江蘇省常熟市2022-2023學(xué)年高二下學(xué)期期中生物試題（含答案）

江蘇省常熟市2022-2023學(xué)年高二下學(xué)期期中生物試題姓名：__________班級(jí)：__________考號(hào)：__________題號(hào)一二三四五總分評(píng)分一、單選題1．紅酸湯是苗族的傳統(tǒng)食品，它顏色鮮紅、氣味清香、味道酸爽，其制作過程類似于泡菜的制作。下圖是以番茄和辣椒為原料的紅酸湯制作流程圖，下列有關(guān)敘述正確的是（）A．紅酸湯中的酸味物質(zhì)主要是醋酸B．裝壇時(shí)不裝滿的原因是為了促進(jìn)微生物的繁殖C．適當(dāng)延長(zhǎng)發(fā)酵時(shí)間能加深酸湯的紅色，增濃酸味D．紅酸湯的制作中隨著發(fā)酵時(shí)間延長(zhǎng)，亞硝酸鹽逐漸積累2．北魏農(nóng)學(xué)巨著《齊民要術(shù)》記載了許多古人在實(shí)際生產(chǎn)中積累的經(jīng)驗(yàn)，也蘊(yùn)藏著眾多生物學(xué)知識(shí)。請(qǐng)閱讀表格中的古籍原文，下列有關(guān)敘述正確的是（）工藝名稱古籍原文釀酒技術(shù)浸曲發(fā)，如魚眼湯，凈淘米八斗，炊作飯，舒令極冷制醋技術(shù)大率酒斗，用水三斗，合甕盛，置日中曝之……七日后當(dāng)臭，衣生，勿得怪也，但停置，勿移動(dòng)，撓攪之。數(shù)十日，醋成腐乳制作技術(shù)豆腐又名菽乳，以豆腐腌過酒糟或醬制者，味咸甘心A．“浸曲發(fā)”時(shí)用的酒曲中含有微生物，其呼吸類型都為兼性厭氧型B．“魚眼湯”是指液面冒出小氣泡的現(xiàn)象，主要由微生物呼吸作用釋放CO2形成C．“衣生”指發(fā)酵液表面形成一層菌膜的現(xiàn)象，主要是酵母菌大量繁殖形成的D．從微生物培養(yǎng)的角度看，豆腐是固體培養(yǎng)基，接種時(shí)需要對(duì)其進(jìn)行嚴(yán)格滅菌3．下表為某培養(yǎng)基的部分配方，下列有關(guān)敘述正確的是（）成分蛋白胨葡萄糖K2HPO4瓊脂F(xiàn)eSO4蒸餾水含量10g10g2g15g0.5g1000mLA．配制培養(yǎng)基、倒平板、接種均需要在酒精燈火焰旁進(jìn)行B．該培養(yǎng)基的有機(jī)碳源包括蛋白胨、葡萄糖和瓊脂C．除去蛋白胨，該培養(yǎng)基可用于選擇培養(yǎng)固氮微生物D．倒好的平板需立即使用，以免表面干燥，影響菌的生長(zhǎng)4．下圖為能分解尿素的微生物的獲取過程，下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）A．①②③的目的是選擇能夠分解尿素的微生物并且增加該微生物的數(shù)量B．過程④需在酒精燈火焰旁進(jìn)行，其中接種環(huán)一共需要灼燒6次C．通過選擇培養(yǎng)得到的不一定都是能夠分解尿素的微生物，所以還需做進(jìn)一步的鑒定D．通過④獲得純種微生物后，再利用涂布平板法接種至試管斜面培養(yǎng)基上進(jìn)行保存5．啤酒的工業(yè)化生產(chǎn)中，大麥經(jīng)發(fā)芽、焙烤、碾磨、糖化、蒸煮、發(fā)酵、消毒等工序后，最終過濾、調(diào)節(jié)、分裝。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）A．用赤霉素處理大麥，可使大麥種子無(wú)須發(fā)芽就能產(chǎn)生a-淀粉酶B．焙烤是為了利用高溫殺死大麥種子胚并進(jìn)行滅菌C．發(fā)酵階段酵母菌不能直接利用淀粉分解為酒精和CO2D．消毒可以殺死啤酒中的大多數(shù)微生物，延長(zhǎng)它的保存期6．下列有關(guān)DNA粗提取及鑒定的操作實(shí)驗(yàn)，敘述錯(cuò)誤的是（）A．新鮮菜花、香蕉、魚白等都可作為粗提取DNA的實(shí)驗(yàn)材料B．離心后取上清液加入體積相等的、預(yù)冷的體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精，目的是析出DNAC．2mol/L的NaCl溶液、體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精與二苯胺試劑的顏色基本相同D．提取到的絲狀物直接與二苯胺試劑充分混勻后沸水浴加熱，冷卻后溶液顏色為藍(lán)色7．下圖1是某基因工程中構(gòu)建重組質(zhì)粒的過程示意圖，其中tetr是四環(huán)素抗性基因、ampr是氨芐青霉素抗性基因。圖2所示為重組質(zhì)粒，甲、乙、丙為3種引物所在的相應(yīng)位置。下列有關(guān)敘述正確的是（）A．質(zhì)粒P1經(jīng)“酶處理”后平末端轉(zhuǎn)變成黏性末端，有利于與目的基因片段的連接B．質(zhì)粒P2和目的基因片段可在DNA聚合酶或DNA連接酶的作用下形成重組質(zhì)粒C．若受體微生物能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，說(shuō)明成功導(dǎo)入了重組質(zhì)粒P3D．用PCR鑒定篩選出的菌落中是否含正確插入目的基因的重組質(zhì)粒，應(yīng)選擇引物甲和丙8．采用基因工程將人凝血因子基因?qū)肷窖蚴芫?，成功培育出了人凝血因子只存在于乳汁中的轉(zhuǎn)基因羊。下列有關(guān)敘述正確的是（）A．可以將人的凝血因子基因直接導(dǎo)入受精卵或乳腺細(xì)胞中B．乳腺生物反應(yīng)器往往不受到羊生長(zhǎng)發(fā)育的階段和性別的限制C．人凝血因子基因只存在于該轉(zhuǎn)基因羊的乳腺細(xì)胞中，而不存在于其他體細(xì)胞中D．需將人凝血因子基因與只在乳腺中特異表達(dá)的基因的啟動(dòng)子等調(diào)控元件重組在一起9．下列有關(guān)PCR的敘述，正確的是（）A．PCR的過程主要包括變性→延伸→復(fù)性，且溫度逐漸降低B．PCR每次循環(huán)都消耗引物和原料，在實(shí)驗(yàn)過程中需要及時(shí)補(bǔ)充C．PCR的原理是DNA半保留復(fù)制，解旋和復(fù)制是同時(shí)進(jìn)行的D．添加反應(yīng)組分時(shí)，每吸取一種試劑都須更換微量移液器上的槍頭10．下列有關(guān)蛋白質(zhì)工程的敘述，正確的是（）A．蛋白質(zhì)工程和基因工程的根本區(qū)別是操作對(duì)象的差異B．當(dāng)前限制蛋白質(zhì)工程發(fā)展的關(guān)鍵因素是基因工程技術(shù)還不成熟C．蛋白質(zhì)工程能定向改造蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)，使之更加符合人類的需要D．蛋白質(zhì)工程中合成所需蛋白質(zhì)的過程中，遺傳信息的流向是相反的11．為建設(shè)美麗鄉(xiāng)村可構(gòu)建人工濕地來(lái)治理生活污水，監(jiān)測(cè)水質(zhì)時(shí)，常檢測(cè)水體中的BOD值（BOD值表示微生物分解單位體積水中有機(jī)物所需的氧氣量），下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）A．流入人工濕地的總能量包括生產(chǎn)者所固定的太陽(yáng)能和生活污水中有機(jī)物中的化學(xué)能B．濕地中放養(yǎng)魚苗、水禽等，種植蓮藕、蘆葦?shù)?，增加了生態(tài)系統(tǒng)的抵抗力穩(wěn)定性C．分解污水中有機(jī)物的微生物種類有好氧型、厭氧型、兼性厭氧型等D．BOD值越低，表明生活污水中的有機(jī)物污染程度越高，水質(zhì)越差12．造林和再造林在緩解全球氣候變化方面發(fā)揮著重要作用。森林成長(zhǎng)過程中，樹木的生長(zhǎng)與土壤有機(jī)碳儲(chǔ)量的增加，是陸地生態(tài)系統(tǒng)重要的碳匯。某研究團(tuán)隊(duì)采用新造林、封山育林和補(bǔ)植套種3種造林模式進(jìn)行造林，不同造林模式的土壤碳含量如下表所示，下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）造林前土壤碳含量（MgC/hm2）造林5年后土壤碳含量（MgC/hm2）造林模式0-20cm20-40cm40-60cm0-20cm20-40cm40-60cm新造林4.742.351.283.882.181.18封山育林3.042.062.145.043.54.46補(bǔ)植套種4.583.652.757.606.284.70A．各造林模式在造林前后0-20cm土層土壤碳含量最高B．與補(bǔ)植套種造林模式相比，新造林的土壤碳匯效益更顯著C．通過恢復(fù)森林發(fā)展碳匯林業(yè)，改變了群落演替的方向，也加快了演替的速度D．