動(dòng)物細(xì)胞融合單克隆抗體

關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞融合單克隆抗體abcde植物細(xì)胞雜交技術(shù)第2頁(yè),共39頁(yè)，2024年2月25日，星期天人-鼠(想像圖)材料1:1970年，有兩位科學(xué)家做了一個(gè)人—鼠細(xì)胞融合的實(shí)驗(yàn)，以證明細(xì)胞膜的流動(dòng)性。那么，如何實(shí)現(xiàn)人—鼠細(xì)胞的融合，動(dòng)物細(xì)胞融合后還有什么用途呢？第3頁(yè),共39頁(yè)，2024年2月25日，星期天A細(xì)胞B細(xì)胞人工誘導(dǎo)1、動(dòng)物細(xì)胞融合的概念雜交細(xì)胞

動(dòng)物細(xì)胞融合（也稱細(xì)胞雜交）：是指兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞融合形成一個(gè)單核細(xì)胞的過程。一、動(dòng)物細(xì)胞融合如：B淋巴細(xì)胞如：骨髓瘤細(xì)胞第4頁(yè),共39頁(yè)，2024年2月25日，星期天細(xì)胞膜的流動(dòng)性滅活病毒、PEG、電激等融合后的細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂，形成完整的雜交細(xì)胞3、誘導(dǎo)的手段？融合后細(xì)胞的類型？AB雜種細(xì)胞遺傳物質(zhì)有什么特點(diǎn)？三種AA、AB、BB（A、B）含兩種生物的遺傳物質(zhì)2、原理？第5頁(yè),共39頁(yè)，2024年2月25日，星期天4、動(dòng)物細(xì)胞融合過程滅活喪失感染性保留融合活性病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細(xì)胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細(xì)胞互相凝聚，細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合。滅活是指用物理或化學(xué)手段使病毒或細(xì)菌失去感染能力，但并不破壞這些病原體的抗原結(jié)構(gòu)。第6頁(yè),共39頁(yè)，2024年2月25日，星期天比較項(xiàng)目細(xì)胞融合的原理細(xì)胞融合前的處理方法誘導(dǎo)手段用途植物體細(xì)胞雜交纖維素酶、果膠酶去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合離心、電刺激、振動(dòng)、聚乙二醇克服遠(yuǎn)源雜交不親和，獲得雜種植株動(dòng)物細(xì)胞融合用胰蛋白酶使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合除應(yīng)用植物細(xì)胞雜交手段外，還有滅活病毒獲得雜種細(xì)胞、制備單克隆抗體5、比較動(dòng)、植物體細(xì)胞雜交技術(shù)細(xì)胞膜的流動(dòng)性植物細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜的流動(dòng)性第7頁(yè),共39頁(yè)，2024年2月25日，星期天1、能使動(dòng)物細(xì)胞融合的特有的誘導(dǎo)因子是A.離心B.滅活的病毒C.電刺激D.振動(dòng)2、融合后的雜交細(xì)胞的遺傳物質(zhì)有何特點(diǎn)A.具有原來兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞的遺傳信息B.能無限增殖C.可形成新個(gè)體D.培養(yǎng)過程會(huì)貼壁3、動(dòng)物細(xì)胞融合的作用中最重要的是（）A.克服遠(yuǎn)源雜交不親和B.制備單克隆抗體C.培育新物種D.生產(chǎn)雜種細(xì)胞BAB第8頁(yè),共39頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二課時(shí)2.2.2動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體第9頁(yè),共39頁(yè)，2024年2月25日，星期天復(fù)習(xí)回顧：動(dòng)物細(xì)胞融合（也稱動(dòng)物細(xì)胞雜交技術(shù)）（1）融合前處理（2）原理：（3）誘導(dǎo)融合方法（4）意義：第10頁(yè),共39頁(yè)，2024年2月25日，星期天植物體細(xì)胞雜交和動(dòng)物細(xì)胞融合的比較比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合原理融合前處理誘導(dǎo)融合方法主要用途獲得植物新品種細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性植物細(xì)胞全能性酶解法（纖維素酶和果膠酶）去除細(xì)胞壁胰蛋白酶或膠原蛋白酶使細(xì)胞分散離心、振蕩、電刺激、聚乙二醇離心、振蕩、電刺激、聚乙二醇滅活的病毒制備單克隆抗體第11頁(yè),共39頁(yè)，2024年2月25日，星期天二、單克隆抗體第12頁(yè),共39頁(yè)，2024年2月25日，星期天強(qiáng)調(diào)：效應(yīng)B淋巴細(xì)胞是能夠產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞，下文將其簡(jiǎn)稱為B淋巴細(xì)胞能夠與抗原發(fā)生特異性結(jié)合的免疫球蛋白。B淋巴細(xì)胞效應(yīng)B細(xì)胞記憶B細(xì)胞增殖分化復(fù)習(xí)回顧抗體第13頁(yè),共39頁(yè)，2024年2月25日，星期天抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法抗原

