低聚木糖對(duì)斷奶仔豬日糧中大腸桿菌的增殖效果

低聚木糖對(duì)斷奶仔豬日糧中大腸桿菌的增殖效果

食品中使用抗生素的使用給人們帶來(lái)了極大的好處，但濫用也給人們帶來(lái)了更大的問(wèn)題：抗生素濫用使細(xì)菌產(chǎn)生抗藥性，長(zhǎng)期使用抗生素會(huì)降低動(dòng)物體內(nèi)的吸引力，對(duì)疫苗的接種也會(huì)產(chǎn)生副作用。長(zhǎng)期使用抗生素會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物內(nèi)源性感染，并會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物和環(huán)境的殘余。隨著微生態(tài)學(xué)理論的發(fā)展,人們發(fā)現(xiàn)腸道有益菌群如雙歧桿菌、乳酸桿菌等與宿主在免疫、營(yíng)養(yǎng)、急性和慢性感染等方面都有密切聯(lián)系。許多研究結(jié)果表明,低聚木糖具有促進(jìn)雙歧桿菌等動(dòng)物體內(nèi)有益菌增殖、抑制有害菌及減少腸內(nèi)腐敗物質(zhì)等多種生理性功能,從而從多方面改善宿主動(dòng)物健康。因此,低聚木糖成為動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)研究的新熱點(diǎn)。本試驗(yàn)研究的目的,主要是考察不同低聚木糖添加水平對(duì)斷奶仔豬生產(chǎn)性能、腸道菌群、免疫水平的影響,找出低聚木糖的最適添加量,為低聚木糖在日糧中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。1材料和方法1.1試驗(yàn)藥物試驗(yàn)材料為35%低聚木糖和2‰金霉素預(yù)混劑。1.2不同日糧+2金霉素預(yù)混劑混施的注意事項(xiàng)試驗(yàn)選用72頭28±2日齡杜×長(zhǎng)×大仔豬按照單因素4處理3重復(fù)隨機(jī)設(shè)計(jì),各組基礎(chǔ)日糧相同。試驗(yàn)從28日齡斷奶時(shí)開(kāi)始,為期42d。具體分組情況:①A組基礎(chǔ)日糧+2‰金霉素預(yù)混劑2kg/t;②B組基礎(chǔ)日糧+35%低聚木糖125g/t;③C組基礎(chǔ)日糧+35%低聚木糖250g/t;④D組基礎(chǔ)日糧+35%低聚木糖375g/t。每個(gè)處理3個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)6頭仔豬(3♂、3♀),A為對(duì)照組,B、C和D為試驗(yàn)組。1.3飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)及飼料配方試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧的配制參照中國(guó)瘦肉型豬飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)(GB8471～87),結(jié)合豬場(chǎng)實(shí)際情況設(shè)計(jì)而成,試驗(yàn)日糧為粉料,飼料原料配比及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。1.4茶陵監(jiān)獄試驗(yàn)于2005年3月10日～4月22日在湖南省株洲市茶陵縣省茶陵監(jiān)獄的金山豬場(chǎng)進(jìn)行。試驗(yàn)在同一保育舍內(nèi),用自動(dòng)食槽,每日加料一次,準(zhǔn)確記錄投料量,每天清洗豬欄2次,每周消毒1次,觀察試驗(yàn)豬只生長(zhǎng)、采食情況,記錄腹瀉頭數(shù)和死亡頭數(shù),常規(guī)防疫。1.5指標(biāo)和方法的測(cè)量1.5.1生產(chǎn)力性能試驗(yàn)開(kāi)始和試驗(yàn)結(jié)束早飼前個(gè)體空腹稱重,以計(jì)算日增重,以欄為單位測(cè)定采食量,根據(jù)采食量及增重計(jì)算料重比。