新造林模式造林后0-20cm土壤碳含量減少，與新造林大多處于幼林且枯落物少有關(guān)13．生態(tài)浮床是將經(jīng)過篩選的水生或半水生植物栽植于浮床上，如下圖所示，下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）A．通過植物根系大量吸收N、P等元素，可減少水體富營(yíng)養(yǎng)化B．為了防止浮床中富集的N、P重新進(jìn)入水體，應(yīng)該定期收割浮床上的植物C．生態(tài)浮床的應(yīng)用體現(xiàn)了生物多樣性的直接價(jià)值大于其間接價(jià)值D．生態(tài)浮床可以增加生態(tài)系統(tǒng)的營(yíng)養(yǎng)結(jié)構(gòu)，提高生態(tài)系統(tǒng)的自我調(diào)節(jié)能力14．為保護(hù)生物多樣性，拯救長(zhǎng)江水域的江豚等瀕危物種，我國(guó)自2021年1月1日零時(shí)起實(shí)施長(zhǎng)江十年禁漁計(jì)劃。下列措施與該計(jì)劃的目標(biāo)不符的是（）A．管控船舶進(jìn)出禁漁區(qū)域，以減少對(duì)水生生物的干擾B．對(duì)禁漁區(qū)域定期開展抽樣調(diào)查，以評(píng)估物種資源現(xiàn)狀C．建立江豚的基因庫(kù)，以保護(hù)江豚遺傳多樣性D．清理淤泥、疏浚河道，以拓展水生動(dòng)物的生存空間二、多選題15．某同學(xué)選用新鮮成熟的葡萄制作果酒和果醋，下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）A．用帶蓋瓶子制作葡萄酒時(shí)，擰松瓶蓋的間隔時(shí)間不一定相同B．果酒制成后適當(dāng)提高溫度，并不斷通入無(wú)菌空氣即可生產(chǎn)果醋C．果醋發(fā)酵時(shí)，發(fā)酵液產(chǎn)生的氣泡量明顯少于果酒發(fā)酵時(shí)D．醋酸菌在氧氣充足時(shí)將糖分解成醋酸，當(dāng)缺少氧氣時(shí)將乙醇轉(zhuǎn)變?yōu)橐宜?6．利用生物技術(shù)可將廢水、廢料變廢為寶，下圖為某工廠利用果糖生產(chǎn)廢水和沼氣池廢料生產(chǎn)蛋白質(zhì)的技術(shù)路線圖，下列有關(guān)敘述正確的是（）A．沼氣池廢料在加入反應(yīng)器之前可不進(jìn)行滅菌處理B．該生產(chǎn)過程中，一定有二氧化碳等氣體生成C．圖中微生物生長(zhǎng)所需的碳源主要來(lái)源于果糖生產(chǎn)廢水D．通過上述發(fā)酵過程可以從酵母菌細(xì)胞中提取單細(xì)胞蛋白17．在基因工程中，可采用花粉管通道法將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞。下列有關(guān)花粉管通道法的敘述正確的是（）A．最終獲得的種子不一定含有目的基因B．植物生長(zhǎng)各個(gè)時(shí)期均可通過花粉管通道導(dǎo)入外源DNAC．花粉管通道法最大的優(yōu)點(diǎn)是無(wú)需植物組織培養(yǎng)，技術(shù)相對(duì)簡(jiǎn)單D．含外源DNA的種子發(fā)育成植株后均具有相應(yīng)性狀18．蜘蛛絲（絲蛋白）被稱為“生物鋼”，有著超強(qiáng)的抗張強(qiáng)度，下圖為蛛絲蛋白基因?qū)?yīng)的DNA片段結(jié)構(gòu)示意圖，其中1~4表示DNA上引物可能結(jié)合的位置，目前利用現(xiàn)代生物技術(shù)生產(chǎn)蜘蛛絲已取得成功。下列有關(guān)敘述正確的是（）A．若從該DNA片段中直接獲取蛛絲蛋白基因，會(huì)破壞4個(gè)磷酸二酯鍵B．若用PCR技術(shù)獲取目的基因，則圖中的2、3分別是2種引物結(jié)合的位置C．若受體細(xì)胞為大腸桿菌，則蛛絲蛋白的加工需要細(xì)胞中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體的參與D．在PCR儀中根據(jù)選定的引物至少需經(jīng)過6次循環(huán)才可獲得32個(gè)符合要求的目的基因19．2022年2月冬奧會(huì)在國(guó)家體育館等場(chǎng)所使用了無(wú)水免沖智慧生態(tài)廁所。該款廁所利用微生物降解技術(shù)，全程不用水且無(wú)臭無(wú)味。經(jīng)降解的排泄物最終會(huì)變成有機(jī)肥料，實(shí)現(xiàn)資源再利用。這項(xiàng)“黑科技”中，小小的微生物起了大作用，下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）A．“智慧生態(tài)廁所”將排泄物發(fā)酵成有機(jī)肥料供農(nóng)業(yè)種植使用，實(shí)現(xiàn)了能量的循環(huán)利用B．“智慧生態(tài)廁所”在選擇菌種時(shí)僅需考慮循環(huán)、協(xié)調(diào)的原理即可C．可用硝化細(xì)菌除臭的原因是它能將有臭味的硝酸鹽等物質(zhì)氧化為無(wú)味的產(chǎn)物D．高效降解菌種的篩選需要用到微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的技術(shù)，還需要基因工程等現(xiàn)代技術(shù)三、綜合題20．牛和羊的瘤胃中生活著多種微生物，其中許多微生物能分解尿素。某研究小組欲·從瘤胃內(nèi)篩選出能高效降解尿素的細(xì)菌，設(shè)計(jì)了如下實(shí)驗(yàn)。請(qǐng)分析并回答下列問題。實(shí)驗(yàn)步驟：I．取樣：從剛宰殺的牛的瘤胃中取樣，將樣品裝入事先滅過菌的錐形瓶中。Ⅱ．培養(yǎng)基的配制和滅菌：配制全營(yíng)養(yǎng)LB固體培養(yǎng)基。配方：水、蛋白陳，酵母提取物，NaCl，瓊脂糖（一種凝固劑）。配制尿素固體培養(yǎng)基。配方：水、葡萄糖，NaCl，K2HPO4，尿素，瓊脂糖。Ⅲ．制備瘤胃稀釋液并接種，如下圖1所示。IV．在無(wú)氧條件下進(jìn)行微生物的培養(yǎng)、觀察與計(jì)數(shù)。（1）全營(yíng)養(yǎng)LB固體培養(yǎng)基和尿素固體培養(yǎng)基都含有微生物生長(zhǎng)所需的基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：。（2）該小組采用稀釋涂布平板法對(duì)瘤胃中分解尿素的細(xì)菌進(jìn)行分離和計(jì)數(shù)。在無(wú)菌條件下，利用稀釋涂布平板法進(jìn)行分離，需要用到圖2中的實(shí)驗(yàn)器材有。（3）為檢測(cè)該培養(yǎng)基滅菌是否徹底，應(yīng)采用的檢測(cè)方法是。為了判斷尿素培養(yǎng)基是否具有選擇作用，實(shí)驗(yàn)時(shí)還需要同時(shí)接種全營(yíng)養(yǎng)平板，如果同一濃度梯度下，尿素培養(yǎng)基上的菌落數(shù)（“大于”、“等于”或“小于”）全營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基上的菌落數(shù)，則說(shuō)明尿素培養(yǎng)基具有選擇作用。（4）為了避免混淆，本實(shí)驗(yàn)中使用的平板需要在培養(yǎng)皿的（“皿蓋”或“皿底”）做好標(biāo)記。然后在30～37℃的恒溫培養(yǎng)箱中需培養(yǎng)1-2d，每隔24h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，選擇菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果，其目的是。（5）若將最后一個(gè)試管中的稀釋液分別涂布到3個(gè)尿素平板上培養(yǎng)，培養(yǎng)后平板上出現(xiàn)的菌落數(shù)如圖1所示，則10mL瘤胃樣品中含有目標(biāo)活菌數(shù)約為。該方法統(tǒng)計(jì)獲得的菌落數(shù)比實(shí)際的活菌數(shù)，原因是。四、實(shí)驗(yàn)題21．菜傳統(tǒng)自然發(fā)酵方式的發(fā)酵周期相對(duì)較長(zhǎng)，生產(chǎn)效率低。研究人員欲從泡菜中分離篩選出高產(chǎn)酸乳酸菌，為泡菜工廠化生產(chǎn)提供依據(jù)。請(qǐng)分析并回答下列問題。（1）配制CaCO3MRS培養(yǎng)基。成分：蛋白胨、牛肉膏、酵母粉、磷酸氫二鉀、葡萄糖、瓊脂粉、碳酸鈣等。①根據(jù)物理性質(zhì)分類，該培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)基，為乳酸菌提供氮源的成分有。