HYT 069-2005 赤潮監(jiān)測技術(shù)規(guī)程

中華人民共和國海洋行業(yè)標準赤潮監(jiān)測技術(shù)規(guī)程Technicalspecificationfor2005-05-18發(fā)布HY/T069—2005 I 2規(guī)范性引用文件 13術(shù)語和定義 4監(jiān)測方案設(shè)計 25監(jiān)測項目 66赤潮監(jiān)測與分析指標 7海洋赤潮監(jiān)測數(shù)據(jù)報表與赤潮監(jiān)測(預警)報告編制 附錄A(規(guī)范性附錄)赤潮監(jiān)測出海前準備 20附錄B(資料性附錄)中國近岸、近海赤潮生物 21附錄C(資料性附錄)藻類培養(yǎng)液配方 32附錄D(資料性附錄)海水中痕量鐵元素的測定 附錄E(資料性附錄)海水中痕量錳元素的測定 附錄F(資料性附錄)海水中維生素B?(Vm)的測定 附錄G(資料性附錄)海水中維生素B??(Vn?)的測定 40附錄H(資料性附錄)赤潮遙感監(jiān)測技術(shù) 43附錄I(資料性附錄)赤潮類型與危害 45附錄J(資料性附錄)赤潮毒素與毒性指標 附錄K(資料性附錄)赤潮經(jīng)濟損失評估 附錄L(規(guī)范性附錄)浮游生物記錄表 53附錄M(規(guī)范性附錄)海洋赤潮監(jiān)測(預警)報告內(nèi)容與格式 I本標準代替HY/T069—2003《海洋有害藻華(赤潮)監(jiān)測技術(shù)導則》。本標準將國家海洋局2002年發(fā)布的《海洋赤潮監(jiān)測技術(shù)規(guī)程》有關(guān)內(nèi)容納入本次修訂之中。本標準與HY/T069—2003相比主要變化如下：——本標準的應用范圍更加廣泛而具體(本版的第1章);——修訂、刪除或增補了部分定義和術(shù)語(本版的第3章);——增加了赤潮監(jiān)測中一些原則性的概念與界定方法，包括赤潮事件發(fā)生過程的界定；赤潮位置與范圍的界定；赤潮的分級響應系統(tǒng)(見本版的4.3)?！喑北O(jiān)測參數(shù)的選擇及分析方法具體化，省卻幾項與赤潮關(guān)聯(lián)不十分密切的監(jiān)測項目，如波高、河流徑流量、浮游動物的干重生物量和碳氫生物量、初級生產(chǎn)力、銅、鋅等(見本版表1);——增加包括底棲微藻、底泥孢囊、腹瀉性貝毒、失憶性貝毒、神經(jīng)性貝毒、西加魚毒素的具體檢測方法(見本版的5.4.2;5.4.3和5.4.7)?！黾恿艘?guī)范性附錄“赤潮監(jiān)測出海前準備”(見本版的附錄A);——附錄B列出中國近岸、近海赤潮生物種名錄、分布范圍、毒素類型及形成赤潮時的基準濃度(參考值)。增加了赤潮生物的同物異名和基本異名(見本版的附錄B);——刪除了2003年版的資料性附錄C“中國海主要有毒藻華生物及其毒性”(2003年版的表C.1),將其內(nèi)容并入附錄B(本版附錄B,見表B.1);——增加了資料性附錄“藻類培養(yǎng)液配方”(見本版的附錄C);——增加了資料性附錄“海水中痕量鐵元素的測定”(見本版的附錄D);——增加了資料性附錄“海水中痕量錳元素的測定”(見本版的附錄E);——增加了資料性附錄“海水中維生素B?(V)的測定”(見本版的附錄F);——增加了資料性附錄“海水中維生素B??(Vm?)的測定”(見本版的附錄G);——增加了資料性附錄“赤潮遙感監(jiān)測技術(shù)”(見本版的附錄H);——增加了資料性附錄“赤潮毒素類型及危害”(見本版的附錄I);——修訂了2003年版的資料性附錄D“一些國家和地區(qū)對某些藻華細胞密度的判定和管理”,將其內(nèi)容并入附錄I(見本版的表I.2); 修訂了2003年版的資料性附錄B“中國近海對海洋生物產(chǎn)生有害影響的藻類”,將其內(nèi)容并入附錄I(見本版的表I.3);——增加了資料性附錄“赤潮毒素與毒性指標”(見本版的附錄J);——修訂了2003年版的資料性附錄F“有毒藻華毒素的臨床癥狀”,將其內(nèi)容并入附錄J(見本版的——修訂了2003年版的資料性附錄E“一些國家和地區(qū)檢測有毒藻華毒素行動臨界值和檢測方法”,將其內(nèi)容并入附錄J(見本版的表J.2);——增加了資料性附錄“赤潮損失評估”(見本版的附錄K);——增加了規(guī)范性附錄“浮游生物記錄表”(見本版的附錄L);——增加了規(guī)范性附錄“海洋赤潮監(jiān)測(預警)報告內(nèi)容與格式”(見本版的附錄M)。本標準由國家海洋局海洋環(huán)境保護司提出。Ⅱ本標準由國家海洋標準計量中心歸口。本標準起草單位：國家海洋環(huán)境監(jiān)測中心、國家海洋局第三海洋研究所。ⅢHY/T069-2003作為我國赤潮監(jiān)測工作的一個指南性標準在實際工作中發(fā)揮了重要作用。為使我國的赤潮監(jiān)測工作更具有科學性、針對性和實用性，在總結(jié)現(xiàn)有的技術(shù)方法和實際監(jiān)測工作問題的基礎(chǔ)上，結(jié)合國家海洋局2002年發(fā)布的“海洋赤潮監(jiān)測技術(shù)規(guī)程”,對正在執(zhí)行的“海洋有害藻華(赤潮)監(jiān)測技術(shù)導則(HY/T069—2003)”進行了補充和修訂，形成了新的赤潮監(jiān)測技術(shù)規(guī)程海洋行業(yè)標準。主要的修訂內(nèi)容如前言所述。1赤潮監(jiān)測技術(shù)規(guī)程本標準規(guī)定了海洋赤潮監(jiān)測的內(nèi)容、技術(shù)要求和方法。其他海域的赤潮監(jiān)測。2規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據(jù)本標準達成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標準。GB3097—1997海水水質(zhì)標準GB12763.2海洋調(diào)查規(guī)范海洋水文觀測GB12763.3海洋調(diào)查規(guī)范海洋氣象觀測GB12763.6海洋調(diào)查規(guī)范海洋生物調(diào)查GB17108海洋功能區(qū)劃分技術(shù)導則GB17378.1海洋監(jiān)測規(guī)范第1部分：總則GB17378.2海洋監(jiān)測規(guī)范第2部分：數(shù)據(jù)處理與分析質(zhì)量控制GB17378.3海洋監(jiān)測規(guī)范第3部分：樣品采集、貯存與運輸GB17378.4海洋監(jiān)測規(guī)范第4部分：海水分析GB17378.7海洋監(jiān)測規(guī)范第7部分：近海污染生態(tài)調(diào)查和生物監(jiān)測GB18421—2001海洋生物質(zhì)量中華人民共和國海洋環(huán)境保護法，2000政府間海洋學委員會第33號手冊與導則(UNESCO,1995)政府間海洋學委員會第44號技術(shù)報告：有害藻華監(jiān)測系統(tǒng)的設(shè)計與實施(UNESCO,1996)3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本標準。是指海洋中的一些微藻、原生動物或細菌在一定環(huán)境條件下暴發(fā)性增殖或聚集達到某一水平，引起水體變色或?qū)Ｑ笾衅渌锂a(chǎn)生危害的一種生態(tài)異?，F(xiàn)象。赤潮具有多種顏色。是指有毒或無毒藻類暴發(fā)引起水體變色，或其濃度雖不至于引起水色改變，但其危害性表現(xiàn)在毒性效應或?qū)ζ渌车奈锢硇該p害作用。有害藻華包括有毒藻華與無毒藻華。能夠大量繁殖并引發(fā)赤潮的生物稱之為赤潮生物。赤潮生物包括浮游生物、原生動物和細菌等，其2由有毒赤潮生物產(chǎn)生的天然有機化合物。危害性較大的幾種毒素分別是麻痹性貝毒(PSP)、腹瀉性貝毒(DSP)、神經(jīng)性貝毒(NSP)、西加魚毒素(CFP)、失憶性貝毒(ASP)和藍細菌毒素(藍藻毒素，由于人類的活動使某海域水體中氮、磷營養(yǎng)元素濃度超過正常濃度范圍，引起浮游植物過量增長和整個水體生態(tài)平衡的改變，而造成危害的一種污染現(xiàn)象。