1.5.2腹瀉頻率試驗(yàn)開(kāi)始后,每日觀察仔豬排糞情況,記錄腹瀉個(gè)體和持續(xù)時(shí)間,最后以每重復(fù)仔豬發(fā)生腹瀉的頭日數(shù)除以總的飼養(yǎng)頭日數(shù)計(jì)算出腹瀉頻率。1.5.3腸球菌組1.5.3.剖腹和藥物消毒試驗(yàn)最后1d,每重復(fù)隨機(jī)挑取一頭健康仔豬進(jìn)行屠宰,立即剖腹并結(jié)扎所取腸段的兩頭(分別為結(jié)腸、盲腸和直腸),用酒精棉球消毒各結(jié)扎口后,放入已滅菌塑料袋中,運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室備用。1.5.3.稀釋液的加入樣品運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室后,立即在超凈工作臺(tái)上稱取1.0g左右腸內(nèi)容物于無(wú)菌試管中,加入先配好并已滅菌的稀釋液9ml,加入玻璃珠振蕩30min,此為10-1;靜置一段時(shí)間,吸取上清液1ml于盛有9ml稀釋液的試管中進(jìn)行10-2稀釋,振搖3～4min,并依次進(jìn)行10-3～10-7倍稀釋。1.5.3.細(xì)菌分離選擇性培養(yǎng)基①大腸桿菌:用微量取液器分別取結(jié)腸、盲腸和直腸內(nèi)容物10-4～10-6稀釋液0.1ml涂布接種于麥康凱NO.3培養(yǎng)基平皿上(各稀釋度設(shè)3個(gè)重復(fù),并編號(hào)),置37℃培養(yǎng)箱中有氧培養(yǎng)24h后,選取粉紅色或紅色,表面光滑、凸起,邊緣整齊不透明,質(zhì)地軟、粘,直徑1.0～3.0mm的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù),并進(jìn)一步作理化鑒定。②乳酸桿菌:用微量取液器分別取結(jié)腸、盲腸和直腸內(nèi)容物10-5～10-7稀釋液0.1ml涂布接種于Rogosa瓊脂培養(yǎng)基平皿上(各稀釋度設(shè)3個(gè)重復(fù),并編號(hào)),置37℃培養(yǎng)箱中有氧培養(yǎng)48h后,選取乳白色,稍偏黃,表面光滑、凸起,邊緣整齊不透明,質(zhì)地軟,直徑0.6～2.7mm的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù),并進(jìn)一步作理化鑒定。③雙歧桿菌:用微量取液器分別取結(jié)腸、盲腸和直腸內(nèi)容物10-5～10-7稀釋液0.1ml涂布接種于雙歧桿菌分離選擇性培養(yǎng)基(羅澤民,1995)平皿上(各稀釋度設(shè)3個(gè)重復(fù),并編號(hào)),置37℃培養(yǎng)箱中厭氧培養(yǎng)48h后,選取乳白色,表面光滑、凸起,邊緣整齊不透明,質(zhì)地軟,直徑0.7～2.5mm的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù),并進(jìn)一步作理化鑒定。④沙門氏菌:挑取各腸段的10-1稀釋液各一環(huán)于裝有氯化鎂孔雀綠增菌培養(yǎng)基的試管中進(jìn)行增菌,37℃培養(yǎng)18h以后,用微量取液器取0.1ml涂布接種于SS瓊脂培養(yǎng)基上,37℃培養(yǎng)24h后進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。1.6血清igg、iga、igm試驗(yàn)結(jié)束時(shí),每重復(fù)隨機(jī)挑取1頭仔豬,前腔靜脈采血,用免疫比濁儀測(cè)定血清中IgG、IgA和IgM的含量。1.7豬僚抗體檢測(cè)在仔豬斷奶后的第21d皮下注射豬瘟弱毒活苗,并于注射前和注射后第14d前腔靜脈采血,取血清,采用正向間接血凝試驗(yàn)測(cè)定豬瘟抗體效價(jià)。1.8統(tǒng)計(jì)分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析和鄧肯氏多重比較,記錄平均值和標(biāo)準(zhǔn)差,并檢查各處理間的差異是否達(dá)到顯著水平。