②培養(yǎng)過程中，乳酸菌會(huì)產(chǎn)生乳酸溶解碳酸鈣，形成溶鈣圈，便于。（2）高產(chǎn)乳酸菌的培養(yǎng)與分離，其部分實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c具體操作如下所示：實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮?jiǎn)要操作過程①在無(wú)菌條件下取樣品中泡菜汁1mL，加入9mL無(wú)菌水進(jìn)行10倍稀釋，依次稀釋102、103、104、105、106、107倍。接種培養(yǎng)取上述稀釋液1mL分別加入無(wú)菌培養(yǎng)皿中，然后將CaCO3MRS培養(yǎng)基澆注混勻冷凝后，將培養(yǎng)皿②，并連續(xù)培養(yǎng)48h。分離純化挑?、圻M(jìn)行平板劃線培養(yǎng)。長(zhǎng)期保存將菌種加入30%的甘油中在-20℃保存。（3）上述實(shí)驗(yàn)中用先將稀釋液加入無(wú)菌培養(yǎng)皿再澆筑冷卻但未凝固的培養(yǎng)基的方法來(lái)培養(yǎng)乳酸菌，而非將樣品稀釋液直接涂布在培養(yǎng)基的表面，這么做的原因是。（4）高產(chǎn)酸乳酸菌發(fā)酵效果檢測(cè)，研究人員研究了兩種高產(chǎn)酸乳酸菌（乳酸菌A50f7和A50b9）在發(fā)酵泡菜過程中pH的變化，結(jié)果如圖所示。據(jù)圖分析該研究實(shí)驗(yàn)的自變量是。（5）由圖可知，接種兩種乳酸菌效果相近，其相近之處表現(xiàn)為。五、綜合題22．下圖是將乙肝病毒表面主蛋白基因HBsAg導(dǎo)入巴斯德畢赤酵母菌生產(chǎn)乙肝疫苗的過程示意圖。巴斯德畢赤酵母菌是一種甲基營(yíng)養(yǎng)型酵母，能將甲醇作為其唯一碳源，此時(shí)AOX1基因受到誘導(dǎo)而表達(dá)，圖中pPIC9K質(zhì)粒上5'AOX1和3'AOX1（TT）分別是基因AOX1的啟動(dòng)子和終止子。該酵母菌體內(nèi)無(wú)天然質(zhì)粒，科學(xué)家改造出了圖1所示質(zhì)粒用作載體，其與目的基因形成的重組質(zhì)粒經(jīng)酶切后可以與酵母菌染色體發(fā)生同源重組，將目的基因整合于染色體中以實(shí)現(xiàn)表達(dá)。請(qǐng)分析并回答下列問題。（1）為實(shí)現(xiàn)HBsAg基因和pPIC9K質(zhì)粒重組，設(shè)計(jì)引物時(shí)需要在引物的端添加相應(yīng)①限制酶的識(shí)別序列，則在HBsAg基因兩側(cè)的A和B位置添加的堿基序列分別是、，這樣設(shè)計(jì)與只添加同一種堿基序列相比的優(yōu)點(diǎn)是。（2）酶切獲取HBsAg基因后，需用（填“E．coliDNA連接酶”或“T4DNA連接酶”）．將其連接到pPIC9K質(zhì)粒上，形成重組質(zhì)粒，構(gòu)建重組質(zhì)粒的目的是。（3）若用限制酶SnaBI、BglⅡ聯(lián)合酶切pPIC9K質(zhì)粒，獲得的DNA片段按順時(shí)針方向，依次分別是42kb、26kb、68kb；用限制酶BglⅡ、AvrⅡ聯(lián)合酶切pPIC9K質(zhì)粒，得到的DNA片段按順時(shí)針方向，依次是42kb、40kb、54kb；已知HBsAg基因長(zhǎng)度是60kb。步驟3中應(yīng)選用限制酶來(lái)切割重組質(zhì)粒以獲得重組DNA，切割后的重組DNA的長(zhǎng)度是。（4）轉(zhuǎn)化的酵母菌在培養(yǎng)基上培養(yǎng)一段時(shí)間后，需要向其中加入甲醇，其目的是。23．新冠病毒是一種單鏈RNA病毒，常用“熒光RT-PCR技術(shù)”（實(shí)時(shí)熒光逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）進(jìn)行檢測(cè)，如圖1所示。該過程中當(dāng)TaqMan探針完整時(shí)，熒光基團(tuán)（R）發(fā)出的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)（Q）吸收而不發(fā)熒光；當(dāng)探針?biāo)忉尫懦鲇坞x的R和Q，R發(fā)出的熒光信號(hào)被相應(yīng)儀器檢測(cè)到，熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物數(shù)量完全同步。請(qǐng)分析并回答下列問題。（1）“熒光RT-PCR技術(shù)”所用的試劑盒中應(yīng)該含有：檢測(cè)者mRNA、熒光標(biāo)記的新冠病毒核酸探針、、、、2種引物、含（離子）的緩沖體系。（2）PCR循環(huán)中，加入的引物作用是。引物、探針與模板結(jié)合發(fā)生在階段。探針核苷酸序列的設(shè)計(jì)依據(jù)是（3）每擴(kuò)增一個(gè)DNA便釋放一個(gè)熒光信號(hào)，從而實(shí)現(xiàn)熒光信號(hào)的積累與PCR產(chǎn)物的完全同步。最終可以得到一條熒光擴(kuò)增曲線，如圖2所示。熒光一般要達(dá)到或超過閾值時(shí)才確診為感染了新冠病毒?，F(xiàn)有甲、乙兩個(gè)待檢樣本，檢測(cè)時(shí)都出現(xiàn)了圖示形態(tài)的曲線，但甲的a點(diǎn)比乙的a點(diǎn)明顯左移。在試劑盒合格且正常，操作過程規(guī)范且準(zhǔn)確的前提下，該現(xiàn)象出現(xiàn)的原因是甲樣本中的新冠病毒含量較，達(dá)到閾值所需的循環(huán)數(shù)更（4）常采用來(lái)鑒定PCR的產(chǎn)物，設(shè)置如下：1號(hào)泳道為標(biāo)準(zhǔn)（Marker），2號(hào)泳道為陽(yáng)性對(duì)照組，3號(hào)泳道為實(shí)驗(yàn)組。圖3中3號(hào)泳道出現(xiàn)雜帶，原因一般有（至少寫出2點(diǎn)）24．下圖為某一陸地生態(tài)系統(tǒng)的碳循環(huán)示意圖。在不考慮砍伐、火災(zāi)、病蟲害等情況下，凈生態(tài)系統(tǒng)生產(chǎn)力（NEP）可以近似看作是陸地生態(tài)系統(tǒng)與大氣間的凈碳交換量（碳收入和碳支出的差值），NEP是衡量陸地生態(tài)系統(tǒng)碳源分布的重要指標(biāo)。請(qǐng)回答下列問題；（1）據(jù)圖分析，植物一年內(nèi)用于生長(zhǎng)、發(fā)育和繁殖等生命活動(dòng)的能量為tC/a。如果考慮人類生產(chǎn)活動(dòng)影響等因素，則該生態(tài)系統(tǒng)的NEP是（填“正值”或“負(fù)值”）。（2）我國(guó)已將碳達(dá)峰、碳中和納入生態(tài)文明建設(shè)整體布局，確定了2030年前實(shí)現(xiàn)碳達(dá)峰、2060年前實(shí)現(xiàn)碳中和的目標(biāo)。北京冬奧會(huì)打造了首個(gè)真正實(shí)現(xiàn)“碳中和”目標(biāo)的奧運(yùn)會(huì)。①冬奧核心區(qū)綠化造林成活率達(dá)99%以上，森林覆蓋率達(dá)到80%以上。冬奧核心區(qū)造林的樹種多以本地樹種為主，宜喬則喬，宜灌則灌?！耙藛虅t喬，宜灌則灌”主要涉及生態(tài)系統(tǒng)的）原理。森林為人類提供了豐富的自然資源，還有涵養(yǎng)水源、保持水土等功能，說(shuō)明森林在保護(hù)生物多樣性方面具有價(jià)值。②北京冬奧會(huì)嚴(yán)格做好垃圾分類和處理，專用餐具加入微生物后直接變成水和氣體，參與此過程的微生物在生態(tài)系統(tǒng)成分中屬于。若廢舊電池中的重金屬離子等物質(zhì)進(jìn)入土壤后會(huì)被植物吸收，沿逐級(jí)積累，最后可能進(jìn)入人體；若抗生素類的藥物進(jìn)入土壤后會(huì)殺死土壤中的部分細(xì)菌，破壞土壤生態(tài)平衡。廢舊電池、過期藥物應(yīng)投入（填“紅色”“藍(lán)色”“綠色”“黑色”）垃圾回收箱中。（3）下列對(duì)“碳循環(huán)”“碳達(dá)峰”“碳中和”的敘述，正確的有（填序號(hào)）。①碳達(dá)峰是CO2排放量由增轉(zhuǎn)降的歷史轉(zhuǎn)折點(diǎn)②碳中和是指多種方式達(dá)到CO2相對(duì)“零排放”③碳循環(huán)過程中，無(wú)機(jī)環(huán)境中的碳可以被生物群落反復(fù)利用④控制生物體呼吸產(chǎn)生的CO2量是實(shí)現(xiàn)碳中和的重要措施（4）為實(shí)現(xiàn)“碳中和”，我們應(yīng)該大力推廣（從不同角度寫出兩點(diǎn)）。