以監(jiān)測赤潮發(fā)生及發(fā)展動向為目標，在潛在赤潮發(fā)生水域按常規(guī)方法對海區(qū)水化學、生物、水文和氣象等參數(shù)實施監(jiān)測的行為。目的在于了解調(diào)查海區(qū)，特別是赤潮頻發(fā)期浮游生物(主要是赤潮生物)的種類和數(shù)量的時空分布狀況，密切關(guān)注赤潮的發(fā)生及發(fā)展動向。常規(guī)監(jiān)測側(cè)重于污染源附近的區(qū)域、指對于已發(fā)生或正在發(fā)生的赤潮進行現(xiàn)場取樣及實時檢測、分析和處置的過程，包括赤潮的發(fā)生范圍、赤潮生物的種類與數(shù)量分布、赤潮毒素的初步檢定以及應急處理意見和方法的提出等。指對已形成的赤潮全過程的跟蹤、取樣、分析工作，目的是了解赤潮生物及赤潮毒素的分布與變化狀況。4監(jiān)測方案設(shè)計4.1監(jiān)測的總目標赤潮監(jiān)測的總目標是為了及時準確了解赤潮發(fā)展的現(xiàn)狀和趨勢，保護海洋生態(tài)系統(tǒng)，保障人體健康和生命安全，減輕和避免有害藻華對海水養(yǎng)殖、捕撈漁業(yè)、濱海旅游等海洋產(chǎn)業(yè)的赤潮災害造成的損失，并為赤潮的預測、早期預警系統(tǒng)的建立提供服務(wù)。監(jiān)測目標一般分為兩大類：——海洋生物資源管理監(jiān)測，包括貝類資源；魚類資源和珍稀瀕危物種資源的管理監(jiān)測；——海洋環(huán)境質(zhì)量管理監(jiān)測，包括娛樂水體和底質(zhì)質(zhì)量管理；對自然生態(tài)系與公共健康的保護的管4.2監(jiān)測方案設(shè)計的基本原則監(jiān)測方案的設(shè)計應綜合考慮以下幾項原則：——監(jiān)測目標必須根據(jù)水產(chǎn)養(yǎng)殖、漁業(yè)、生態(tài)系統(tǒng)保護的需求，界定保護對象及其具體目標與預期效果；——監(jiān)測方案必須考慮監(jiān)測海域的生態(tài)環(huán)境特征；化特征以及污染物來源與分布等；——監(jiān)測方案必須與環(huán)境監(jiān)測計劃相互協(xié)調(diào)；——監(jiān)測體系應高效并便于協(xié)調(diào)。監(jiān)測體系包括信息使用者、監(jiān)測方案的實施單位和結(jié)果評價——監(jiān)測方案必須符合經(jīng)濟效能原則。實施監(jiān)測方案的基金或資金保障應滿足實施監(jiān)測方案的需3求，以最少的代價獲取盡可能多的有用信息。4.3原則性的概念與界定方法4.3.1赤潮事件發(fā)生過程的界定一次完整的赤潮過程包括四個階段：發(fā)育、發(fā)展、維持和消亡。界定一次赤潮事件應根據(jù)赤潮海區(qū)——獨立海區(qū)發(fā)生的單相或多相赤潮，自發(fā)育至消亡為一次完整的赤潮過程；若其中某一階段赤潮消失(水色正?；虺喑鄙锩芏冗_到正常水平),但隨后(數(shù)天內(nèi))該海域或相鄰海域又重新出現(xiàn)由該種引發(fā)的赤潮(可能出現(xiàn)遷移),仍算做一次赤潮過程；若數(shù)天內(nèi)出現(xiàn)的赤潮為另一種赤潮生物所引發(fā)，則記作另一次赤潮過程；——相鄰的兩個海域同時發(fā)生赤潮，若是由不同的赤潮生物引發(fā)，則記作兩次赤潮過程；若赤潮生物為同一個種類，則需要根據(jù)海域的具體情況而定：a)在港灣或封閉的小水體的兩個或多個不同區(qū)域發(fā)生的赤潮，記作一次赤潮過程；b)在海灣或沿岸水域相鄰的兩個或多個不同區(qū)域發(fā)生的赤潮，中間若有自然的地理阻隔，則記作兩次或多次赤潮過程；否則僅記作一次赤潮過程；c)在遠?；虼笱笙噜彽膬蓚€或多個不同區(qū)域發(fā)生的赤潮，記作兩次或多次赤潮過程?！噜彽膬蓚€海域若先后發(fā)生赤潮，均記作不同的赤潮過程。4.3.2赤潮位置與范圍的界定赤潮發(fā)生位置赤潮位置以發(fā)生赤潮的海域名稱及其地理坐標確定。赤潮發(fā)生范圍赤潮發(fā)生范圍指赤潮生物的密度達到赤潮判別指標以上或海水顏色異常的水域面積。由于赤潮在海水中并非均勻分布，而多呈現(xiàn)條、帶、片狀的不連續(xù)分布，赤潮發(fā)生面積指其最外圍邊緣所包圍的赤潮范圍的界定可采用衛(wèi)星遙感、航空遙感、船舶GPS定位等方法界定邊緣范圍及坐標并依此計算出赤潮面積。界定為同一次的赤潮事件，可對零星分布的赤潮面積進行加和作為赤潮發(fā)生范圍。4.3.3赤潮的分級響應系統(tǒng)三級響應在我國管轄海域發(fā)生的赤潮，尤其在漁業(yè)資源利用和養(yǎng)護區(qū)、旅游區(qū)、海水資源利用區(qū)(鹽田區(qū)和特殊工業(yè)用海區(qū))、海洋保護區(qū)和特殊利用區(qū)(科研用海)等海域出現(xiàn)下述任一種情況為三級響應：——因食用受赤潮污染的海產(chǎn)品或接觸到赤潮海水，出現(xiàn)身體不適的病例報告(多于10個);——赤潮毒素(藻毒素、貝毒及魚毒等)超出警戒標準1倍以上(赤潮毒素標準見附錄C);——赤潮面積超過1000km2。二級響應在我國管轄海域發(fā)生的赤潮，尤其在漁業(yè)資源利用和養(yǎng)護區(qū)、旅游區(qū)、海水資源利用區(qū)(鹽田區(qū)和特殊工業(yè)用海區(qū))、海洋保護區(qū)和特殊利用區(qū)(科研用海)等海域出現(xiàn)下述任一種情況為二級響應：——因食用受赤潮污染的海產(chǎn)品或接觸到赤潮海水，出現(xiàn)身體不適的病例報告(多于30個);——赤潮毒素(藻毒素、貝毒及魚毒等)超出警戒標準5倍以上(赤潮毒素標準見附錄C);——赤潮面積超過2000km2。一級響應在我國管轄海域發(fā)生的赤潮，出現(xiàn)下述任一種情況即為一級響應：——因食用受赤潮污染的海產(chǎn)品或接觸到赤潮海水，出現(xiàn)身體不適的病例報告(多于50個)或出現(xiàn)死亡病例；4——赤潮毒素(藻毒素、貝毒及魚毒等)超出警戒標準10倍以上(赤潮毒素標準見附錄C);——赤潮面積超過3000km2。4.4監(jiān)測方案的結(jié)構(gòu)內(nèi)容監(jiān)測方案應包括監(jiān)測信息要求；采樣方案設(shè)計前期準備；監(jiān)測站位布設(shè)；采樣層次；監(jiān)測時段與監(jiān)測頻率，監(jiān)測參數(shù)選定，監(jiān)測方法與技術(shù)規(guī)范化(質(zhì)控);信息加工、評價、傳遞與應用；監(jiān)測組織機構(gòu)；監(jiān)測評價結(jié)果表述等內(nèi)容。4.4.1監(jiān)測信息需求貝類監(jiān)測監(jiān)測貝類體內(nèi)積累毒性的有毒藻類及其毒素，確定毒素含量水平，采取應急措施，跟蹤監(jiān)測其發(fā)展魚類監(jiān)測監(jiān)測和發(fā)現(xiàn)可對魚類產(chǎn)生危害的有害藻類，跟蹤監(jiān)測其發(fā)展動態(tài)，確定其危害程度并采取應急措施。生態(tài)系統(tǒng)保護監(jiān)測監(jiān)測和發(fā)現(xiàn)可對生態(tài)系統(tǒng)特殊生物物種產(chǎn)生危害的赤潮，實施動態(tài)監(jiān)測直至赤潮消亡。富營養(yǎng)化監(jiān)測監(jiān)測結(jié)果必須正確反映其長期變化，應在固定站位采樣，保證數(shù)據(jù)的可比性，滿足統(tǒng)計分析要求。底質(zhì)監(jiān)測監(jiān)測和發(fā)現(xiàn)赤潮生物休眠孢子及底質(zhì)對富營養(yǎng)化和誘發(fā)赤潮的微量元素的反饋作用。娛樂水體質(zhì)量監(jiān)測及時發(fā)現(xiàn)赤潮現(xiàn)象，警告公眾在赤潮期間不到受危害水體從事娛樂活動。4.4.2采樣方案設(shè)計的前期準備采樣設(shè)計的主要依據(jù)是監(jiān)測目標及其信息需求，海區(qū)環(huán)境的生物、化學、物理條件的環(huán)境基礎(chǔ)資料，監(jiān)測技術(shù)能力和財力支持力度等。浮游植物資料收集包括浮游植物群落結(jié)構(gòu)和生物量(有毒的、有害的和其他的)的長期資料。