反復(fù)注射動(dòng)物從動(dòng)物的血清中分離抗體該法制備抗體的缺點(diǎn)：產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度低。如何解決這個(gè)問題呢？單克隆抗體！同時(shí)有其它抗原和抗體的存在第14頁(yè),共39頁(yè)，2024年2月25日，星期天

人們發(fā)現(xiàn)，在動(dòng)物發(fā)生免疫反應(yīng)的過程中，體內(nèi)的B細(xì)胞可以產(chǎn)生多達(dá)百萬種以上的特異性抗體，但是每個(gè)（效應(yīng)）B細(xì)胞只分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。要想獲得大量的單一抗體，必須用單個(gè)B細(xì)胞進(jìn)行無性繁殖，即克隆。1、單克隆抗體的概念單個(gè)B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體單克隆抗體第15頁(yè),共39頁(yè)，2024年2月25日，星期天提示1：一種效應(yīng)B細(xì)胞只能產(chǎn)生一種抗體對(duì)（效應(yīng)）B細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)可行嗎？正常情況下，細(xì)胞分裂次數(shù)是？提示2：我們所學(xué)的哪種細(xì)胞是可以無限增殖的？問題：如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？請(qǐng)嘗試設(shè)計(jì)一個(gè)方案。2、單克隆抗體的制備原理第16頁(yè),共39頁(yè)，2024年2月25日，星期天一個(gè)（效應(yīng)）B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖雜交瘤細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)設(shè)計(jì)方案：動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)單克隆抗體

既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量增殖的細(xì)胞1975年英國(guó)科學(xué)家米爾斯坦和柯勒的實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)原理：第17頁(yè),共39頁(yè)，2024年2月25日，星期天①為什么給小鼠注射特定的抗原蛋白？②融合后會(huì)有多少種細(xì)胞類型？（考慮2個(gè)之內(nèi)）③雜交瘤細(xì)胞是如何篩選出來的？有何特點(diǎn)？④是否所有的雜交瘤細(xì)胞都能產(chǎn)生專一性抗體？⑤如何大規(guī)模進(jìn)行培養(yǎng)得到大量的單克隆抗體？學(xué)習(xí)任務(wù)：1、帶著下列問題閱讀課本53-54頁(yè)第二自然段2、用文字和箭頭整理出制備單克隆抗體的過程3、單克隆抗體的制備過程第18頁(yè),共39頁(yè)，2024年2月25日，星期天BB、B瘤、瘤瘤（B、瘤）（一選）選擇培養(yǎng)基：只有雜交瘤細(xì)胞才能存活獲得產(chǎn)生相應(yīng)抗體的效應(yīng)B細(xì)胞（二選）：選能產(chǎn)生所需專一抗體的雜交瘤細(xì)胞√體外培養(yǎng)小鼠腹腔內(nèi)培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞特點(diǎn)：既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量增殖。第19頁(yè),共39頁(yè)，2024年2月25日，星期天已免疫過的小鼠檢測(cè)后提取效應(yīng)B細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞BB細(xì)胞、B瘤細(xì)胞、瘤瘤細(xì)胞、B細(xì)胞、瘤細(xì)胞細(xì)胞融合HAT培養(yǎng)基雜交瘤細(xì)胞（B瘤細(xì)胞）克隆、檢測(cè)雜交瘤細(xì)胞小鼠腹水體外培養(yǎng)液注入提取單克隆抗體產(chǎn)生所需抗體多種第20頁(yè),共39頁(yè)，2024年2月25日，星期天4、單抗制備過程分哪幾步？請(qǐng)用箭頭把以下代表單克隆抗體制備過程步驟的圖解的字母按正確順序連接起來。順序是？