2結(jié)果與分析2.1adg、b、d組對(duì)大鼠日食性性狀的影響通過(guò)42d的飼養(yǎng)試驗(yàn),測(cè)定了低聚木糖對(duì)斷奶仔豬ADG、ADFI、F/G以及腹瀉頻率的影響,結(jié)果見(jiàn)表2、3。由表2可見(jiàn),增重與料重比以C組較好,平均日增重與對(duì)照組比較差異極顯著(P<0.01),與B組、D組比較差異顯著(P<0.05)。C組比A、B、D組ADG分別提高17.27%、10.44%、8.96%;同時(shí)B組提高斷奶仔豬日增重8.2%,D組提高斷奶仔豬日增重10%。在料重比上,C組與其他3組差異顯著(P<0.05),A、B、D之間差異不顯著。在日采食量性狀上,D組與其他3組差異顯著(P<0.05),A、B、C之間差異不顯著。由表3可見(jiàn),B、C組能顯著降低豬腹瀉發(fā)病率(P<0.05),B組降低斷奶仔豬腹瀉發(fā)病率60.7%(絕對(duì)值),降低腹瀉頻率77.88%。C組降低斷奶仔豬腹瀉發(fā)病率80.3%(絕對(duì)值),降低腹瀉頻率90.3%。D組雖然降低斷奶仔豬腹瀉發(fā)病率5%(絕對(duì)值),降低腹瀉頻率13.3%,但與對(duì)照組相比差異不顯著。由此可以看出,35%低聚木糖375g/t的添加量可能過(guò)量,從而導(dǎo)致腹瀉。2.2低聚糖對(duì)斷奶仔豬腸道菌群的影響低聚木糖對(duì)斷奶仔豬腸道菌群的影響結(jié)果見(jiàn)表4。2.2.1不同低聚木糖對(duì)腸道大腸桿菌增殖的影響健康仔豬小腸中大腸桿菌一般為105.9個(gè),大腸中為107.1個(gè)。從表4可見(jiàn),不同低聚木糖添加量都能有效抑制腸道大腸桿菌的增殖(P<0.05),其中C組的盲腸、D組的結(jié)腸和盲腸與對(duì)照組比較能極顯著抑制腸道大腸桿菌的增殖(P<0.01)。2.2.2數(shù)值檢測(cè)算法據(jù)報(bào)道豬的結(jié)腸、盲腸、直腸內(nèi)定居的正常微生物群占優(yōu)勢(shì)的菌群中,雙歧桿菌就是其一,每克腸內(nèi)容物所含不同菌群的菌數(shù)對(duì)數(shù)值均達(dá)到8.0～8.5。從表4可見(jiàn),B組的低聚木糖添加量能促進(jìn)盲腸中雙歧桿菌的增殖(P<0.05),但對(duì)結(jié)腸和直腸中的雙歧桿菌的增殖效果不明顯。C組的低聚木糖添加量能促進(jìn)結(jié)腸、盲腸和直腸中雙歧桿菌的增殖(P<0.05)。D組的低聚木糖添加量能促進(jìn)結(jié)腸和直腸中雙歧桿菌的增殖(P<0.05),但對(duì)盲腸中的雙歧桿菌的增殖效果不明顯。2.2.3每克內(nèi)容物的用量在健康動(dòng)物消化道占優(yōu)勢(shì)的乳酸桿菌其定植位置和數(shù)量是相對(duì)穩(wěn)定的。在定植部位上,豬以盲腸和直腸定植量多,直腸為每克內(nèi)容物含108個(gè)。但也受種屬、年齡、飼料、疾病、藥物等而發(fā)生演替。從表4可見(jiàn),低聚木糖的添加僅能使B組的結(jié)腸和C組、D組的盲腸中乳酸桿菌的濃度得到提高(P<0.05),其他部位的乳酸桿菌增殖效果與對(duì)照組無(wú)明顯差異(P>0.05)。不同低聚木糖添加量對(duì)直腸中乳酸桿菌的增殖效果與對(duì)照組相比差異不顯著(P>0.05)。2.2.4低聚糖對(duì)沙門氏菌的影響本次試驗(yàn)中無(wú)論是對(duì)照組還是試驗(yàn)組,所取腸段內(nèi)容物中均未檢出有沙門氏菌。2.3低聚木糖對(duì)豬檔案抗體效價(jià)的影響本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),二免后第15d對(duì)照組豬瘟抗體效價(jià)沒(méi)有變化,各低聚木糖組的豬瘟抗體效價(jià)普遍有所上升,這說(shuō)明低聚木糖有提高豬瘟抗體水平的趨勢(shì),但差異不顯著(表5)。2.4不同低聚木糖對(duì)斷仔血清igg濃度的影響低聚木糖對(duì)斷奶仔豬血清中免疫球蛋白的影響結(jié)果見(jiàn)表6。