答案解析部分1．【答案】C【解析】【解答】A、紅酸湯制作過程中用到的微生物主要是乳酸菌，產(chǎn)生的是乳酸，A錯(cuò)誤；

B、裝壇時(shí)壇口留有一點(diǎn)空間而不裝滿的目的是防止番茄發(fā)酵后液體膨脹外溢，B錯(cuò)誤；

C、適當(dāng)延長(zhǎng)發(fā)酵時(shí)間能加深酸湯的紅色，乳酸含量也會(huì)增加，增濃酸味，C正確；

D、亞硝酸鹽含量隨著發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)而先增加后減少，D錯(cuò)誤。故答案為：C。

【分析】紅酸湯制作需要用到乳酸菌，乳酸菌是一種厭氧菌，在無(wú)氧的條件下，乳酸菌發(fā)酵產(chǎn)生乳酸，使得菜品有一股特別的風(fēng)味提升菜品的口感。2．【答案】B【解析】【解答】A、酵母菌的呼吸類型為兼性厭氧型，但“浸曲發(fā)”時(shí)用的酒曲中，利用的是酵母菌酒精發(fā)酵，此時(shí)酵母菌的呼吸類型為厭氧型，A錯(cuò)誤；

B、“魚眼湯”是指酵母菌在呼吸過程中產(chǎn)生CO2，使溶液中出現(xiàn)氣泡，B正確；

C、醋酸菌可將乙醇變?yōu)橐胰?，再將乙醛變?yōu)榇姿?，?huì)在變酸的酒的表面大量繁殖形成榮膜，所以“衣生”指發(fā)酵液表面形成層菌膜的現(xiàn)象，主要是醋酸菌大量繁殖形成的，C錯(cuò)誤；

D、傳統(tǒng)的腐乳制作時(shí)一般是利用空氣中的毛霉等微生物進(jìn)行發(fā)酵，對(duì)豆腐本身不用嚴(yán)格滅菌，D錯(cuò)誤。故答案為：B。

【分析】1、果酒的制作離不開酵母菌，酵母菌是兼性厭氧型生物，在有氧條件下，酵母菌進(jìn)行有氧呼吸，大量繁殖，在無(wú)氧條件下，酵母菌進(jìn)行酒精發(fā)酵。溫度是酵母菌生長(zhǎng)和發(fā)酵的重要條件，20℃左右，酒精發(fā)酵時(shí)，一般將溫度控制在18~25℃，在葡萄酒自然發(fā)酵過程當(dāng)中，其主要作用的是附著在葡萄皮上的野生酵母菌。

2、醋酸菌是一種好氧細(xì)菌，只有當(dāng)氧氣充足時(shí)，才能進(jìn)行旺盛的生理活動(dòng)。醋酸菌對(duì)氧氣的含量特別敏感，當(dāng)進(jìn)行深層發(fā)酵時(shí)，即使只是短時(shí)間中斷通入氧氣，也會(huì)引起醋酸菌死亡。當(dāng)氧氣、糖源都充足時(shí)，醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸；當(dāng)缺少糖源時(shí)，醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰?，再將乙醛變?yōu)榇姿?。醋酸菌的最適生長(zhǎng)溫度為30~35℃。

3、腐乳制作的原理是利用毛霉等微生物在有氧條件下發(fā)酵，將蛋白質(zhì)水解成氨基酸和小分子肽，將脂肪水解成甘油和脂肪酸。3．【答案】C【解析】【解答】A、培養(yǎng)基配制好后需要進(jìn)行滅菌，故配制培養(yǎng)基過程不需要在酒精燈火焰旁進(jìn)行，A錯(cuò)誤；

B、瓊脂只是凝固劑，不是碳源，B錯(cuò)誤；

C、除去蛋白胨，該培養(yǎng)基就是無(wú)氮培養(yǎng)基，只有利用空氣中的氮?dú)庾鳛榈吹墓痰⑸锬軌蛟谏厦嫔L(zhǎng)，C正確；

D、倒好的平板要等冷卻凝固后再使用，D錯(cuò)誤。故答案為：C。

【分析】培養(yǎng)基為微生物提供生長(zhǎng)、繁殖和積累代謝產(chǎn)物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)歸納為碳源、氨源、生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽和水。培養(yǎng)基按物理性質(zhì)可分為固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基，液體培養(yǎng)基中加入凝固劑可以制成固體培養(yǎng)基；固體培養(yǎng)基一般用于微生物的鑒別、分離和計(jì)數(shù)，液態(tài)培養(yǎng)基常用于擴(kuò)大化生產(chǎn)，觀察細(xì)菌運(yùn)動(dòng)。根據(jù)化學(xué)成分分為合成培養(yǎng)基、天然培養(yǎng)基等；根據(jù)用途分為選擇培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基。4．【答案】D【解析】【解答】A、①②③是選擇性富集培養(yǎng)，目的是選擇能夠分解尿素的微生物并且增加該微生物的數(shù)量，A正確；

B、過程④需在酒精燈火焰旁進(jìn)行，以免造成污染，接種前后接種環(huán)均要進(jìn)行灼燒滅菌，共接種5次，需要灼燒6次，B正確；

C、通過選擇培養(yǎng)得到的不一定都是能夠分解尿素的微生物，比如能利用空氣中氮源的固氮微生物，所以還需根據(jù)菌落特征等做進(jìn)一步的鑒定，C正確；

D、獲得純種微生物后，利用劃線分離法接種至斜面培養(yǎng)基上，進(jìn)行低溫保存，D錯(cuò)誤。故答案為：D。

【分析】平板劃線法操作步驟：①將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)燒紅；②在火焰旁冷卻接種環(huán)，并打開棉塞；③將試管口通過火焰；④將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中蘸取一環(huán)菌液；⑤將試管通過火焰，并塞上棉塞；⑥左手將皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋。注意不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)皿；⑦灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一區(qū)域劃線的末端開始往第二區(qū)域內(nèi)劃線。重復(fù)以上操作，在三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。注意不要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連；⑧將平板倒置放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。5．【答案】B【解析】【解答】A、用赤霉素處理大麥，可誘導(dǎo)a-淀粉酶相關(guān)基因的表達(dá)，促進(jìn)a-淀粉酶的合成，進(jìn)而使大麥種子無(wú)須發(fā)芽就能產(chǎn)生a-淀粉酶，A正確；

B、焙烤可以殺死大麥種子的胚，但不使淀粉酶失活，沒有進(jìn)行滅菌，B錯(cuò)誤；

C、因酵母菌不能直接利用淀粉，使用淀粉含量豐富的大麥為發(fā)酵原料時(shí)，需先糖化使淀粉分解成單糖，C正確；

D、裝瓶前要進(jìn)行消毒的目的是殺死啤酒中的大多數(shù)微生物，以延長(zhǎng)它的保存期，D正確。故答案為：B。

【分析】啤酒發(fā)酵過程分為主發(fā)酵和后發(fā)酵兩個(gè)階段。酵母菌的繁殖、大部分糖的分解和代謝物的生成都在主發(fā)酵階段完成。主發(fā)酵結(jié)束后，發(fā)酵液還不適合飲用，要在低溫、密閉的環(huán)境下儲(chǔ)存一段時(shí)間進(jìn)行后發(fā)酵，這樣才能形成澄清、成熟的啤酒。6．【答案】D【解析】【解答】A、菜花、香蕉、魚白(魚的精巢)等均含有DNA，可作為提取DNA的材料，處理方法有所不同，動(dòng)物細(xì)胞需要加蒸餾水使細(xì)胞吸水漲破，植物細(xì)胞需要加洗滌劑和食鹽研磨，A正確；

B、DNA不溶于酒精，細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)可溶于酒精，因此離心后取上清液加入等體積的冷酒精進(jìn)行DNA的粗提取，B正確；

C、2mol/L的NaCl溶液、體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精與二苯胺試劑的顏色基本相同，均為無(wú)色透明液體，C正確；

D、需將提取的絲狀物加入2mol/L的NaCl溶液中溶解，再加入二苯胺試劑，混勻后將試管置于沸水中水浴加熱5min，指示劑將變藍(lán)，D錯(cuò)誤。故答案為：D。