赤潮發(fā)生以往資料收集包括赤潮發(fā)生的時間、位置、范圍、主要赤潮生物種類、密度、毒性及危害，赤潮的遷移狀況和持續(xù)時間，所造成的經(jīng)濟損失等資料。理化指標資料收集該海區(qū)的理化指標的季節(jié)變化和年際變化的資料。相關(guān)參數(shù)包括潮汐、潮差、水溫、鹽度表層水層化現(xiàn)象、表層流循環(huán)、上升流、溶解氧、無機營養(yǎng)鹽的時空分布及其來源與負荷量，以及其他浮游植氣象條件資料包括氣壓、日照及強度、雨季及雨量、暴風期以及盛行季風期及風速風向。易受赤潮損害的生態(tài)系統(tǒng)和生物資源資料(如珊瑚礁、漁場、貝類養(yǎng)殖區(qū)等)的收集。如果缺乏必需的環(huán)境資料，必須開展前期基礎(chǔ)調(diào)查。4.4.3監(jiān)測站位布設(shè)布設(shè)原則監(jiān)測站位的布設(shè)應遵循以下原則：——測站應布設(shè)在預期的赤潮多發(fā)海域；——盡可能與海洋環(huán)境質(zhì)量監(jiān)測站位置一致；——應考慮監(jiān)測海域的水動力狀況和功能，選擇上升流區(qū)、漁場和增養(yǎng)殖區(qū)布設(shè)測站；5——測站的布設(shè)應覆蓋或代表監(jiān)測海域。布站方法赤潮監(jiān)測站位的布站方法包括兩種：——常規(guī)監(jiān)測測站：根據(jù)實際情況，以覆蓋和代表監(jiān)測海域為原則。對于監(jiān)測區(qū)域大的，或包括有不同水團特征的海域，在站位布設(shè)設(shè)計中可將監(jiān)測海域劃分為若干個單元區(qū)。可采用T型(河口近岸海域)或井字型、梅花型、網(wǎng)格型方法，布設(shè)控制斷面和監(jiān)測站位。常規(guī)監(jiān)測測站一般設(shè)置為固定站位，用于獲取完整時間系列的定量監(jiān)測資料；——跟蹤監(jiān)測測站：一般為隨機測站，根據(jù)赤潮發(fā)生的范圍和漂移狀態(tài)，在赤潮發(fā)生區(qū)的區(qū)域內(nèi)、外水域分別設(shè)立赤潮區(qū)測站和對照測站，測站數(shù)量應隨赤潮發(fā)生區(qū)范圍的擴展而增加。4.4.4監(jiān)測時段我國近岸和近海海域赤潮發(fā)生時段范圍是：——黃渤海4—10月，高發(fā)期為7—9月；——東海3—10月，高發(fā)期為6—8月；——南海全年均可發(fā)生，高發(fā)期為3—5月和8—11月。4.4.5監(jiān)測頻率采樣時間與頻率取決于監(jiān)測目標及其對資料的需求程度。——常規(guī)監(jiān)測宜每月1至2次；——赤潮多發(fā)期宜每周1次；——發(fā)現(xiàn)有赤潮征兆時宜每3天1次；——跟蹤監(jiān)測包括赤潮發(fā)生至消失的全過程，宜每天1次或更多。4.4.6采樣層次一般可根據(jù)對資料的具體需求，采用三種形式的采樣層次：——固定深度采樣(表層或近表層);——多層等體積混合水樣(自底至表垂直采樣);——真光層內(nèi)分層采樣(表層、中層和底層)。4.4.7監(jiān)測參數(shù)選擇原則根據(jù)監(jiān)測目標及信息需求選擇參數(shù)具有多個子目標的監(jiān)測計劃，其選擇的參數(shù)必須滿足各子目標的要求，但其中某些參數(shù)可只在某些根據(jù)監(jiān)測技術(shù)條件選擇參數(shù)不具備測定條件的參數(shù)暫不選用；4.4.8監(jiān)測技術(shù)規(guī)范化、質(zhì)量保證與分析質(zhì)量控制制訂監(jiān)測方案，應根據(jù)監(jiān)測目標與對資料的質(zhì)量要求規(guī)定具體的采樣方法、分析方法，以及質(zhì)量保證與分析質(zhì)量控制程序。監(jiān)測技術(shù)規(guī)范化和質(zhì)量保證可依照GB12763和GB17378中有關(guān)規(guī)定和國家發(fā)布的質(zhì)量運行體系的相關(guān)規(guī)定執(zhí)行。4.4.9信息處理統(tǒng)計方法——有效數(shù)字：按GB17378.2中有關(guān)規(guī)定；——均值統(tǒng)計：根據(jù)數(shù)據(jù)量值的分布狀態(tài)選用算術(shù)平均、幾何平均和中位數(shù)統(tǒng)計均值；——計量單位：采用國家法定計量單位。數(shù)據(jù)貯存介質(zhì) 紙質(zhì)：——電子版。6赤潮常規(guī)監(jiān)測項目和跟蹤監(jiān)測項目可按表1內(nèi)容適當增減。有特殊目的的赤潮監(jiān)測內(nèi)容可根據(jù)具體要求在表1的基礎(chǔ)上增加監(jiān)測內(nèi)容。引用標準觀測項目赤潮位置與范圍目視及感官象要素比色法目視法目視法日照風向目視法7引用標準水文氣象要素雨量河流徑流量“資料收集見本標準5.4.2其他赤潮生物(纖毛蟲類等)底泥孢囊“見本標準5.4.3葉綠素a赤潮毒素麻痹性貝毒(PSP)小白鼠法、高效液相色譜法*腹瀉性貝毒(DSP)神經(jīng)性貝毒(NSP)小白鼠法、高效液相色譜法*見本標準失憶性貝毒(ASP)西加魚毒素(CFP)見本標準溶解氧(DO)活性磷酸鹽(PO?)活性硅酸鹽(SiO)亞硝酸鹽-氮(NOZ-N)硝酸鹽-氮(NO3-N)氨-氮(NHf-N)錳*有條件或特殊需要時的宜選項目。5.1監(jiān)測備航赤潮監(jiān)測備航工作應滿足附錄A的要求。5.2現(xiàn)場觀測現(xiàn)場觀測內(nèi)容主要包括海區(qū)水色、味、嗅、漂浮物等感官指標，并向附近居民和漁民了解最近一段時間海區(qū)是否有水體變色、異味、發(fā)光、異常飄浮物或海產(chǎn)品死亡以及人畜中毒現(xiàn)象的發(fā)生等情況。85.3水文氣象要素監(jiān)測按GB12763.2中的規(guī)定監(jiān)測。按GB12763.2中的規(guī)定監(jiān)測。按GB12763.2中的規(guī)定監(jiān)測。按GB12763.2中的規(guī)定監(jiān)測。按GB17378.4中的規(guī)定監(jiān)測。按GB12763.2中的規(guī)定監(jiān)測。按GB12763.2中的規(guī)定監(jiān)測。5.4生物要素監(jiān)測5.4.1浮游植物有害藻類的常規(guī)采樣站位盡可能代表調(diào)查區(qū)中不同水團。用于顯微鏡下定性和定量分析的樣品分別使用浮游生物網(wǎng)(淺水Ⅲ型或網(wǎng)目20μm浮游生物網(wǎng))和采水瓶(如Niskin,Nansen)或采樣管采集(見附錄A)。用于活體培養(yǎng)的藻類要將采集的樣品倒入浮游生物樣品瓶里，蓋好瓶蓋放入保溫箱，溫度控制在2℃~10℃。樣品應盡快送回實驗室培養(yǎng)，注意在運輸期間溫度變動幅度不能過大。拖網(wǎng)采樣浮游植物定性濃縮樣品(網(wǎng)樣)用小型的20μm網(wǎng)目浮游生物網(wǎng)(或淺水Ⅲ型浮游生物網(wǎng))沿垂直和水平方向拖網(wǎng)采集(夜光藻采用淺水Ⅱ型浮游生物網(wǎng)采集)。沿垂直方向拖網(wǎng)時，在下網(wǎng)和收網(wǎng)過程中都能采到樣品，為了保證每個樣品能夠獲得足夠數(shù)量的浮游生物，在較淺水域(水深<20m)需經(jīng)過幾次自底至表拖網(wǎng)，直到水樣呈現(xiàn)不透明或由于藻類濃縮而改變顏色。水平拖網(wǎng)是在水面下約2m的深度進行的，拖網(wǎng)的速度不能超過0.25m·s-1～0.30m·s-1,必須記錄采樣點的流速。水樣采集定量樣品(水樣/瓶采樣品)使用采水瓶按預定水層和規(guī)定量在不同深度采取水樣，采樣間隔設(shè)定為2m～5m,涵蓋整個深度區(qū)間。如15m以淺采表、底二層水樣，水深大于15m可采表、中(10m)和底層三層水樣，各層采水200mL～500mL。不同深度的樣品最后可以混合在一起作為一個樣品代表整個水團。測定葉綠素、初級生產(chǎn)力及水化學參數(shù)時可同時采樣。樣品的固定和保存——用于實驗室分析的樣品采集后須立即固定。用于光學顯微鏡觀察的藻類樣品(水樣)可以在中性或酸性魯哥氏碘液(Lugol’s)中保存。