胡蘿卜組培實(shí)驗(yàn)

植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)

【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹渴煜ぶ参锝M織培養(yǎng)流程了解培養(yǎng)基的配制方法掌握無(wú)菌操作技術(shù)【實(shí)驗(yàn)原理】植物組織培養(yǎng)是指植物的任何器官、組織或細(xì)胞，在人工預(yù)知的控制條件下，放在含有營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)等組成的培養(yǎng)基中，使其生長(zhǎng)、分化并形成完整植株的過(guò)程。其理論依據(jù)是植物細(xì)胞具有全能性?！緦?shí)驗(yàn)材料及儀器】實(shí)驗(yàn)材料：胡蘿卜實(shí)驗(yàn)器材：高壓滅菌鍋，超凈工作臺(tái)，電子天平，酒精燈，三角瓶，鑷子，剪刀，手術(shù)刀，燒杯實(shí)驗(yàn)藥品：配制MS培養(yǎng)基的各種試劑，蔗糖，瓊脂，0.1%升汞〔本實(shí)驗(yàn)采用次氯酸鈉〕，2,4-D，6-BA，NaOH，HCl等【實(shí)驗(yàn)步驟】1.MS培養(yǎng)基母液的配制按照表1配制MS培養(yǎng)基母液表1.MS根本培養(yǎng)基的配制成分母液MS培養(yǎng)基大量元素NH4NO3KNO3CaCl2·H2OKH2PO4MgSO4·7H2O

mg/L(100×)165000190000440001700037000mg/L16501900440170370微量元素mg/L(100×)mg/LMnSO4·4H2OZnSO4·4H2OH3BO3KINa2MoO4·2H2OCuSO4·5H2OCoCl2·6H2O

223086062083252.52.522.38.66.20.830.250.0250.025鐵鹽Na2EDTAFeSO4·7H2O

mg/L(100×)37252785mg/L37.2527.85有機(jī)物質(zhì)甘氨酸硫胺素?zé)熕猁}酸吡哆醇肌醇

mg/L(100×)20040505010000mg/L2.00.40.50.5100MS培養(yǎng)基的配制取1000ml燒杯，分別取各種成分的母液100ml，參加燒杯，稱取蔗糖30g，瓊脂6.5g，按照需要的濃度分別參加各種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑〔2,4-D濃度1mg/L+6-BA濃度0.5mg/L〕，加水至800ml。加熱使瓊脂溶解，定容至1000ml，用10％NaOH調(diào)節(jié)pH至5.6~5.8。培養(yǎng)基及材料滅菌將配好的培養(yǎng)基迅速分裝至50ml三角瓶中，用棉花塞好，用牛皮紙或報(bào)紙包扎〔本實(shí)驗(yàn)采用封口膜封口〕。放入高壓滅菌鍋中，121℃、滅菌20min。培養(yǎng)基及材料滅菌無(wú)菌水：用500mL三角瓶，參加約300mL蒸餾水，封口膜封口，121℃、滅菌20min。無(wú)菌濾紙、無(wú)菌瓷磚：將實(shí)驗(yàn)所需濾紙、瓷磚等用包裝包好，121℃、滅菌20min。剪刀、鑷子、解剖刀滅菌：可直接在酒精燈上燃燒進(jìn)展滅菌。正式接種前30min，打開(kāi)超凈工作臺(tái)上的紫外燈和風(fēng)機(jī)，30min后接種；上超凈臺(tái)的第一件事是關(guān)閉紫外燈并打開(kāi)照明燈；把解剖刀、鑷子、解剖針等器械浸泡在75％酒精中；點(diǎn)燃酒精燈；用75％的酒精棉球擦拭雙手；外植體的消毒：將胡蘿卜用自來(lái)水充分洗凈削去外皮切成10cm段,置于超凈工作臺(tái)上用75%酒精浸洗30s,無(wú)菌水沖洗2～3次,再用2.5%次氯酸鈉溶液處理30min,無(wú)菌水沖洗3～5次。超凈臺(tái)上操作〔１〕用酒精棉球擦手，然后點(diǎn)燃廢酒精棉球擦拭超凈臺(tái)工作臺(tái)面。取出一張無(wú)菌濾紙，放在面前。將無(wú)菌瓷磚翻開(kāi)包裝，置于無(wú)菌濾紙旁邊?！玻病秤镁凭珶艋鹧鏌频侗?、刀片、鑷子等，置于瓷磚上冷卻后置于無(wú)菌濾紙上。〔３〕用無(wú)菌的鑷子夾取一條無(wú)菌的胡蘿卜，用無(wú)菌解剖刀把胡蘿卜形成層局部切成1cm3小塊。〔4〕取一瓶培養(yǎng)基，除去橡皮筋，揭開(kāi)封口膜，把培養(yǎng)基放在緊靠酒精燈火焰無(wú)菌區(qū)的前方?！?〕用無(wú)菌鑷子夾取胡蘿卜小塊，接種于MS培養(yǎng)基上，每瓶接種6塊外植體。注意無(wú)菌操作。〔６〕蓋好封口膜，纏好皮筋，用記號(hào)筆在培養(yǎng)瓶封口膜上寫好班級(jí)姓名。放入培養(yǎng)箱，25℃暗培養(yǎng)7-10天后觀察記錄?！颈揪眄氈?、實(shí)驗(yàn)所使用的器材要嚴(yán)格滅菌，注意無(wú)菌操作，防止因染菌導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗；2、配制貯存母液時(shí)，要計(jì)算好各種成分?jǐn)U大倍數(shù)后逐次參加，在第一種成分完全溶解后再參加第二種成分，切忌“一鍋煮〞。有機(jī)成分配好后要裝入棕色瓶中在冰箱內(nèi)保存，其它三種母液可在常溫下保存，但最多不能超過(guò)一個(gè)月；3、pH值對(duì)培養(yǎng)基的硬度有影響，pH過(guò)高培養(yǎng)基變硬，pH過(guò)低培養(yǎng)基不能凝固，所以要調(diào)整好培養(yǎng)基的pH值；4、材