經(jīng)顯著性檢驗(yàn),不同低聚木糖添加量能顯著(P<0.05)提高斷奶仔豬血清中IgG濃度,其中C、D組差異極顯著(P<0.01)。對(duì)血清IgA和IgM也有提高的趨勢(shì),但統(tǒng)計(jì)上差異不顯著(P>0.05)。2.4.1低聚糖對(duì)血清igg的影響從表6可見(jiàn),不同低聚木糖添加量能顯著提高斷奶仔豬血清IgG水平(P<0.05),其中以D組效果最好。2.4.2低聚糖對(duì)血清iga的影響與對(duì)照組相比,B、C、D組的IgA都有所提高,以D組對(duì)其影響最大,但差異不顯著(P>0.05)。2.4.3各組測(cè)定指標(biāo)比較由表6可見(jiàn),以B組效果最好,B、C、D組均比對(duì)照組高,各組差異不顯著(P>0.05)。從以上分析可看出,低聚木糖能提高斷奶仔豬血清IgG水平,對(duì)仔豬的體液免疫有一定影響。3討論3.1低聚木糖對(duì)瞳氣動(dòng)物的影響國(guó)外的研究結(jié)果表明,仔豬的生產(chǎn)性能較高時(shí),其日糧中添加低聚木糖對(duì)生產(chǎn)性能未見(jiàn)有影響;相反,仔豬的生產(chǎn)性能較差,處于惡劣環(huán)境或患病時(shí),其日糧中添加低聚木糖可進(jìn)一步改善仔豬生產(chǎn)性能。也就是說(shuō),低生產(chǎn)性能仔豬飼喂低聚木糖更有利于其生產(chǎn)性能的改善。艾武(2002)指出這種反應(yīng)模式與抗生素的相似,但反應(yīng)程度低于抗生素。本次試驗(yàn)是在管理嚴(yán)格的飼養(yǎng)場(chǎng)進(jìn)行,選用28日齡斷奶仔豬作為試驗(yàn)對(duì)象,這是與當(dāng)?shù)氐娘曫B(yǎng)方式相一致的。與對(duì)照組相比,添加低聚木糖對(duì)仔豬ADFI、F/G、ADG和腹瀉頻率都有所改善。其中對(duì)ADG和腹瀉頻率的影響大于對(duì)ADFI、F/G的影響。這種反應(yīng)機(jī)制與抗生素的相一致。3.2腹瀉頻率的變化試驗(yàn)結(jié)果表明,不同水平低聚木糖添加量對(duì)斷奶仔豬生產(chǎn)性能都有不同程度的改善。C組增重比對(duì)照組提高17.27%,比B、D組ADG分別提高10.44%、8.96%,這與Bolduan的結(jié)果是一致的;且C組的腹瀉頻率最低,這與設(shè)計(jì)該組的目的和斷奶仔豬大腸桿菌的排泄情況相符合。本試驗(yàn)中,D組的ADG、ADFI和F/G分別比對(duì)照組提高9.01%、5.29%和-4.12%,趨勢(shì)與前人結(jié)果相一致,但與對(duì)照組相比,差異不明顯,且會(huì)提高成本,同時(shí)腹瀉指數(shù)增加。在本試驗(yàn)條件下,除腹瀉頻率外,ADG、ADFI、F/G都以250g/t的低聚木糖效果最好,與其他學(xué)者的結(jié)果有差別,這可能與仔豬的斷奶日齡、飼喂的基礎(chǔ)日糧和飼養(yǎng)管理不同等方面的原因有關(guān)。3.3低聚木糖與金霉素的效果試驗(yàn)研究對(duì)比了低聚木糖與金霉素分別對(duì)仔豬生產(chǎn)性能的影響。與金霉素組相比,ADG、ADFI、F/G和腹瀉率分別提高了9%、-7.2%、-11%和-53%,其中以B、C組最好,表明了低聚木糖比金霉素效果要好,這可能由于金霉素主要對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌有效,而大腸桿菌為革蘭氏陰性菌有關(guān)。3.4低聚木糖的抑菌作用試驗(yàn)結(jié)果表明,添加低聚木糖能顯著降低仔豬各腸段的大腸桿菌濃度,表明了大腸桿菌與仔豬腹瀉存在一定的相關(guān)性。而且在同樣條件下培養(yǎng)大腸桿菌時(shí),對(duì)照組的培養(yǎng)基上還生長(zhǎng)了其他一些有害菌,試驗(yàn)組則沒(méi)有出現(xiàn)這種情況,這是否能進(jìn)一步說(shuō)明低聚木糖的抑菌作用還有待研究。本試驗(yàn)中低聚木糖對(duì)乳酸