如果碘液將藻類染成棕黃色而影響分類觀察，可以通過在樣品中滴加幾滴硫代硫酸鈉(Na?S?O?)溶液(3gNa?S?O?/100mL水)的方法去除。——網(wǎng)采樣品可根據(jù)樣品體積加入40%甲醛溶液，加入量為樣品體積的5%。但要小心使用甲醛溶液，因為甲醛散發(fā)出強烈的煙氣，對人體十分有害?！糜谠宥拘詸z測的浮游植物樣品，可用拖網(wǎng)反復數(shù)次采樣，直至采得足夠用于檢測的樣品，集中一起低溫保存，并盡快測定或經(jīng)離心濃縮后于一20℃保存。藻類樣品培養(yǎng)活樣品在分類鑒定方面十分有用?，F(xiàn)場采集的水樣可在低溫下(4℃左右)保存并帶至實驗室進行培養(yǎng)。在實驗室里，用生長基按1:1比例稀釋樣品。加二氧化鍺(10mg·dm-3)抑制硅藻類的過渡生9長，培養(yǎng)方法與孢子培養(yǎng)方法(5.4.3)相同；也可以配制特定的營養(yǎng)鹽以培養(yǎng)藻類樣品(參見附錄C)。定期用光學顯微鏡檢查培養(yǎng)液，用微孔移液管分離出可能是有毒種類的藻細胞，進一步培養(yǎng)和進行毒性檢測。浮游植物樣品的定性和定量分析.1定性分析首先對濃縮樣品進行定性分析，了解其中有害藻類的組成，避免在定量過程中列入非有害種。可使用普通的光學顯微鏡或相差顯微鏡進行定性分析。如果使用熒光顯微鏡分析，可以使用特定的熒光染料如CalcoFlourWhiteMR2,這是一種針對具甲板的雙鞭毛藻類細胞纖維素的特異染料。其他常用的熒光染料包括啞叮橙(AcridineOrange)、DAPI等。.2定量分析對于高濃度的有害藻類(細胞數(shù)>10*個/L)的計數(shù)可采用復式顯微鏡進行個體計數(shù)；如樣品濃度過大，則用過濾海水稀釋；但對于低濃度的有害藻類(細胞數(shù)<102~10^個·dm-3),樣品在計數(shù)前須經(jīng)過濃縮，采用倒置顯微鏡或熒光顯微鏡更為合適。通常情況下，個體小的細胞需要更長的沉降時間。一般來說大細胞(體長L>10μm)至少需沉降12h,較小的細胞要經(jīng)過24h以上才能開始計數(shù)。對于單一種有害藻類赤潮，可使用計數(shù)器(Coultercounter)或檢測葉綠素含量確定細胞數(shù)量或生物量。5.4.2底棲微藻下述步驟主要用于收集附著在大型定植藻體上的底棲微藻：——采集20g大型藻類；——將所收集的藻類放入容器，加入適量海水并用力搖晃；——上述海水通過網(wǎng)目為150μm的套篩；——收集小于150μm的藻類；——將所收集的藻類進行鑒定、記數(shù)并統(tǒng)計。5.4.3底泥孢囊含有底泥孢囊的沉積物采集.1采樣工具用于采集底泥孢囊的柱狀取樣管由25mm管徑的透明或不透明塑料管制成，長200mm。透明管可在不擾動管內(nèi)柱狀樣的情況下進行觀察(透明管也有缺點，即如果取樣管不貯存在黑暗條件下，光線可能會使柱狀樣周圍的底質(zhì)發(fā)生變化)。斜切管內(nèi)四周表面，使每個取樣管底端削尖，并在取樣管的頂端刻上刻度和數(shù)字。使用橡皮塞封住取樣管的端口，塞緊塞子以保證密封。備足取樣管和塞子(每管兩個)以滿足整個監(jiān)測的采樣需要。采有樣品的取樣管放進單獨的箱子里，保持直立狀態(tài)。.2采樣地點沉積物柱狀樣采自調(diào)查海區(qū)內(nèi)沉降和累積未受干擾且孢子可能發(fā)生的地點。采樣地點的選擇是基于該區(qū)域的深度、水文狀況和沉積相特征而決定的。作為一般的指導原則，有20cm～30cm深、非致密的精細沉積物累積的海域是研究海區(qū)環(huán)境沉積史的合適地點，從這些地點采集的樣品能夠提供雙鞭毛藻赤潮形成的信息。應該避免在最近剛疏浚過的地點采樣。.3樣品采集將取樣管壓進未受干擾的底質(zhì)內(nèi)，留出上端20mm～50mm的空間，注意不讓沉積物從管口上端溢出。在取樣管從底質(zhì)內(nèi)取出之前，用塞子封住上端口。取出后封起底端口，保持取樣管處于密封狀態(tài)。在進行粒徑分析和孢子檢查之前，柱狀樣直立放置在密閉的箱子里，于4℃黑暗中貯藏。柱狀樣不能冷凍，保持密封直到分析測試。.4采泥器采樣在不具備采集柱狀樣的情況下可使用采泥器采集底泥樣品，并進行孢囊的定性和定量分析。方法是使用0.05m3的小型采泥器在預定采集點按照沉積物或底棲生物的采樣方法進行。樣品采集上來以后放入容器，注意不要擾動，盡量保持其初始狀態(tài)。在進行粒徑分析和孢子檢查之前，樣品應放置在密閉的箱子里，于4℃黑暗中貯藏。沉積樣制備和孢子鑒定采取以下步驟制備沉積樣和鑒定孢子——小心地把頂部60mm柱狀樣從取樣管理擠壓出來，檢查之前放密封容器里于4℃黑暗貯藏；——每份擠壓出的樣品取約1cm3~2cm3與過濾海水充分混合成泥漿；——取泥漿樣5mL～10mL,然后用超聲波作用2min去除碎屑顆粒；——用90μm網(wǎng)目的篩網(wǎng)過濾樣品，收集在20μm網(wǎng)目的篩網(wǎng)上，淘洗去掉沙粒和大的碎屑顆粒；——取1mL樣品置于計數(shù)板上，用復式光學顯微鏡檢查并鑒定孢子?？赡艿脑?，每份樣品至少要計數(shù)100個孢子，并用光學顯微鏡在明視野或干涉光下照相。孢子萌發(fā)實驗采取以下步驟進行孢子萌發(fā)實驗：——沉積物分樣經(jīng)過聲波分離和粒徑分離后，在復式光學顯微鏡下用微量移液管分離出孢子；——用過濾海水洗滌兩次； 將孢子放進組織培養(yǎng)皿里，培養(yǎng)皿里含有2mL75%過濾海水，海水里添加有L1培養(yǎng)基或f/2培養(yǎng)基(見附錄H);——另外取粒徑20μm～90μm的樣品，放在含有20mL生長基、用Parafilm膠密封并消毒的聚苯乙烯培養(yǎng)皿里培養(yǎng)，所有培養(yǎng)實驗都在溫度為20℃、光照強度為80μEm-2s-1(12h光照：12h黑暗)條件下進行；——定期檢查孢子萌發(fā)情況；——用微量移液管分離培養(yǎng)出的活躍的游動雙鞭毛藻細胞，進行鑒定分析。5.4.4浮游動物按GB17378.7中規(guī)定的浮游動物測定方法進行。5.4.5微生物監(jiān)測按GB17378.7中規(guī)定的細菌總數(shù)測定方法進行。5.4.6葉綠素α按GB17378.7中規(guī)定的葉綠素α測定方法進行。5.4.7赤潮毒素檢測樣品采集可采用下述方法之一采集用于赤潮毒素檢測的樣品，每份樣品的組織濕重應大于500g?！捎玫讞锿暇W(wǎng)或采泥器采集樣品；——選定區(qū)及周圍水域的浮筏養(yǎng)殖貝類樣品；——選定區(qū)周圍捕獲的貝類或其他海產(chǎn)品樣品；——市場收購有確實捕獲地的新鮮海產(chǎn)品樣品；——潮間帶采集的貝類樣品。樣品處理用于檢測赤潮毒素的生物樣品按下述步驟操作：——現(xiàn)場采集的樣品作好標記，每個站位選取數(shù)個置于樣品瓶中，加入適量甲醛固定，用以分析其胃含物中浮游植物的種類及數(shù)量情況；其余樣品放入冰瓶或低溫冷藏箱帶回實驗室；——可立即用以進行貝毒分析的樣品經(jīng)沖洗外殼，取其軟組織或消化腺按下文所述貝毒檢測方法進行不同的預處理；——暫時不能測定貝毒或魚毒的樣品放入低溫冷柜(-20℃)中保存。麻痹性貝毒(PSP)檢測——小白鼠生物檢測法按GB17378.7中規(guī)定的赤潮毒素——麻痹性貝毒的檢測方法測定。腹瀉性貝毒(DSP)檢測——小白鼠生物檢測法本方法適用于檢測貝類或藻類樣品中腹瀉性貝毒。.2儀器設(shè)備——旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器；——天平：感量0.1g:——冰箱：——一般實驗常用儀器和設(shè)備。.3試劑——丙酮(分析純);——乙醚(分析純); .4實驗材料選擇體重約16g～20g的ICR系健康雄性小白鼠，每個貝類或藻類樣品使用3只小白鼠，總數(shù)量視實驗批次而定。采用腹腔注射方法，由受試小白鼠的存活情況和提取液的稀釋情況計算毒素含量。