ELISA檢測乙肝抗體

ELISA檢測乙肝抗體組員：李家成〔1520210102〕林其聰〔1520210103〕付強(qiáng)〔1520210104〕鄭海軍〔1520210105〕管汝〔1420211143〕分工匯報(bào)：林其聰PPT制作：李家成，付強(qiáng)ELISA檢測乙肝抗體肝外表抗體ELISA檢測實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.掌握ELISA的原理和操作方法。2.熟悉酶標(biāo)儀的使用方法。免疫標(biāo)記技術(shù)免疫標(biāo)記技術(shù)是用熒光、酶、或者放射性核素等標(biāo)記抗體或抗原，利用標(biāo)記技術(shù)的高度敏感性進(jìn)行的抗原抗體的反響。

細(xì)胞1細(xì)胞2標(biāo)記物分類熒光素放射免疫技術(shù)放射性核素免疫熒光技術(shù)酶免疫酶技術(shù)免疫酶技術(shù)用酶標(biāo)記的抗原或抗體進(jìn)行的抗原抗體反響?？捎妹笜?biāo)測定儀測定光密度(OD〕來反響抗原或抗體含量，靈敏度可到達(dá)ng—pg/ml。細(xì)胞1標(biāo)記物DH２+H２O２D+2H2O

酶具有高效催化性：可加快化學(xué)反響的速率；在反響前后沒有質(zhì)和量的改變；微量的酶便可發(fā)揮巨大的催化作用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)-ELISAELISA是一種免疫測定〔immunoassay，IA〕。抗原或者抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記：參加酶反響的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物；產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，由此進(jìn)行定性或定量分析。酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)—ELISA實(shí)驗(yàn)原理抗原或抗體吸附到固體相載體外表后，以及抗原抗體與酶連接后，仍保持免疫活性和酶活性，當(dāng)酶遇到相應(yīng)第底物時(shí)，在酶的催化下引起底物水解顯色。產(chǎn)物的量與標(biāo)體中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反響的深淺進(jìn)行定性或定量分析。

ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。在這種測定方法有三個(gè)必要的試劑：〔1〕免疫吸附劑〔2〕結(jié)合物〔3〕酶反響的底物ELISA的類型間接法〔測抗體〕雙抗體夾心發(fā)〔測大分子抗原〕競爭發(fā)〔測小分子抗原〕競爭法用于抗原和半抗原的定量測定，也可用于測定抗體。以測定抗原為例，將特異性抗體吸附于固相載體外表，經(jīng)洗滌后分成兩組：一組加酶標(biāo)記抗原和待測抗原的混合液，而另一組加酶標(biāo)記抗原，再經(jīng)孵育洗滌后加底物顯色，這兩組底物降解量之差即為所要測定的未知抗原的量。這種方法所測定的抗原只有一個(gè)結(jié)合部位就可，因此，對小分子抗原如激素和藥物之類的測定常用此法。該法的優(yōu)點(diǎn)就是快，因此只有一個(gè)保溫洗滌過程，但常需用較多的酶標(biāo)記抗原。操作步驟1.從冰箱取出試劑盒，室溫平衡30分鐘。2.按如下方式加待測血清，每孔1滴。3.每孔加酶結(jié)合物1滴〔孔上方懸空滴加，無氣泡〕，混勻，空白孔不加，置37度溫箱30分鐘。4.取出反響板，棄液，拍干。5.每孔注滿洗條液，〔不要溢出〕靜置5秒后棄液，拍干，重復(fù)洗條5次，拍干