【分析】DNA粗提取和鑒定過程：1、實(shí)驗(yàn)材料的選?。悍彩呛蠨NA的生物材料都可以考慮，但是使用DNA含量相對(duì)較高的生物組織，成功的可能性更大；

2、破碎細(xì)胞，獲取含DNA的濾液：動(dòng)物細(xì)胞的破碎比較容易，以雞血細(xì)胞為例，在雞血細(xì)胞液中加入一定量的蒸餾水，同時(shí)用玻璃棒攪拌，過濾后收集濾液即可。如果實(shí)驗(yàn)材料是植物細(xì)胞，需要先用洗滌劑溶解細(xì)胞膜。例如，提取洋蔥的DNA時(shí)，在切碎的洋蔥中加入一定的洗滌劑和食鹽，進(jìn)行充分的攪拌和研磨，過濾后收集研磨液；

3、去除濾液中的雜質(zhì)：方案一的原理是DNA在不同濃度NaCI溶液中溶解度不同；方案二的原理是蛋白酶分解蛋白質(zhì)，不分解DNA；方案三的原理是蛋白質(zhì)和DNA的變性溫度不同；方案二是利用蛋白酶分解雜質(zhì)蛋白，從而使提取的DNA與蛋白質(zhì)分開；方案三利用的是DNA和蛋白質(zhì)對(duì)高溫耐受性的不同，從而使蛋白質(zhì)變性，與DNA分離；

4、DNA的析出與鑒定：（1）將處理后的溶液過濾，加入與濾液體積相等、冷卻的酒精溶液，靜置2~3min，溶液中會(huì)出現(xiàn)白色絲狀物，這就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一個(gè)方向攪拌，卷起絲狀物，并用濾紙吸取上面的水分；（2）取兩支20mL的試管，各加入物質(zhì)的量濃度為2mol/L的NaCI溶液5mL，將絲狀物放入其中一支試管中，用玻璃棒攪拌，使絲狀物溶解.然后，向兩支試管中各加入4mL的二苯胺試劑?；旌暇鶆蚝螅瑢⒃嚬苤糜诜兴屑訜?min，待試管冷卻后，比較兩支試管溶液顏色的變化，看看溶解有DNA的溶液是否變藍(lán)。7．【答案】A【解析】【解答】A、質(zhì)粒P1經(jīng)“酶處理”后由平末端轉(zhuǎn)變成黏性末端，黏性末端游離，易于互補(bǔ)末端碰撞，因此能提高目的基因片段和質(zhì)粒的連接效率，A正確；

B、質(zhì)粒P2和目的基因片段可在DNA連接酶的作用下形成重組質(zhì)粒，這里不需要DNA聚合酶，B錯(cuò)誤；

C、圖示的質(zhì)粒均含有抗氨芐青霉素的基因，因此，若受體微生物能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，則不能說(shuō)明成功導(dǎo)入了重組質(zhì)粒P3，C錯(cuò)誤；

D、用PCR鑒定篩選出的菌落中是否含正確插入目的基因的重組質(zhì)粒，應(yīng)選擇引物乙和丙即可，因?yàn)镻CR擴(kuò)增的DNA片段是引物之間的序列，擴(kuò)增乙和丙之間的序列就包含了目的基因，因而沒有必要擴(kuò)增更長(zhǎng)的序列，D錯(cuò)誤。故答案為：A。

【分析】基因表達(dá)載體的構(gòu)建：（1）過程：用同一種限制酶切割目的基因和運(yùn)載體，再用DNA連接酶將目的基因和運(yùn)載體連接形成重組DNA分子。（2）目的：使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并且可以遺傳給下一代并表達(dá)和發(fā)揮作用。（3）基因表達(dá)載體的組成：目的基因+啟動(dòng)子+終止子+標(biāo)記基因。①啟動(dòng)子在基因的首段，它是RNA聚合酶的結(jié)合位點(diǎn)，能控制著轉(zhuǎn)錄的開始；②終止子在基因的尾端，它控制著轉(zhuǎn)錄的結(jié)束；③標(biāo)記基因便于目的基因的鑒定和篩選。8．【答案】D【解析】【解答】A、由于單獨(dú)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞，目的基因在受體細(xì)胞中無(wú)法穩(wěn)定存在和自我復(fù)制，故需要構(gòu)建質(zhì)粒載體才能導(dǎo)入受體細(xì)胞，A錯(cuò)誤；

B、需雌性山羊發(fā)育到一定階段才能產(chǎn)生乳汁，乳腺生物反應(yīng)器往往受羊生長(zhǎng)發(fā)育的階段和性別的限制，B錯(cuò)誤；

C、人凝血因子基因存在于該轉(zhuǎn)基因羊所有細(xì)胞中，只是在乳腺細(xì)胞中選擇性表達(dá)，C錯(cuò)誤；

D、需將人凝血因子基因與只在乳腺中特異表達(dá)的基因的啟動(dòng)子等調(diào)控元件重組在一起，以保證人凝血因子能在乳腺中正常表達(dá)，D正確。故答案為：D。

【分析】轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)藥物：

(1)基因來(lái)源：藥用蛋白基因+乳腺組織特異性表達(dá)的啟動(dòng)子(原理：基因的選擇性表達(dá))。

(2)成果：乳腺生物反應(yīng)器。

(3)過程：將藥物蛋白基因與乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子等調(diào)控組件重組在一起，導(dǎo)入哺乳動(dòng)物的受精卵中，最終培育的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物進(jìn)入泌乳期后，可以通過分泌的乳汁產(chǎn)生所需要的藥物。

(4)只有在產(chǎn)下雌性動(dòng)物個(gè)體中，轉(zhuǎn)入的基因才能表達(dá)。9．【答案】D【解析】【解答】A、PCR的過程主要包括高溫變性→低溫復(fù)性→中溫延伸，可見溫度并不是逐漸降低的，A錯(cuò)誤；

B、PCR技術(shù)中的引物和原料是一次性添加的，不需要補(bǔ)充，B錯(cuò)誤；

C、PCR的原理是DNA復(fù)制，PCR操作過程中，先解旋，后復(fù)制，解旋和復(fù)制不是同時(shí)進(jìn)行的，C錯(cuò)誤；

D、在微量離心管中添加反應(yīng)成分時(shí)，每吸取一種試劑后，移液器上的槍頭都必須更換，避免造成污染，D正確。故答案為：D。

【分析】PCR技術(shù)

（1）概念：PCR全稱為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定DNA的核酸合成技術(shù)。

（2）原理：DNA復(fù)制。

（3）前提：要有一段已知目的基因的核苷酸序列以便合成一對(duì)引物。

（4）條件：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對(duì)引物、熱穩(wěn)定DNA聚臺(tái)酶(Taq酶)。

（5）過程：①高溫變性：DNA解旋過程；②低溫復(fù)性：引物結(jié)合到互補(bǔ)鏈DNA上；③中溫延伸：合成子鏈。PCR擴(kuò)増中雙鏈DNA解開不需要解旋酶，高溫條件下氫鍵可自動(dòng)解開。10．【答案】C【解析】【解答】A、蛋白質(zhì)工程和基因工程的操作對(duì)象都是基因，A錯(cuò)誤；

B、當(dāng)前限制蛋白質(zhì)工程發(fā)展的關(guān)鍵因素是人們對(duì)蛋白質(zhì)的高級(jí)結(jié)構(gòu)了解太少，B錯(cuò)誤；

C、蛋白質(zhì)工程能按照人們的意愿定向改造蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)，使之更加符合人類需要，C正確；

D、蛋白質(zhì)工程中合成所需蛋白質(zhì)的過程中，遺傳信息的流向是相同的，D錯(cuò)誤。故答案為：C。

【分析】蛋白質(zhì)工程的實(shí)質(zhì)是：改造基因。蛋白質(zhì)工程的過程：根據(jù)中心法則逆推以確定目的基因的堿基序列：預(yù)期蛋白質(zhì)功能→設(shè)計(jì)預(yù)期蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測(cè)應(yīng)有氨基酸序列→找到對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列；進(jìn)行基因修飾或基因合成；最終還是回到基因工程上來(lái)解決蛋白質(zhì)的合成問題。因此，蛋白質(zhì)工程生產(chǎn)合成的蛋白質(zhì)是自然界中不存在的新型蛋白質(zhì)分子。11．【答案】D【解析】【解答】A、人工濕地有生活污水(污水中含有機(jī)物)流入，所以流入人工濕地的總能量包括生產(chǎn)者所固定的太陽(yáng)能和生活污水中有機(jī)物中的化學(xué)能，A正確；

B、濕地中放養(yǎng)魚苗、水禽等，種植蓮藕、蘆葦?shù)仍黾恿藸I(yíng)養(yǎng)結(jié)構(gòu)的復(fù)雜程度，所以增加了生態(tài)系統(tǒng)的抵抗力穩(wěn)定性，B正確；