毒素含量以鼠單位(MU)表示。.5測試樣品制備”用于檢測DSP毒素的貝類樣品按下述步驟操作：——打開貝殼，取出軟組織，控水5min,稱取200g以上的量置于組織勻漿器中勻漿；——稱取200g貝類勻漿，置于均質(zhì)器中，加3倍量丙酮至少均質(zhì)2min,用布氏漏斗抽濾并收集濾——對殘渣以檢樣兩倍量丙酮抽濾兩次，合并濾液；——將濾液移入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器內(nèi)，減壓濃縮去除丙酮直至在液體表面分離出油狀物；——將濃縮物移入分液漏斗內(nèi)，加100mL～200后除去水層；——用相當于乙醚半量的蒸餾水洗醚層兩次，再將醚層移入300mL～500mL的平底燒瓶中，減壓濃縮去除乙醚；——以少量乙醚將濃縮物移入50或100mL的平底燒瓶中，再次減壓濃縮去除乙醚；——用10mL吐溫60生理鹽水(1%)懸浮濃縮物，并移入刻度試管內(nèi)，使1mL液量相當于貝類組織20g的量，將此懸浮液作為試驗溶液或進一步稀釋4倍或16倍的試液。.6毒性測試DSP的小白鼠生物檢測方法操作步驟如下：——取2～3只小白鼠分別于腹腔內(nèi)注射1mL1%吐溫60生理鹽水作為對照；——分別將1mL的試液注射到3只小白鼠的腹腔內(nèi)；——觀察自注射開始到24h后小白鼠的存活情況，求出1組3只中死亡2只以上的最小注射量。.7毒素含量計算毒素含量以鼠單位(MU)表示，1個鼠單位(MU)的定義是使體重16g～20g的小白鼠在24h內(nèi)死亡的毒量。每試驗小組的小白鼠(3只)在24h內(nèi)死亡2只以上時，依表2的最小注射量及最大稀釋倍數(shù)計算每g貝類軟組織中的DSP毒素含量。表2注射量與毒性的關(guān)系gMU/g(貝類組織)16倍稀釋液16倍稀釋液神經(jīng)性貝毒(NSP)檢測——小白鼠生物檢測法.1適用范圍本方法適用于檢測貝類或藻類樣品中神經(jīng)性貝毒。.2儀器設(shè)備——電子勻漿器；——分析天平；——加熱板；——帶有250mL離心管的防爆離心機(用箔覆蓋);——防爆化學頭罩；——1000mL分液漏斗；——400mL燒杯；——一次性注射器(26號針頭，不能重復使用);——秒表(記錄到至少1s)。——濃鹽酸HCl(分析純);——氯化鈉NaCl(分析純);——棉籽油(化學純);——無水二乙醚(分析純),使用未開封的醚(過氧化物可降低毒性)。.4實驗材料.4.1實驗動物選擇體重約15g～25g的健康雄性天竺鼠(瑞士韋斯特品系Swiss-WebsterstrainAlbino-mice),重量最好在(20±1)g,需保證小鼠的充分采食，但不要過量采食。每個貝類或藻類樣品使用3只以上小鼠，不要重復使用活下來的鼠。采用腹腔注射方法，由受試小鼠的存活情況和提取液的稀釋情況計算毒素含量。毒素含量以鼠單位表示。.4.2測試樣品干凈、去殼、脫水的貝類(100g勻漿需要相當于2個大蛤或8到10個小牡蠣的貝類數(shù)量)。.5樣品的制備和提取用于檢測NSP毒素的貝類樣品按下述步驟操作：——貝類組織在電子勻漿器內(nèi)高速勻漿5min;——稱取100g勻漿置于一個預先稱量的400mL燒杯中，加入5gNaCl和1mL濃鹽酸，充分攪拌；——混合物加熱至沸騰并煮沸5min,充分攪拌，然后冷卻至室溫并轉(zhuǎn)移到1000mL分液漏斗中；——無水二乙醚清洗燒杯，再將醚加入到分液漏斗中(接下來所有步驟皆應戴上防爆頭罩);——加100mL無水二乙醚至勻漿中，蓋上塞子，強烈震蕩5min(要經(jīng)常通風);——2000轉(zhuǎn)離心15min,小心傾倒上層澄清的黃色醚層至1000mL分液漏斗中，將固體留在離——反復抽提三次以上，直至使用過的醚總量達400mL;——棄去離心管底層包括小的貝類組織塊和/或水乳化液，只留下醚層。轉(zhuǎn)移醚提取液至一個400mL預先稱量好的燒杯中，直到接近0.01g;——讓醚在通風櫥中蒸發(fā)，直至看不見煙霧的蹤跡。油狀殘余物即毒素粗提物，將其保留并密封冷凍以備用于生化測定。.6毒性檢測NSP的小白鼠生物檢測方法操作步驟如下：——取9.17g粗制毒素殘余物與棉籽油混合，油與毒素混合后容量達10mL。用攪棒盡可能的徹底混勻并將余下的不溶物質(zhì)打碎；——慢慢用注射器吸取1mL棉籽油混合物，將其小心注射進兩個已經(jīng)稱重的小鼠腹部后腿前方。如果有一滴以上的注射混合液從小鼠體中泄漏出來，放棄這只小鼠，重新注射。記錄注射的時間；——如果這兩只鼠存活2h,用1mL棉籽油混合物再注射三只以上的小鼠；——如果兩只小鼠在不到2h內(nèi)死亡，將液體進行稀釋直至注射液導致小鼠在2h～6h內(nèi)死亡(建議稀釋度為1:1.25,通過向余下來的8mL棉籽油混合物中加入2mL棉籽油來完成)。如必要，應反復稀釋。當適當?shù)南♂尪缺徽业綍r，注射三只以上的小鼠；——連續(xù)觀察小鼠6h,死亡時間為從小鼠注射開始到最后死亡。小鼠一死眼睛立刻變暗。如果小鼠存活6h,持續(xù)觀察24h;——6h連續(xù)觀察期間試驗敏感度的最低極限為20MU/100g貝類組織。連續(xù)觀察時間持續(xù)到15.5h,試驗敏感度將提高到10MU/100g貝類。如果24h持續(xù)觀察時間內(nèi)小鼠出現(xiàn)死亡，說明毒素含量較低；——試驗期間小鼠可能不出現(xiàn)死亡，但NSP中毒的生理癥狀可以被觀察到。較低含量NSP的中毒的癥狀(非致死)普遍表現(xiàn)為足無力，失衡，偶爾的呼吸痙攣，以及持續(xù)的無活力。急性中毒癥狀包括由前后肢癱瘓引起的不穩(wěn)定性，呼吸困難，體力衰竭或活躍異常。只注射棉籽油，觀察非中毒行為作對照。.7毒性計算按式(1)計算100g貝類軟組織中的毒素含量(MU/100g):p=DAB (1)式中：A——每試驗組小白鼠平均死亡時間在表3中查得的相應鼠單位；B——每試驗組小白鼠平均體重重量修正值；D——提取液的稀釋倍數(shù)。表3小白鼠死亡時間與鼠單位關(guān)系表20g重小白鼠其他重量的小白鼠S鼠單位/鼠的重量/g8根據(jù)以下幾點說明，結(jié)合計算結(jié)果確定NSP毒素的含量：——如果不做另外的稀釋度，以最初添加棉籽油到10mL為基礎(chǔ)，使用10倍稀釋度?！绻隽硗獾南♂專瑧紤]其他因素，需添加表3所列死亡時間和重量修正值。例如：如果一只重22.3g的鼠在390min內(nèi)死亡，使用最初稀釋度，那么MU=1.9×1.14×10=21.7;——如果鼠在連續(xù)觀察后死亡，即使小鼠是在連續(xù)觀察的末期發(fā)生死亡，也要計算毒性(MU)。結(jié)果可以用不確定值“小于”來表示，因為在這一時間段中測試結(jié)果低于試驗設(shè)計的敏感性；10MU/100g貝類軟組織；——如果鼠100%死亡，而且死亡時間確定，計算MU的均值；如果觀察到鼠小于100%的死亡率或死亡時間確定，可以計算MU的中值；——當報道非確定毒性時，記錄24h內(nèi)死亡的小鼠數(shù)量；或者如果小鼠沒有死亡，報道毒素未檢出(<10MU/100g貝類組織)。每100g貝類組織中任何可檢出的毒素水平對于人類健康都存在潛在的不安全性。失憶性貝毒(ASP)檢測——小白鼠生物檢測法.1適用范圍本方法適用于檢測貝類或藻類樣品中失憶性貝毒。該方法對貝類組織中高濃度毒素成分(300μg/g～1000μg/g)貝類組織的檢測十分成功，但不適用于作用水平在20μg/g貝類組織的情況。.2檢出限檢出限為40μg/g貝類軟組織。.3檢測步驟：失憶性貝毒鼠生物測試法按照GB17378.7中規(guī)定的麻痹性貝毒(PSP)的毒性分析方法進行。因ASP對小鼠有獨特的搔抓癥狀反應，需要進行15min以上的連續(xù)觀察，持續(xù)觀察時間延長至4h以上。