋過(guò)度、風(fēng)速應(yīng)對(duì)措施是：①做好單元小環(huán)境控制，根據(jù)單元內(nèi)據(jù)當(dāng)?shù)氐臍鉁卦O(shè)置參數(shù)，在寒冷的冬季，需要做好2.2飼喂管理豬群發(fā)生腹瀉，飼喂管理是重點(diǎn)。例如，小斷水?dāng)嗔系榷紩?huì)造成豬只集體失衡，引起腹瀉的發(fā)生。應(yīng)對(duì)措施有：①重視飼喂管理，避免大豬和小豬的飼料混合，并做好人員培訓(xùn)，加強(qiáng)考核；②批次清料，養(yǎng)豬批次結(jié)束后，需要及時(shí)清理剩余飼料，避免用錯(cuò)和腐敗的現(xiàn)象；③接豬前期和期次換料期間添加防腹瀉藥(拌料/飲水),連用5-7慢慢過(guò)渡期次料，維護(hù)好體重；⑤避免斷水?dāng)嗔蠎?yīng)激，斷水?dāng)嗔虾笕菀妆╋嫳┦?，引起消化不良，增豬場(chǎng)的水源出現(xiàn)問(wèn)題，會(huì)導(dǎo)致場(chǎng)區(qū)出現(xiàn)嚴(yán)重的腹瀉問(wèn)題。例如，單元水中細(xì)菌超標(biāo)、水質(zhì)未凈需要在飲用水中添加飲用性消毒劑，殺滅水中的病保證飲用水的標(biāo)準(zhǔn)；③定期進(jìn)行水管的清洗，防止飲用水定期采樣，進(jìn)行病原檢測(cè)及細(xì)菌數(shù)計(jì)數(shù)，避2.4現(xiàn)場(chǎng)管理豬場(chǎng)預(yù)防大腸桿菌導(dǎo)致的腹瀉，現(xiàn)場(chǎng)管理手①加強(qiáng)場(chǎng)區(qū)的預(yù)警系統(tǒng)，定期對(duì)飼養(yǎng)人員進(jìn)行培訓(xùn)，培養(yǎng)飼養(yǎng)員的臨床識(shí)別能力，發(fā)現(xiàn)腹瀉問(wèn)題或異常狀況及時(shí)上報(bào)，場(chǎng)區(qū)管理人員及獸醫(yī)盡快現(xiàn)場(chǎng)檢查，及時(shí)植入治療措施②完善場(chǎng)區(qū)的獎(jiǎng)罰措施，大腸桿菌發(fā)病后，及時(shí)有效的治療可以快速控制疫豬腹瀉病綜合防控手冊(cè)情，降低損失，場(chǎng)區(qū)需要給飼養(yǎng)員做好發(fā)病單元的大腸桿菌的發(fā)生是一個(gè)積累的過(guò)程，獸醫(yī)需要定期培養(yǎng)飼養(yǎng)員的臨床用藥治療能力，爭(zhēng)取做到早發(fā)現(xiàn)3.大腸桿菌免疫方案大腸桿菌的血清型眾多，不同場(chǎng)區(qū)流行的細(xì)菌血清型、毒力和耐藥性皆不相同，大腸桿菌等細(xì)菌類腹瀉的免疫，行之有效的方案采用多聯(lián)多目前大腸桿菌在產(chǎn)房高發(fā)的是F4、F5和F6在母豬孕期免疫兩針疫苗，并通過(guò)初乳管理做好仔大腸桿菌另一個(gè)高發(fā)的階段是保育前期，此時(shí)由于母源抗體的消失及豬只轉(zhuǎn)群應(yīng)激，豬群易發(fā)損失十分巨大。針對(duì)水腫病可以選擇分離場(chǎng)區(qū)的菌可以有效防控保育前期水腫病的發(fā)生，提升場(chǎng)區(qū)成素，做發(fā)病場(chǎng)藥敏試驗(yàn)，做好數(shù)據(jù)儲(chǔ)備，待場(chǎng)區(qū)發(fā)病后，優(yōu)先選擇最敏感的藥物使用，以達(dá)到快速控大腸桿菌是一種能夠快速適應(yīng)環(huán)境產(chǎn)生耐藥性的細(xì)菌。定期的藥敏試驗(yàn)可以及時(shí)選擇有效的抗藥敏試驗(yàn)可以支撐精準(zhǔn)用藥外，還可以幫助場(chǎng)區(qū)選擇有效且價(jià)格低廉的藥品，能夠達(dá)成經(jīng)本增效豬場(chǎng)在防空疾病的時(shí)候，做好場(chǎng)區(qū)或者本區(qū)域的疾病流調(diào)，對(duì)于所有疫病的控制都是有效的方案。場(chǎng)區(qū)可以對(duì)不同日齡段和不同批次的豬只采樣檢測(cè)，并做好發(fā)病案例復(fù)盤(pán)，根據(jù)場(chǎng)區(qū)過(guò)往的發(fā)病歷史繪制發(fā)病日齡圖(如圖23)。大腸桿菌的發(fā)生是有一個(gè)積累的過(guò)程，大腸桿菌發(fā)病早期，臨床癥狀并不明顯，待整個(gè)群體出現(xiàn)明顯癥狀的時(shí)候，豬舍內(nèi)細(xì)菌的含量已經(jīng)十分高了，此時(shí)，即使快速的精準(zhǔn)用藥，豬只依舊會(huì)持續(xù)幾天的高死亡。因此，根據(jù)場(chǎng)區(qū)發(fā)病歷史繪制的發(fā)病日齡圖就可以作為我們的有效工具，觀察場(chǎng)區(qū)在哪一日齡段高發(fā)腹瀉，我們可以在發(fā)病前幾天植入4.1精準(zhǔn)用藥對(duì)于大腸桿菌長(zhǎng)時(shí)間流行的豬場(chǎng)，需要周期性的采集本場(chǎng)腹瀉病料，送就近實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。選擇市面上對(duì)大腸桿菌有抑制殺滅效果的抗生目前，國(guó)家在大力倡導(dǎo)減抗替抗，提前規(guī)劃可以保持企業(yè)在未來(lái)的競(jìng)爭(zhēng)力。噬菌體目前存在的較大問(wèn)題是過(guò)胃困難，可以使用噬菌體+抗生素的方案，相比于單獨(dú)使用噬菌體或者抗生素，效果更優(yōu)。卵黃抗體目前還未有商品化產(chǎn)品，預(yù)計(jì)未來(lái)圖23不同日齡大腸桿菌檢出趨勢(shì)1.都有哪些病毒可導(dǎo)致腹瀉，臨床癥狀有哪些差別?1致病性強(qiáng)死亡率高；2致病性強(qiáng)，死亡率高；3豬輪狀病毒(PoRV)輪狀病毒可分為七個(gè)亞群(A~G),豬主要感染A亞群。A亞群可進(jìn)一步分為G血清型(27個(gè))和P血清型(374PEDV極為相似，只是癥狀5病毒(SADS-CoV)高暫不明確6杯狀病毒(SV)7豬捷申病毒(PTV)的是5型和8型2.豬流行性腹瀉目前是如何分型的?3.豬流行性腹瀉對(duì)各個(gè)日齡段的影響?PEDV可以感染任何日齡、任何工段豬只。PEDV對(duì)7日齡內(nèi)仔豬危害最大，最的采食量。豬腹瀉病綜合防控手冊(cè)豬腹瀉病綜合防控手冊(cè)