C、分解污水中有機(jī)物的微生物種類繁多，異化作用可包括有好氧型、厭氧型、兼性厭氧型等，C正確；

D、BOD值表示微生物分解單位體積水中有機(jī)物所需的氧氣量，生活污水中的有機(jī)物越多，消耗氧氣量越多，BOD值越高，表明污染程度越高，D錯(cuò)誤。故答案為：D。

【分析】1、生態(tài)系統(tǒng)中能量的輸入、傳遞、轉(zhuǎn)化和散失的過程，稱為生態(tài)系統(tǒng)的能量流動(dòng)。生態(tài)系統(tǒng)能量流動(dòng)的起點(diǎn)是生產(chǎn)者，因此輸入生態(tài)系統(tǒng)的總能量是生產(chǎn)者光合作用固定的太陽(yáng)能。能量流動(dòng)的特點(diǎn)是單向流動(dòng)，逐級(jí)遞減。

2、生態(tài)系統(tǒng)所具有的保持或恢復(fù)自身結(jié)構(gòu)和功能相對(duì)穩(wěn)定的能力，稱為生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定性；生態(tài)系統(tǒng)之所以能維持相對(duì)穩(wěn)定，是由于生態(tài)系統(tǒng)具有自我調(diào)節(jié)能力，該能力的基礎(chǔ)是負(fù)反饋調(diào)節(jié)；物種數(shù)目越多，營(yíng)養(yǎng)結(jié)構(gòu)越復(fù)雜，自我調(diào)節(jié)能力越大，抵抗力穩(wěn)定性越高；而恢復(fù)力穩(wěn)定性則是生態(tài)系統(tǒng)被破壞后恢復(fù)原狀的能力，恢復(fù)力穩(wěn)定性的大小和抵抗力穩(wěn)定性的大小往往存在著相反的關(guān)系。生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定性具有相對(duì)性，當(dāng)受到大規(guī)模干擾或外界壓力超過該生態(tài)系統(tǒng)自身更新和自我調(diào)節(jié)能力時(shí)，便可導(dǎo)致生態(tài)系統(tǒng)穩(wěn)定性的破壞、甚至引發(fā)系統(tǒng)崩潰。12．【答案】B【解析】【解答】A、分析表格數(shù)據(jù)可知，各造林模式在造林前后0-20cm土層土壤碳含量最高，A正確；

B、補(bǔ)植套種造林模式的土壤碳匯效益最顯著(表現(xiàn)為0-20cm是7.60，20-40cm是6.28，而40-60cm是470)，新造林的土壤碳匯表現(xiàn)為0-20cm是3.88，20-40cm是218，而40-60cm是1.18，B錯(cuò)誤；

C、通過恢復(fù)森林發(fā)展碳匯林業(yè)，改變了群落演替的方向，也加快了速度，說(shuō)明人類活動(dòng)往往會(huì)使群落按照不同于自然演替的速度和方向進(jìn)行，C正確；

D、新造林模式造林后0-20cm土層土壤碳含量減少，原因可能是新造林由干大多處干幼林，枯落物較少，D正確。故答案為：B。

【分析】1、群落演替的特點(diǎn)可描述為：（1）群落發(fā)展有順序、有規(guī)律地向一個(gè)方向發(fā)展，因而是能預(yù)見的。（2）演替是由群落引起物理環(huán)境改變的結(jié)果，即演替是由群落控制的。（3）演替以穩(wěn)定的生態(tài)系統(tǒng)為發(fā)展頂點(diǎn)，即形成頂極群落。

2、人類活動(dòng)會(huì)改變?nèi)郝溲萏娴姆较蚝退俣取?3．【答案】C【解析】【解答】A、水體中的N、P含量過高而引起的富營(yíng)養(yǎng)化，通過植物根系大量吸收N、P等元素，可減少水體富營(yíng)養(yǎng)化，A正確；

B、在水域生態(tài)系統(tǒng)中，N、P等元素在生物群落和無(wú)機(jī)環(huán)境之間進(jìn)行循環(huán)流動(dòng)，為了防止浮床中富集的N、P重新進(jìn)入水體，應(yīng)該定期收割浮床上的植物，B正確；

C、生態(tài)浮床的應(yīng)用體現(xiàn)了生物多樣性的間接價(jià)值大于其直接價(jià)值，C錯(cuò)誤；

D、一般來(lái)說(shuō)，生態(tài)系統(tǒng)中的生物種類越多，物種豐富度增加，營(yíng)養(yǎng)結(jié)構(gòu)越復(fù)雜，自我調(diào)節(jié)能力就越強(qiáng)，生態(tài)浮床增加了生物種類，可以增加生態(tài)系統(tǒng)的營(yíng)養(yǎng)結(jié)構(gòu)，提高生態(tài)系統(tǒng)的自我調(diào)節(jié)能力，D正確。故答案為：C。

【分析】1、生物多樣性的價(jià)值：（1）直接價(jià)值：對(duì)人類有食用、藥用和工業(yè)原料等使用意義，以及有旅游觀賞、科學(xué)研究和文學(xué)藝術(shù)創(chuàng)作等非實(shí)用意義的。（2）間接價(jià)值：對(duì)生態(tài)系統(tǒng)起重要調(diào)節(jié)作用的價(jià)值（生態(tài)功能）。（3）潛在價(jià)值：目前人類不清楚的價(jià)值。

2、生態(tài)系統(tǒng)所具有的保持或恢復(fù)自身結(jié)構(gòu)和功能相對(duì)穩(wěn)定的能力，稱為生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定性；生態(tài)系統(tǒng)之所以能維持相對(duì)穩(wěn)定，是由于生態(tài)系統(tǒng)具有自我調(diào)節(jié)能力，該能力的基礎(chǔ)是負(fù)反饋調(diào)節(jié)；物種數(shù)目越多，營(yíng)養(yǎng)結(jié)構(gòu)越復(fù)雜，自我調(diào)節(jié)能力越大，抵抗力穩(wěn)定性越高。14．【答案】D【解析】【解答】A、管控船舶進(jìn)出禁漁區(qū)域，可以減少人類活動(dòng)對(duì)水生生物的干擾，A正確；

B、對(duì)禁漁區(qū)域定期開展抽樣調(diào)查，及時(shí)了解生物多樣性的狀況以評(píng)估物種資源現(xiàn)狀，B正確；

C、遺傳多樣性是生物多樣性的內(nèi)容之一，建立江豚的基因庫(kù)，以保護(hù)江豚遺傳多樣性，C正確；

D、為保護(hù)生物多樣性，拯救長(zhǎng)江水域的江豚等瀕危物種，我國(guó)自2021年1月1日零時(shí)起實(shí)施長(zhǎng)江十年禁漁計(jì)劃，而不是清理淤泥、疏浚河道，以拓展水生動(dòng)物的生存空間，D錯(cuò)誤。

故答案為：D。

【分析】生物多樣性保護(hù)的措施：（1）就地保護(hù)：自然保護(hù)區(qū)和國(guó)家森林公園是生物多樣性就地保護(hù)的場(chǎng)所。（2）遷地保護(hù)：動(dòng)物園、植物園、瀕危物種保護(hù)中心。（3）建立精子庫(kù)、種子庫(kù)，利用生物技術(shù)對(duì)瀕危物種的基因進(jìn)行保護(hù)等。（4）加強(qiáng)宣傳和執(zhí)法力度。15．【答案】B,D【解析】【解答】A、果酒發(fā)酵時(shí)，為了排出產(chǎn)生的氣體，需要將瓶蓋擰松放氣，根據(jù)產(chǎn)生氣體的多少，擰松瓶蓋的間隔時(shí)間不一定相同，A正確；

B、果醋發(fā)酵利用的是醋酸菌，除了適當(dāng)提高溫度并不斷通入無(wú)菌空氣外，還需要加入醋酸菌，B錯(cuò)誤；

C、以酒精為底物進(jìn)行醋酸發(fā)酵，產(chǎn)物是醋酸和水，幾乎不產(chǎn)生氣泡，而果酒發(fā)酵會(huì)產(chǎn)生二氧化碳，故果醋發(fā)酵時(shí)產(chǎn)生的氣泡量明顯少于果酒發(fā)酵，C正確；

D、當(dāng)氧氣、糖源都充足時(shí)，醋酸菌將葡萄汁中的糖分解為醋酸；當(dāng)缺少糖源時(shí)，醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰賹⒁胰┳優(yōu)榇姿?，D錯(cuò)誤。故答案為：BD。

【分析】1、果酒的制作離不開酵母菌，酵母菌是兼性厭氧型生物，在有氧條件下，酵母菌進(jìn)行有氧呼吸，大量繁殖，在無(wú)氧條件下，酵母菌進(jìn)行酒精發(fā)酵。溫度是酵母菌生長(zhǎng)和發(fā)酵的重要條件，20℃左右，酒精發(fā)酵時(shí)，一般將溫度控制在18~25℃，在葡萄酒自然發(fā)酵過程當(dāng)中，其主要作用的是附著在葡萄皮上的野生酵母菌。