西加魚毒素(CFP)檢測——小白鼠生物檢測法.1適用范圍本方法適用于檢測魚類或藻類樣品中西加魚毒素(CTXs,1個鼠單位約5ngCTX-1),本方法可檢測到20mg受污染的魚肉組織中所含的毒素。.2樣品初步處理用于檢測CFP毒素的魚類樣品按下述步驟操作：——魚類組織樣品(>50g)放入塑料烹調(diào)袋中于70℃水浴約15min,樣品切碎，加入丙酮——丙酮懸浮液通過Whatman#1濾紙，收集濾液；重復勻漿和過濾的步驟，合并濾液，于55℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，除去丙酮和大部分的水分；——按每100g組織樣品加50mL甲醇-水(9:1)(體積比)溶液，在分液漏斗內(nèi)加入1:1(體積比)正己醇-水，搖勻，靜置后除去表層己醇，用己醇再次提取甲醇-水層，55℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去丙酮和大部分水分；——按每100g組織樣品加50mL正乙醇-水(1:3)溶液，在分液漏斗內(nèi)加入1:1(體積比)己醚-水，搖勻，靜置后收集表層醚層，用己醚再次提取水層兩次，由40℃升至55℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)干燥冷卻下來的醚組分，即為提取出的CTXs。.3用作注射液的乙醚提取液的制備根據(jù)以下步驟制備用作注射液的乙醚提取液：——將上述提取液用二氯甲烷-甲醇(97:3)溶解至一定體積；——移取一定數(shù)量的待測樣品的等分溶液；——使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)或吹氮法除去溶劑；——干燥物中加入1%～5%的Tween-60/0.9%生理鹽水溶液，使終體積保持在每份注射量0.1~.4毒性檢測CFP的小白鼠生物檢測方法操作步驟如下：——選擇不同性別的18g～22g體重的小白鼠于25——標定注射部位，放于細鐵絲籠中(勿重復使用);——用1mL的注射器抽取所需體積0.1mL～0.5mL℃室溫下喂養(yǎng)(L:D=12:12);的注射液；——預試驗首先在小鼠腹部注入≤20mg提取物的劑量；——計錄每只小鼠的注射時間、體重、性別、注射劑量(提取物重量，g)、發(fā)作時間、自然反應和死亡時間等(最少觀察24h);——每一劑量最少用兩只小鼠，如在40min內(nèi)死亡(Ciguatoxin量超過10MU),在低毒情況下(約2MU)重新開始試驗；——如提取物引起低體溫(<33℃)、呼吸困難、喘氣以及持續(xù)腹瀉、流淚和/或多涎，根據(jù)式(2)計算混合毒素的鼠單位：式中，T為死亡時間(s);——如產(chǎn)生上述癥狀但不致死，4d后體重急劇下降，約含有0.5MU。5.5水化學要素監(jiān)測5.5.1溶解氧(DO)——碘量法采用GB17378.4規(guī)定的測定方法。采用GB17378.4規(guī)定的測定方法。5.5.3化學需氧量(COD)——堿性高錳酸鉀法采用GB17378.4規(guī)定的測定方法。5.5.4硝酸鹽(NO?)——鋅鎘還原法采用GB17378.4規(guī)定的測定方法。5.5.5亞硝酸鹽(NO2)——重氮-偶氮分光光度法采用GB17378.4規(guī)定的測定方法。5.5.6氨(NH)——靛酚藍分光光度法采用GB17378.4規(guī)定的測定方法。5.5.7無機磷——磷鉬藍分光光度法采用GB17378.4規(guī)定的測定方法。5.5.8活性硅酸鹽(SiO3-)——硅鉬黃法和硅鉬藍法采用GB17378.4規(guī)定的測定方法。5.5.9鐵(Fe)——原子吸收分光光度法海水中痕量鐵元素的測定參見附錄D。5.5.10錳(Mn)——原子吸收分光光度法海水中痕量錳元素的測定參見附錄E。5.5.11海水中維生素B?(Vg)——熒光測定法海水中維生素B?(Vm)的測定參見附錄F。5.5.12海水中維生素B??(Vgi?)——生物培養(yǎng)C1測定法海水中維生素B??(V?)的測定參見附錄G。5.6赤潮遙感監(jiān)測技術(shù)赤潮遙感監(jiān)測技術(shù)參見附錄H。6赤潮監(jiān)測與分析指標6.1赤潮判別指標6.1.1感官指標海水的顏色、嗅味和透明度等是初步判定水域是否發(fā)生赤潮的直觀指標。顏色變化，海水透明度低，產(chǎn)生惡臭，發(fā)粘等是發(fā)生赤潮的指標性特征。6.1.2生物量指標赤潮生物量是指該海域的浮游生物群落組成中，赤潮生物種類在單位水體中的個體數(shù)，與形成赤潮的生物個體大小密切相關(guān)。表4為判斷是否形成赤潮的赤潮生物個體與生物量標準的參考指標(細胞基準密度的參考指標參見附錄B)。表4赤潮生物個體與生物量標準赤潮生物細胞濃度/表5為判斷海水水質(zhì)營養(yǎng)狀況的單項指標。富營養(yǎng)化指標無機磷/葉綠素a/.1營養(yǎng)指數(shù)法(E)ccon=3.0mg·dm-3;c÷-x=0.6mg·dm-3;c÷-p=0.03mg·dm-3;cca-a=10μg·dm-3。NQI值中營養(yǎng)水平富營養(yǎng)水平 (5)式中：COD?=3.0mg·dm-3;DIN?=0.10mg·dm-3;DIP?=0.01表7海域有機污染評價分級表012345良好中度污染P;——第i種的細胞個數(shù)與總細胞數(shù)的比值。中度污染注：赤潮發(fā)生時生物的多樣性指數(shù)通常在0～1之間，是嚴重富營養(yǎng)化的表現(xiàn)。不同類型赤潮毒素的作用與癥狀見附錄J表J.1。不同國家和地區(qū)及本規(guī)程提出的赤潮毒素警戒標準與分析方法見附錄J表J.2。PSP毒素的警戒標準為每100g貝類軟組織中STX(石房蛤毒素)含量不得高于80μg(相當于腹瀉性貝毒(DSP)警戒標準DSP毒素的警戒標準為小鼠的存活情況，即使用鼠生物測定法時，24h內(nèi)3只小鼠死亡2只以上赤潮經(jīng)濟損失評估方法參見附錄K。海洋赤潮監(jiān)測數(shù)據(jù)報表見附錄L;赤潮監(jiān)測(預警)(規(guī)范性附錄)赤潮監(jiān)測出海前準備A.1設(shè)備檢修檢修船上各種采樣設(shè)備，包括絞車、吊桿、鋼絲繩(φ14.8mm左右)、計數(shù)器等以及沖水設(shè)備，如沖洗網(wǎng)具用的水泵、水管及沖洗網(wǎng)底用的水桶、吸水球等。A.2樣品與固定劑根據(jù)調(diào)查站數(shù)、層次計算采樣數(shù)量，配以足量有編號的樣品瓶(500mL廣口瓶)、固定劑及其他器材，固定劑包括以下內(nèi)容。A.2.1甲醛用于固定各種網(wǎng)采的浮游生物，用量按標本瓶容量的5%準備(例如每500mL的標本瓶需準備25mL的甲醛)。A.2.2魯哥氏(Lugol's)碘液將100gKI溶于1L蒸餾水，然后溶入50g結(jié)晶碘，使之成為碘的飽和溶液，再加入100g冰醋酸，即成為酸性魯哥氏碘液。用于固定采水樣品時，每升水樣加碘液2mL～4mL,使溶液顯示淡褐色即成。A.3浮游生物采樣工具A.3.1采水器用于采集浮游植物水樣的工具，可采用顛倒采水器或球蓋式有機玻璃采水器。淺水Ⅲ型浮游生物網(wǎng)，用于垂直或分層采集浮游植物的主要工具，淺水Ⅱ型浮游生物網(wǎng)，用于垂直或分層采集夜光藻和中小型浮游生物的工具，可對浮游生物樣品進行定性和定量分析。A.3.3甲藻類浮游生物網(wǎng)用小型手拖浮游生物網(wǎng)采集水體里甲藻。網(wǎng)高450mm,網(wǎng)口內(nèi)徑250mm,網(wǎng)底口直徑為50mm。該網(wǎng)是由20μmHDNytal篩絹做成，由系帶系在直徑5mm的不銹鋼棒制成的內(nèi)徑250mm網(wǎng)圈上網(wǎng)底口連接一個塑料旋口采樣瓶，采樣瓶用一個環(huán)形壓圈連在網(wǎng)底口上。A.3.4浮游動物拖網(wǎng)用標準的100μm網(wǎng)目浮游生物拖網(wǎng)采集浮游動物。網(wǎng)長1m～5m,網(wǎng)口內(nèi)徑700mm,網(wǎng)底口內(nèi)徑100mm。該網(wǎng)由系帶系在一個由直徑20mm～25mm鍍鋅鋼管制成的直徑700mm網(wǎng)圈上。網(wǎng)上裝有閉鎖器，拉緊拉繩即將網(wǎng)關(guān)閉。網(wǎng)圈上增加重物以達到合適的下網(wǎng)速度。網(wǎng)底口連接一個塑料或不銹鋼杯子，通過此杯底部的排放孔可以排出杯內(nèi)的水或?qū)⑵鋸木W(wǎng)上擰下，取出浮游生物樣品。A.3.5底棲微藻150μm的尼龍或銅制套篩。A.3.6底泥孢囊柱狀取樣管用于檢測雙鞭毛藻孢囊，柱狀取樣管由內(nèi)徑25mm,長200mm透明塑料管制成。A.3.7其他工具包括網(wǎng)底管、閉鎖器、沉錘(重5kg～30kg)、偏角器、流量計等。(資料性附錄)中國近岸、近海赤潮生物種名錄及形成赤潮時的基準濃度見表B.1。表B.1中國近岸、近海赤潮生物種名錄及形成赤潮時的基準濃度個/L藍藻門念珠藻目顫藻屬1.紅海顫藻(Syn.)紅海束毛藻(Syn.)薛氏束毛藻硅藻門中心硅藻綱盒形藻目圓篩藻亞目小環(huán)藻屬骨條藻屬海鏈藻屬7.