第21頁(yè),共39頁(yè)，2024年2月25日，星期天診斷試劑——最廣泛應(yīng)用準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速單克隆抗體最主要的優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)，靈敏度高，化學(xué)性質(zhì)單一，并能大量制備。4、單克隆抗體的應(yīng)用第22頁(yè),共39頁(yè)，2024年2月25日，星期天“生物導(dǎo)彈”＝單克隆抗體＋藥物單抗導(dǎo)向，藥物為彈頭治療疾病和運(yùn)載藥物主要用于治療癌癥治療，單克隆抗體作為載體，運(yùn)載抗癌藥物，形成“生物導(dǎo)彈”，準(zhǔn)確殺傷癌變細(xì)胞。第23頁(yè),共39頁(yè)，2024年2月25日，星期天兩個(gè)過程動(dòng)物細(xì)胞融合過程單克隆抗體制備過程三個(gè)“一”一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法－－滅活病毒一個(gè)新細(xì)胞－－雜交瘤細(xì)胞一個(gè)優(yōu)勢(shì)－－單克隆抗體特異性強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢(shì)本節(jié)小結(jié)兩個(gè)“篩選”篩選出雜交瘤細(xì)胞

篩選出能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞第24頁(yè),共39頁(yè)，2024年2月25日，星期天5、科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，得到雜交細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細(xì)胞融合的是（）A.經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞C.經(jīng)過免疫的T淋巴細(xì)胞B.不經(jīng)過免疫的T淋巴細(xì)胞D.不經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞6、單克隆抗體是由下列哪種細(xì)胞產(chǎn)生的（）B淋巴細(xì)胞B．T淋巴細(xì)胞C．骨髓瘤細(xì)胞D．雜交瘤細(xì)胞AD第25頁(yè),共39頁(yè)，2024年2月25日，星期天7、用動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)獲取單克隆抗體，下列實(shí)驗(yàn)步驟中錯(cuò)誤的是（）A．將抗原注入小鼠體內(nèi)，獲得能產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞B．用纖維素酶處理B淋巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞C．用聚乙二醇作誘導(dǎo)劑，促使能產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合D．篩選雜交細(xì)胞，并從中選出能產(chǎn)生所需抗體的細(xì)胞群，培養(yǎng)后提取單克隆抗體B第26頁(yè),共39頁(yè)，2024年2月25日，星期天（2013海南卷）31單純皰疹病毒Ⅰ型（HSV-Ⅰ）可引起水皰性口唇炎。利用雜交瘤技術(shù)制備出抗HSV-Ⅰ的單克隆抗體可快速檢測(cè)HSV-Ⅰ?；卮鹣铝袉栴}：（1）在制備抗HSV-Ⅰ的單克隆抗體的過程中，先給小鼠注射一種純化的HSV-Ⅰ蛋白，一段時(shí)間后，若小鼠血清中抗

的抗體檢測(cè)呈陽(yáng)性，說明小鼠體內(nèi)產(chǎn)生了

反應(yīng)，再?gòu)男∈蟮?/p>

中獲取B淋巴細(xì)胞。將該B淋巴細(xì)胞與小鼠的

細(xì)胞融合，再經(jīng)過篩選、檢測(cè)，最終可獲得所需的雜交瘤細(xì)胞，該細(xì)胞具有的特點(diǎn)是

。HSV—1蛋白體液免疫脾臟骨髓瘤無限增殖且產(chǎn)生專一抗HSV-蛋白的抗體第27頁(yè),共39頁(yè)，2024年2月25日，星期天（2）若要大量制備抗該蛋白的單克隆抗體，可將該雜交瘤細(xì)胞注射到小鼠的

中使其增殖，再?gòu)?/p>

中提取、純化獲得。（3）通過上述方法得到的單克隆抗體可準(zhǔn)確地識(shí)別這種HSV-Ⅰ蛋白，其原因是該抗體具有

和

等特性。腹腔腹水特異性強(qiáng)靈敏度高第28頁(yè),共39頁(yè)，2024年2月25日，星期天(1)若A細(xì)胞是小鼠骨髓瘤細(xì)胞，則B細(xì)胞是取自小鼠體內(nèi)的