2、醋酸菌是一種好氧細(xì)菌，只有當(dāng)氧氣充足時(shí)，才能進(jìn)行旺盛的生理活動(dòng)。醋酸菌對(duì)氧氣的含量特別敏感，當(dāng)進(jìn)行深層發(fā)酵時(shí)，即使只是短時(shí)間中斷通入氧氣，也會(huì)引起醋酸菌死亡。當(dāng)氧氣、糖源都充足時(shí)，醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸；當(dāng)缺少糖源時(shí)，醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰?，再將乙醛變?yōu)榇姿?。醋酸菌的最適生長(zhǎng)溫度為30~35℃。16．【答案】A,B,C【解析】【解答】A、沼氣生產(chǎn)利用的是厭氧微生物，在連續(xù)攪拌反應(yīng)器中厭氧微生物會(huì)被抑制，因此沼氣池廢料無(wú)需滅菌，A正確；

B、據(jù)圖可知，該生產(chǎn)過程中有釀酒酵母的參與，酵母菌呼吸作用會(huì)產(chǎn)生二氧化碳，故該生產(chǎn)過程中，一定有二氧化碳等氣體生成，B正確；

C、糖類是主要的能源物質(zhì)，微生物生長(zhǎng)所需的碳源主要來(lái)源于果糖生產(chǎn)廢水，C正確；

D、上述發(fā)酵過程酵母菌細(xì)胞中含有蛋白質(zhì)，稱為單細(xì)胞蛋白，無(wú)需從酵母菌細(xì)胞中提取，D錯(cuò)誤。故答案為：ABC。

【分析】1、酵母菌是兼性厭氧微生物，在有氧條件下，酵母菌進(jìn)行有氧呼吸，大量繁殖，把糖分解成二氧化碳和水；在無(wú)氧條件下，酵母菌能進(jìn)行酒精發(fā)酵。酵母菌最適宜生長(zhǎng)繁殖的溫度范圍是18~30℃。

2、該技術(shù)中有連續(xù)攪拌反應(yīng)器的過程，該操作的可以增加微生物與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的接觸面積，此外也可增大溶解氧含量，故據(jù)此推測(cè)該生產(chǎn)工藝?yán)梦⑸锏挠醒醢l(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)蛋白質(zhì)。17．【答案】A,C【解析】【解答】A、最終獲得的種子不一定含有目的基因，A正確；B、相比于基因槍法和農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，花粉管通道法直接將目的基因?qū)胧芫?，這避免了植物組織培養(yǎng)這一操作，B錯(cuò)誤；

C、農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法適用于雙子葉植物和裸子植物，相比于桿菌轉(zhuǎn)化法，花粉管通道法還適用于玉米等單子葉植物的轉(zhuǎn)基因培育，C正確；

D、利用花粉管通道法時(shí)，也要先構(gòu)建基因表達(dá)載體，然后再借助花粉管通道進(jìn)入受體細(xì)胞并表達(dá)，D錯(cuò)誤。故答案為：AC。

【分析】將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。（1）將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；（2）將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；（3）將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法（Ca2+處理法）。18．【答案】A,B,D【解析】【解答】A、若從該DNA片段中直接獲取蛛絲蛋白基因，DNA每條鏈上會(huì)破壞2個(gè)磷酸二酯鍵，共會(huì)破壞4個(gè)磷酸二酯鍵，A正確；

B、由于DNA聚合酶只能從5'→3'延伸子鏈，圖中的磷酸基團(tuán)為5'端，羥基為3'端，由干引物要延伸子鏈，子鏈和模板鏈反向平行，因此根據(jù)引物的延伸方向可知圖中與引物結(jié)合的部位是2、3，B正確；

C、大腸桿菌是原核生物，無(wú)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，C錯(cuò)誤；

D、如圖所示，設(shè)X基因?yàn)槟康幕?。?jīng)過第一輪復(fù)制以親代DNA的兩條鏈做模板，可以得到①和②兩種DNA；經(jīng)過第二輪復(fù)制可以得到①和③、②和④；經(jīng)過第三輪復(fù)制可以得到①和③、③和⑤、②和④、④和⑤；第四輪復(fù)制得到16個(gè)DNA分子，即①和③、2個(gè)③和2個(gè)⑤、②和④、2個(gè)④和2個(gè)⑤、第二輪的2個(gè)⑤得到4個(gè)⑤(統(tǒng)計(jì)為①、②、3個(gè)③、3個(gè)④、8個(gè)⑤)；第五輪復(fù)制得到32個(gè)DNA分子，即①和③、②和④、3個(gè)③和3個(gè)⑤、3個(gè)④和3個(gè)⑤、第四輪的8個(gè)⑤得16個(gè)⑤(統(tǒng)計(jì)為①、②、4個(gè)③、4個(gè)④、22個(gè)⑤，即還未獲得32個(gè)目的基因)，第六輪復(fù)制得64個(gè)DNA分子，即①和③、②和④、4個(gè)③和4個(gè)⑤、4個(gè)④和4個(gè)⑤、第五輪的22個(gè)⑤得44個(gè)⑤(統(tǒng)計(jì)為①、②、5個(gè)③、5個(gè)④、52個(gè)⑤，即此時(shí)獲得32以上符合條件的目的基因)，綜上所述，需要至少6次循環(huán)可獲得32個(gè)符合要求的目的基因，D正確。故答案為：ABD。

【分析】PCR技術(shù)

（1）概念：PCR全稱為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定DNA的核酸合成技術(shù)。

（2）原理：DNA復(fù)制。

（3）前提：要有一段已知目的基因的核苷酸序列以便合成一對(duì)引物。

（4）條件：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對(duì)引物、熱穩(wěn)定DNA聚臺(tái)酶(Taq酶)。

（5）過程：①高溫變性：DNA解旋過程；②低溫復(fù)性：引物結(jié)合到互補(bǔ)鏈DNA上；③中溫延伸：合成子鏈。PCR擴(kuò)増中雙鏈DNA解開不需要解旋酶，高溫條件下氫鍵可自動(dòng)解開。19．【答案】A,B,C【解析】【解答】A、“智慧生態(tài)廁所”利用微生物發(fā)酵技術(shù)，將排泄物分解成優(yōu)質(zhì)有機(jī)肥料供農(nóng)業(yè)種植使用，實(shí)現(xiàn)能量多級(jí)利用，提高能量利用效率，A錯(cuò)誤；

B、“智慧生態(tài)廁所”在選擇菌種時(shí)既需考慮循環(huán)、協(xié)調(diào)的原理，也需要考慮自生、整體的原理，B錯(cuò)誤；

C、硝化細(xì)菌可進(jìn)行化能合成作用，能利用NH3，轉(zhuǎn)化為NO3-，可除臭，C錯(cuò)誤；

D、高效降解菌種的篩選需要用到微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的技術(shù)，也可通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)獲得高效降解污染物的工程菌，D正確。故答案為：ABC。

【分析】1、生態(tài)系統(tǒng)中能量的輸入、傳遞、轉(zhuǎn)化和散失的過程，稱為生態(tài)系統(tǒng)的能量流動(dòng)。生態(tài)系統(tǒng)能量流動(dòng)的起點(diǎn)是生產(chǎn)者，因此輸入生態(tài)系統(tǒng)的總能量是生產(chǎn)者光合作用固定的太陽(yáng)能。能量流動(dòng)的特點(diǎn)是單向流動(dòng)，逐級(jí)遞減。

2、生態(tài)工程原理：自生原理、循環(huán)原理、協(xié)調(diào)原理和整體原理。20．【答案】（1）碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽（2）①（③）④（3）將未接種的培養(yǎng)基（或空白培養(yǎng)基）放在恒溫培養(yǎng)箱中保溫1-2天，檢驗(yàn)是否有菌落產(chǎn)生；小于（4）皿底；為了防止培養(yǎng)時(shí)間不足導(dǎo)致菌落遺漏（5）7×1010個(gè)；少；當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落【解析】【解答】(1)雖然各種培養(yǎng)基的配方不同，但是一般都含有水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽等微生物生長(zhǎng)所需的基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。

(2)稀釋涂布平板法操作時(shí)需要在酒精燈火焰旁邊操作，故需要用到①酒精燈、③培養(yǎng)皿、④涂布器。

(3)將未接種的培養(yǎng)基(或空白培養(yǎng)基)放在恒溫培養(yǎng)箱中保溫1-2天，檢驗(yàn)是否有菊落產(chǎn)生，用于檢測(cè)該培養(yǎng)基滅菌是否徹底。若有菌落產(chǎn)生，說(shuō)明滅菌不徹底，需要重新配制培養(yǎng)基。選擇培養(yǎng)基允許特定種類的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長(zhǎng)，故同一濃度梯度下，尿素培養(yǎng)基上的菌落數(shù)小于全營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基上的菌落數(shù)，則說(shuō)明尿素培養(yǎng)基具有選擇作用。