諾氏海鏈藻10.細弱海鏈藻11.威氏海鏈藻CyanophyceaeGarrity,Winters&.SearlesOscillatorialesR.Rippka,etaTrichodesmiumBergeyOscillatoriaerythraea(EhrCyclotellacrypticaReimannThalassiosirahyalina(Grunow)Gran1897ThalassiosirapacificaMicropodiscusweissflogiiGrynow十十十十十十十十十十+十十十十十十十十十十十十十十十十個/L帕拉藻屬12.具槽帕拉藻冠蓋藻屬13.掌狀冠蓋藻細柱藻屬14.丹麥細柱藻15.地中海細柱藻圓篩藻科圓篩藻屬16.星臍圓篩藻17.中心圓篩藻18.巨形圓篩藻19.格氏圓篩藻22.威氏圓篩藻23.孔圓篩藻盒形藻亞目眼紋藻科齒狀藻屬(Syn.)長耳盒形藻(Syn.)中華盒形藻角毛藻屬26.窄隙角毛藻Melosirasulcata(EhrenbeStephanopyxis(Ehrenberg)EhrenStephanopyxispalmeriana(Greville)GrunowGreswelliapalmeriaDactyliosolenmediterraneusCoscinodiscuscentraliCoscinodiscusjonesianus(Greville)Ostenfeld19CoscinodiscuswailesiiGran&.AngstOdontellaaurita(Lyngbye)C.A.Agardh15十十十十十十十十+十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十++表B.1(續(xù))(Syn.)冕孢角毛藻35.洛氏角毛藻(Syn.)智利角毛藻彎角藻屬雙尾藻屬根管藻亞目根管藻屬(Syn.)細長翼根管藻(Bas.)半棘根管藻(Syn.)長筆尖根管藻幾內(nèi)亞藻屬(Bas.)萎軟根管藻ChaetocerospseudocurvisetusMangin19Rhizosoleniineae(P.Silva)Tomas19Rhizosolenia(Ehrenberg)Brightwell18Rhizosoleniaalatavar.Rhizosoleniastyliformisf.loRhizosoleniastyliformisvar.loGuinardiaflaccida(Castracane)PeragRhizosolenia(?)flaccidaCa十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十+十+++十十十十十十十十十十十+十十十十+++十十十十十十十十十十十十+十十個/L指管藻屬棍形藻目脆桿藻亞目擬星桿藻屬(Bas.)冰河星桿藻(Bas.)加氏星桿藻海毛藻屬海線藻屬棍形藻亞目棍形藻屬(Syn.)奇異棍形藻(Syn.)奇異菱形藻擬菱形藻屬(Bas.)尖刺菱形藻菱形藻屬甲藻門甲藻綱縱裂甲藻亞綱原甲藻目Guinardiastriata(Stolterfoth)HaslecoRhizosoleniastolterfoDactyliosolenfragilissimBacillarialesAnonymous1975,Asterionellopsiskariana(Grunow)Round1990AsterionellakarianaGrunThalassionemaGrunow&.Mereschkowsky1902Thalassionemanitzschioides(Grunow)MereschkowskSynedranitzschioidesGrunBacillariineaeMann1978,RBacillariapaxillifera(O.F.Muller)HeNitzschiaparadoxaGrunowinCleve&.GrunowPseudo-nitzschiaH.PPseudo-nitzschiapungens(Grunow&.Cleve)HasleNitzschiapungensG十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十表B.1(續(xù))原甲藻屬(Bas.)小型卵甲藻(Syn.)尖葉原甲藻裸甲藻目前溝藻屬(Syn.)克氏前溝藻旋溝藻屬70.盤繞旋溝藻凱倫藻屬(Syn.)裸甲藻屬(Bas.)短裸甲藻(Bas.)米氏裸甲藻(Syn.)長崎裸甲藻ProrocentrumdonghaienseProrocentrumminimum(Pavillard)SchillerProrocentrumsigmoidesAmphidiniumClapareAmphidiniumoperculatumClAmphidiniumklebsiiKCochlodiniumhelixKofoidCochlodiniumpolykrikoKareniabrevis(Davis)G.Hansen&.MoestrupKareniamikimotoiG.Hansen&.Moestrup2GymnodiniummikimotoiMiyGymnodiniumnagasakienseTakayama&.Adachi1984英￥￥十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十+十十十十東海哈卡藻屬(Syn.)裸甲藻屬(Bas.)血紅裸甲藻裸甲藻屬環(huán)溝藻屬(Syn.)裸甲藻屬下溝藻屬多溝藻科多溝藻屬褐多溝藻屬(Syn.)哈曼多溝藻尖尾藻屬夜光藻目夜光藻屬鰭藻目GyrodiniumfalcatumKofoiKatodiniumglaucum(Loebour)Loeblich19PolykrikaceaeKofoid&.SwePheopolykrikoshartmanniiMatsuoka&.Fukuyo1986PolykrikoshartmanniiZimmermannPolykrikosbarnegatensisMartOxyrrhisDujardin18￥十十十十十十+十十十十十十十十十十十十十十十十表B.1(續(xù))個/L雙管藻屬87.二齒雙管藻鰭藻屬89.尖銳鰭藻91.倒卵形鰭藻92.勇士鰭藻93.帽狀鰭藻禿頂藻屬膝溝藻目亞歷山大藻屬(Syn.)膝溝藻屬(Syn.)麥甲藻屬(Syn.)相關(guān)原膝溝藻(Bas.)鏈狀膝溝藻(Syn.)鏈狀原膝溝藻DinophysisacuminatPhalacromadolichoptProdinophysismitra(Schütt)BalechPhalacromarotundatumKofAlexandriumaffine(InAlexandriumcatenella(Whedon&.Kofoid)Balech1985Protogonyaulaxcatenella(Whedon&.Kofoid)Taylor1十十十十十十十十十+十十十十十十十十十十十個/L(Bas.)塔馬膝溝藻岡比甲藻屬100.具毒岡比甲藻膝溝藻屬101.雙刺膝溝藻102.具指膝溝藻103.多紋膝溝藻104.具刺膝溝藻(Syn.)具刺多甲藻105.春膝溝藻舌甲藻屬106.多邊舌甲藻(Syn.)多邊膝溝藏斯克里普藻屬107.錐形斯克里普藻扁甲藻屬108.斯氏扁甲藻Alexandriumcohorticula(Balech)Balech1985Alexandriumtamarense(Alexandriumexcavatum(Braarud)Balech&.Tangen1985Gessneriumtamarense(LebouGonyaulaxtamarensisvar.Protogonyaulaxtamarense(Lebour)TaylorGambierdiscusAdachi&.Fukuyo1979GonyaulaxdiegensisGonyaulaxspinifera(Claparede&.Lachmann)DiesinPeridiniumspiniferumClapGonyaulaxdiacantha(Meunier)Schiller1937Lingulodinium(Stein)DodgLingulodiniumpolyedrum(Stein)Dodge19Scrippsiellafaeroense(Paulsen)BalechPeridiniumtrochoideum(Stein)LemmePeridiniumfaeroenseGlenodiniumtrochoideumPyrophacushorologicumvar.stei十十十十十十十十十十十十十十+十十十十十十十十十表B.1(續(xù))東海109.