細(xì)胞，從小鼠體內(nèi)提取分離該細(xì)胞之前，應(yīng)給小鼠注射_____類物質(zhì)。若本題得到的單克隆抗體是非典抗體，則提取B細(xì)胞前可以給小鼠注射

。效應(yīng)B

抗原

滅活的非典病毒8、第29頁(yè),共39頁(yè)，2024年2月25日，星期天（2）d過程是一個(gè)_____________過程，該過程的進(jìn)行常用_____________或_________的誘導(dǎo)。細(xì)胞融合

滅活的病毒

聚乙二醇第30頁(yè),共39頁(yè)，2024年2月25日，星期天(3)假設(shè)僅考慮某兩個(gè)細(xì)胞的融合，則可形成

種類型的C細(xì)胞，因此需用__________培養(yǎng)基篩選出D細(xì)胞用于培養(yǎng)，D細(xì)胞的名稱是

，其特點(diǎn)是____________________________________選擇性3既能無限增殖又能產(chǎn)生特異性抗體

雜交瘤細(xì)胞第31頁(yè),共39頁(yè)，2024年2月25日，星期天(4)在培養(yǎng)時(shí)通過________分裂方式大量繁殖。D細(xì)胞體外培養(yǎng)需要注意的條件是（要求答5項(xiàng)）__________________________________。有絲無菌、無毒的環(huán)境；充足的營(yíng)養(yǎng)；適宜的溫度和pH；適宜的氣體環(huán)境

第32頁(yè),共39頁(yè)，2024年2月25日，星期天（2013重慶卷）2．題2圖是單克隆抗體制備流程的簡(jiǎn)明示意圖。下列有關(guān)敘述，正確的是

A．①是從已免疫的小鼠脾臟中獲得的效應(yīng)T淋巴細(xì)胞B．②中使用胰蛋白酶有利于雜交瘤細(xì)胞的形成C．③同時(shí)具有脾臟細(xì)胞和鼠骨髓瘤細(xì)胞的特性D．④是經(jīng)篩選培養(yǎng)獲得的能分泌特異性抗體的細(xì)胞群D第33頁(yè),共39頁(yè)，2024年2月25日，星期天（2011年浙江卷）31.(12分)(1)實(shí)驗(yàn)分組：甲組：培養(yǎng)液+Y細(xì)胞+-TdR(標(biāo)記的胸腺嘧啶脫氧核苷)+生理鹽水乙組：培養(yǎng)液+Y細(xì)胞+-TdR+X(生理鹽水配制)每組設(shè)置若干個(gè)重復(fù)樣品。（2）分別測(cè)定兩組的CRD（細(xì)胞內(nèi)的放射性強(qiáng)度），求每組的平均值。（3）將各樣品在適宜條件下培養(yǎng)合適時(shí)間后，測(cè)定其CRD，求每組平均值并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。（與說明，答題時(shí)用X、CRD、3H-TdR表示相關(guān)名詞；Y細(xì)胞是能增殖的高等動(dòng)物體細(xì)胞）請(qǐng)回答：第34頁(yè),共39頁(yè)，2024年2月25日，星期天（1）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模杭捉M：培養(yǎng)液+Y細(xì)胞+-TdR(標(biāo)記的胸腺嘧啶脫氧核苷)+生理鹽水乙組：培養(yǎng)液+Y細(xì)胞+-TdR+X(生理鹽水配制)每組設(shè)置若干個(gè)重復(fù)樣品。（2）分別測(cè)定兩組的CRD（細(xì)胞內(nèi)的放射性強(qiáng)度），求每組的平均值。（3）將各樣品在適宜條件下培養(yǎng)合適時(shí)間后，測(cè)定其CRD，求每組平均值并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析能增殖的高等動(dòng)物體細(xì)胞探究X對(duì)Y細(xì)胞增殖（DNA合成）的影響第35頁(yè),共39頁(yè)，2024年2月25日，星期天（2）預(yù)測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果及結(jié)論：__________。甲組：培養(yǎng)液+Y細(xì)胞+-TdR(標(biāo)記的胸腺嘧啶脫氧核苷)+生理鹽水乙組：培養(yǎng)液+Y細(xì)胞+-TdR+X(生理鹽水配制)每組設(shè)置若干個(gè)重復(fù)樣品。（2）分別測(cè)定兩組的CRD（細(xì)胞