(4)本實(shí)驗(yàn)使用的平板和試管較多，為了避免混淆，最好使用前在培養(yǎng)皿的皿底做好標(biāo)記，由于培養(yǎng)基倒置培養(yǎng)，所以皿底上標(biāo)記號(hào)組別、培養(yǎng)日期和平板上培養(yǎng)樣品的稀釋度等。為了防止培養(yǎng)時(shí)間不足導(dǎo)致菌落遺漏，在30~37C的恒溫培養(yǎng)箱中需培養(yǎng)1-2d，每隔24h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，選擇菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果。一般選擇菌落數(shù)為30~300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。

(5)5號(hào)試管的稀釋倍數(shù)為107，10mL瘤胃樣品中含有目標(biāo)活菌數(shù)=(68+75+67)÷3÷0.1x107x10=7x1010(個(gè))。當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落，故使用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)獲得的菌落數(shù)比實(shí)際的活菌數(shù)偏少?！痉治觥?、培養(yǎng)基為微生物提供生長(zhǎng)、繁殖和積累代謝產(chǎn)物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)歸納為碳源、氨源、生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽和水。培養(yǎng)基按物理性質(zhì)可分為固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基，液體培養(yǎng)基中加入凝固劑可以制成固體培養(yǎng)基；固體培養(yǎng)基一般用于微生物的鑒別、分離和計(jì)數(shù)，液態(tài)培養(yǎng)基常用于擴(kuò)大化生產(chǎn)，觀察細(xì)菌運(yùn)動(dòng)。根據(jù)化學(xué)成分分為合成培養(yǎng)基、天然培養(yǎng)基等；根據(jù)用途分為選擇培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基。

2、微生物常見的接種的方法①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落。②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落。

3、統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法∶(1)顯微鏡直接計(jì)數(shù)法①原理∶利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物數(shù)量；②方法∶用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)；③缺點(diǎn)∶不能區(qū)分死菌與活菌。(2)間接計(jì)數(shù)法(活菌計(jì)數(shù)法）①原理∶當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。②操作∶a、設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性；b、為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30~300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。③計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)=(c/V)×M，其中c代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(mL)，M代表稀釋倍數(shù)。21．【答案】（1）固體；蛋白胨、牛肉膏、酵母粉；篩選高產(chǎn)酸乳酸菌（2）梯度稀釋；倒置；有明顯溶鈣圈（溶鈣圈較大）的單菌落（3）乳酸菌是厭氧菌，先加乳酸菌再澆筑培養(yǎng)基，為乳酸菌的生存提供了無(wú)氧環(huán)境（4）乳酸菌種類、接種量和發(fā)酵時(shí)間（5）均能快速降低泡菜發(fā)酵過程中的pH值，且接種量越大作用效果越顯著【解析】【解答】(1)題中培養(yǎng)基有瓊脂作為凝固劑，根據(jù)物理性質(zhì)分類，該培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基；氮源是指提供氮元素的物質(zhì)，蛋白胨、牛肉膏、酵母粉含有氮元素，可為乳酸菌種提供氮源；培養(yǎng)基中含有碳酸鈣，乳酸菌產(chǎn)生乳酸會(huì)與碳酸鈣反應(yīng)形成溶鈣圈，便于篩選高產(chǎn)酸乳酸菌。

(2)要分離和培養(yǎng)高產(chǎn)乳酸菌，首先可以對(duì)泡菜汁進(jìn)行梯度稀釋，稀釋時(shí)需要用無(wú)菌水，如1mL泡菜汁+9mL無(wú)菌水，相當(dāng)于對(duì)泡菜汁稀釋了10倍，以此類推；培養(yǎng)時(shí)為了防止冷凝水滴落沖散菊落，應(yīng)將培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)：溶鉦圈明顯的菌落，產(chǎn)乳酸菌的能力強(qiáng)，應(yīng)挑選有明顯溶鈣圈的菌落進(jìn)行平板劃線培養(yǎng)。

(3)乳酸菌是厭氧菌，將樣品稀釋液直接涂布在培養(yǎng)基的表面會(huì)接觸到氣體中的氧氣，先加乳酸菌再澆筑培養(yǎng)基，為乳酸菌的生存提供了無(wú)氧環(huán)境。

(4)自變量是人為控制不同的量，據(jù)圖中的橫坐標(biāo)、兩個(gè)表的縱坐標(biāo)標(biāo)題不同以及各條曲線的標(biāo)注不同可知，該研究實(shí)驗(yàn)的自變量是乳酸菌種類(乳酸菌A50f7和A50b9)、接種量和發(fā)酵時(shí)間。

(5)結(jié)合坐標(biāo)圖中pH變化結(jié)果可知，兩種乳酸菌均能快速降低泡菜發(fā)酵過程中的pH值，且接種量越大作用效果越明顯，效果相近?！痉治觥?、培養(yǎng)基為微生物提供生長(zhǎng)、繁殖和積累代謝產(chǎn)物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)歸納為碳源、氨源、生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽和水。培養(yǎng)基按物理性質(zhì)可分為固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基，液體培養(yǎng)基中加入凝固劑可以制成固體培養(yǎng)基；固體培養(yǎng)基一般用于微生物的鑒別、分離和計(jì)數(shù)，液態(tài)培養(yǎng)基常用于擴(kuò)大化生產(chǎn)，觀察細(xì)菌運(yùn)動(dòng)。根據(jù)化學(xué)成分分為合成培養(yǎng)基、天然培養(yǎng)基等；根據(jù)用途分為選擇培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基。

2、微生物常見的接種的方法①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落。②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落。22．【答案】（1）5’；5’TACGTA3’；5’CCTAGG3'；防止目的基因、質(zhì)粒的自身環(huán)化與目的基因反向連接入質(zhì)?；虼_保目的基因與質(zhì)粒定向連接（2）T4DNA連接酶；讓目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在和遺傳，并使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用（3）BglⅡ；140Kb（4）誘導(dǎo)HBsAg基因表達(dá)【解析】【解答】(1)DNA聚合酶是沿著DNA的單鏈移動(dòng)，從5向3端合成新的DNA鏈，因此設(shè)計(jì)引物時(shí)需要在引物的5端添加相應(yīng)限制酶的識(shí)別序列；圖中質(zhì)粒含有SnaB、Avrl、Bglll和Sacl限制酶切割位點(diǎn)，其中Sacl位于啟動(dòng)子上，BglI1位于終止子上，故要將HBsAg基因和pPIC9K質(zhì)粒重組，只能用限制酶SnaBl和Avr切割質(zhì)粒，則在HBsAg基因兩側(cè)的A和B位置添加的堿基序列分別是5’TACGTA3’、5’CCTAGG3；用雙酶切的優(yōu)點(diǎn)是避免目的基因反向接入質(zhì)粒(保證目的基因定向接入質(zhì)粒)。

(2)基因工程中常需要使用DNA連接酶，其中既能連接黏性末端，又能連接平末端的DNA連接酶是TDNA連接酶，只能將雙鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性末端之間連接起來(lái)的是EcoliDNA連接酶，用SnaBI得到的是平末端，用AvrII得到的是黏性末端，故應(yīng)用T4DNA連接酶將其連接到PICgK質(zhì)?！瓨?gòu)建重組質(zhì)粒的目的是目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在和遺傳，并使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。

(3)若用限制酶SnaBl、BgllI聯(lián)合酶切pPIC9K質(zhì)粒，獲得的DNA片段的長(zhǎng)度分別是42kb、26kb、68kb；用限制酶BgllI、Avrll聯(lián)合酶切pPIC9K質(zhì)粒，得到的DNA片段的長(zhǎng)度分別是42kb、40kb、54kb，因此，在pPIC9K質(zhì)粒中BgllI與SnaBI之間的DNA片段的長(zhǎng)度為26kb，Bglll與AvrlI之間的DNA片段的長(zhǎng)度為54kb，用限制酶SnaBl和Avr切割質(zhì)粒，故目的基因位于SnaBl和AvrI之間，目的基因(HBsAg基因)長(zhǎng)度是60kb，故切割后的重組DNA的長(zhǎng)度是26kb+54kb+60kb=140kb。

(5)巴斯德畢赤酵母菌是一種甲基營(yíng)養(yǎng)型酵母，能將甲醇作為其唯一碳源，此時(shí)AOX1基因受到誘導(dǎo)而表達(dá)，5'AOX1和3AOX(1分)別是基因AOX1的啟動(dòng)子和終止子，目的基因(HBsAg基因)位于啟動(dòng)子和終止子之間，故甲醇的目的是誘導(dǎo)HBsAg基因表達(dá)?！痉治觥炕蚬こ碳夹g(shù)的基本步驟︰（1）目的基因的獲取︰方法有從基因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建︰是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。構(gòu)建基因表達(dá)載體的目的是使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，可以遺傳給下一代，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。啟動(dòng)子的本質(zhì)是DNA片段，其為RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)。(3)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞∶根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