未命名礪甲藻屬110.暹羅礪甲藻角藻屬111.短角藻(Syn.)叉狀多甲藻113.梭角藻114.大角角藻115.馬西里斯角藻117.三角角藻(Syn.)多甲藻科原多甲藻屬(Syn.)多甲藁屬118.錐形原多甲藻(Syn.)錐形多甲藻(Syn.)優(yōu)美多甲藻122.里昂原多甲藻Glenodiniummonotis(Meunier)BieOstreopsismonotis(Meunier)LindemCeratiumfurca(Ehrenberg)Claparede&.LCeratiummacroceros(Ehrenberg)VanhoffCeratiummassiliense(Ceratiumtrichoceros(Ehrenberg)kofoid19ProtoperidiniaceaeF.J.R.Taylor1987Peridiniumconicum(Gran)Ostenfelds&.SPeridiniumdivergensvar.conicaProtoperidiniumdepressum(Bailey)BalecPeridiniumdepressumBProtoperidiniumdivergens(Ehrenberg)BalecPeridiniumdivergensEhrGlenodiniumdivergens(Ehrenberg)DaProtoperidiniumelegans(Cleve)Balech1974Protoperidiniumoceanicum(VanHoffen)Balech19※￥11十十十十十十十十十十十十十十十十十十十個/L124.透明原多甲藻125.五角原多甲藻(Syn.)五角多甲藻著色鞭毛藻門隱藻綱隱鞭藻目隱鞭藻科隱藻屬126.波羅地海粉隱藻卡盾藻目卡盾藻屬127.古老卡盾藻128.海洋卡盾藻異彎藻屬129.赤潮異彎藻定鞭金藻綱定鞭金藻目定鞭金藻屬130.小三毛金藻棕囊藻屬131.球形棕囊藻132.普氏棕囊藻硅鞭藻目PeridiniumpelluciduProtoperidiniumpentagonum(Gran)BalechPeridiniumpentagonumCryptomonadaceaeEhrenRhodomonasbalticaKHemieutreptiaantique(HadaChattonellamarina(Subrahmanyan)HaraHeterosigmaakashiwo(Hada)Phaeocystispouchetii(￥關(guān)十十十十十十十十十十十十十十+十表B.1(續(xù))個/L硅鞭藻屬133.小等刺硅鞭藻134.六異刺硅鞭藻動鞭門醉藻目醉藻屬135.三深裂醉藻(Syn.)三深裂硅鞭藻綠藻門裸藻目裸藻屬136.纖細裸藻137.綠裸藻原生動物(門)棍形亞門纖毛蟲綱(Bas.)反口綱棒柄目(Bas.)毒胞目中縊蟲屬138.紅色中縊蟲Distephanusspeculum(EhEbriidae(Lemmermann)Deflandre1950Ebriatripartita(SchKinetofragminophoreaBrusca&.BruscaMesodiniumrubrum(Lohmann)Hamdden十十十十十注2:“*”——含有某種毒素的赤潮生物種。注3:“?”——懷疑含有毒素的赤潮生物種。注4:ASP——含有失憶性貝毒的赤潮生物種。注5:DSP——含有腹瀉性貝毒的赤潮生物注6:NSP——含有神經(jīng)性貝毒的赤潮生物注7:PSP——含有麻痹性貝毒素的赤潮生物種。注8:CFP——含有西加魚毒素的赤潮生物種。注10:Bas.——Basionym,基(資料性附錄)藻類培養(yǎng)液配方C.1f/2培養(yǎng)液(Guillard&Ryther1962,Guillard1975)C.1.1堿性土壤提取液將兩份純水和一份富含有機質(zhì)的花園土(最近一段時間未使用過化肥和殺蟲劑)混合一起，每升加入2g～3gNaOH。高壓滅菌2h,冷卻并過濾。隨后用純水將這些濃縮后的提取物稀釋為50:1的貯C.1.2f/2微量元素在950mL純水中加入表C.1組分，加入純水使溶液終體積達到1L,高壓滅菌。表C.1f/2微量元素配方貯藏液(純水)終濃度/(mol/L) C.1.3f/2維生素先將表C.2所列組分分別用純水溶解后混合，再用稀HCl將pH調(diào)至4.5～5.0,最后用純水稀釋至1L。用濾膜或壓熱消毒后冰凍保存，保存理想溫度為-20℃。貯藏液(純水)終濃度/(mol/L)維生素B??(鈷胺素)維生素H(生物素)維生素B?(鹽酸硫胺素)注：維生素B?和維生素H均為水合晶體。制備維生素B?貯藏液時，允許其中含有11%結(jié)晶水(每1.0g維生素Bi?加入0.89mL純水);制備維生素H貯藏液時，允許其中含有4%結(jié)晶水(每1.0g維生素H加入9.6mL純水)。在950mL過濾海水中加入表C.3中組分，并加入15mL堿性土壤提取液(C.1.1),使用過濾海水使溶液終體積達到1L,高壓滅菌。該溶液即為通用培養(yǎng)液，可用于大多數(shù)藻類及甲藻類孢子的培養(yǎng)。貯藏液(純水)終濃度/(mol/L)見表C.1C.2L,培養(yǎng)液(Guillard&Hargraves1993)在950mL純水中加入表C.4組分，加入純水使溶液終體積達到1L,高壓滅菌。貯藏液(純水)終濃度/(mol/L)C.2.2L?維生素L?維生素配方同f/2的維生素配方(C.1.3)。L?營養(yǎng)鹽配方同f/2的營養(yǎng)鹽配方(C.1.3)。該溶液也可以配合使用土壤提取液。L?培養(yǎng)液可用于大多數(shù)藻類及甲藻類孢子的培養(yǎng)。(資料性附錄)海水中痕量鐵元素的測定D.1適用范圍及應用領(lǐng)域本方法適用于大洋、近岸和河口海水中痕量鐵元素的測定。檢出限：0.03μg·dm-3。D.2方法原理采用吡咯烷二硫代氨基甲酸銨(APDC)/二乙基二硫代氨基甲酸二乙基銨(DDDC)絡(luò)合，甲基異丁酮—環(huán)己烷萃取及稀硝酸反萃取，無焰原子吸收分光光度法測定。D.3儀器及設(shè)備——原子吸收分光光度計，配石墨爐及自動進樣裝置，Pb、Cd用無極放電燈，其余為空心陰極燈；——分液漏斗1L及125mL,透明氟化乙丙烯(FEP)制品，活塞為聚四氟乙烯；——器皿及其處理所用器材均為聚四氟乙烯，聚乙烯及石英等材料制成。新塑料器皿用洗潔精清洗后，用氯仿擦洗表面，于(55±5)℃下的5mol·cm-3HNO?水溶液中浸泡一周，用水清洗后于(55±5)℃的0.01mol·cm-3HNO?水溶液中至少浸泡一周，使用過的器皿浸泡于0.01mol·cm-3HNO?水溶液中，新石英器皿用10%HF浸泡5min后，洗滌程序同上；——環(huán)境化學操作在100級潔凈實驗室進行，穿潔凈服，戴潔凈帽和聚乙烯手套，儀器間為一般空調(diào)實驗室。D.4試劑及其配制自來水經(jīng)反滲透系統(tǒng)處理后，再經(jīng)Mill-Q系統(tǒng)(粗過濾、活性炭及混合樹脂處理，最后用0.2μm濾膜過濾),電阻率大于15×10°Ω·cm。高純水再經(jīng)石英亞沸蒸餾器蒸餾，用氨水調(diào)pH至8,放置1個月后使用。超純硝酸、鹽酸及醋酸用石英亞沸蒸餾器蒸餾，貯存在FEP瓶中。氣體氨經(jīng)一列盛有高純水的聚乙烯瓶吸收，取第三瓶以后的氨水使用?；蛴脙?yōu)級純氨水于(48±5)℃下等壓蒸餾，以盛有高純水的聚乙烯瓶在冰浴中吸收。D.4.4甲基異丁酮-環(huán)己烷TF(1,1,2-氯，1,2,2-氟乙烷)分析純。使用前加入其1%體積的濃硝酸，振蕩1min,放置5min,然后用水萃取兩次。D.4.52mol·cm-3醋酸銨溶液用醋酸和氨水配制，其緩沖范圍為pH4.5±0.2。配制后用40mL甲基異丁酮-環(huán)己烷分三次萃取。此溶液可使用一周。D.4.7標準溶液貯備液濃度1mg·cm-3,根據(jù)需要稀釋至相應濃度，介質(zhì)為0.3mol·cm-3HNO?