中國藥品檢驗(yàn)標(biāo)操作規(guī)程紫外-可見分光光度法

紫外—可見分光光度法簡述紫外一可見分光光度法是通過被瀏物質(zhì)在紫外光區(qū)或可見光區(qū)的特定波特長驗(yàn)中主要用于藥品的鑒別、檢查和含量測定。定量分析通常選擇物質(zhì)的最大吸取波特長測出吸光度，然后用比照品或吸取查。物質(zhì)對紫外輻射的吸取是由于分子中原子的外層電子躍遷所產(chǎn)生，因此，紫(200～400nm)或可見光區(qū)(400～850nm)產(chǎn)生吸取。通常使用的紫外一可見分光光度計(jì)的工作波長范圍為190—900nm．紫外吸取光譜為物質(zhì)對紫外區(qū)輻射的能量吸取圖．朗伯一比爾(Lambert-Beer)定律為光的吸取定律，它是紫外分光光度法定量分析的依據(jù)，其數(shù)學(xué)表達(dá)式為：式中：—A—T—E為吸取系數(shù)；—c為溶液濃度，—l為光路長度。光路長度(l)lcm．相應(yīng)的吸光度即為吸取系數(shù)，以(mol/L)，lcmε儀器示系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等局部組成。碘鎢燈，前者用于紫外區(qū)，后者用于可見光區(qū)。單色器通常由進(jìn)光狹縫、出光狹縫、平行光裝置、色散元件，聚焦透鏡或反200---400nm波長光的色散力氣很強(qiáng)，對600nm以上波長的光色散力氣較差，棱鏡光柵為色散元件。檢測器有光電管和光電倍增管兩種。紫外一可見分光光度計(jì)依據(jù)其構(gòu)造和測量操作方式的不同可分為單光束和雙(S)和參比(R)兩光束，并先后到達(dá)檢測器，檢測器信號經(jīng)調(diào)制測量方式．紫外一可見分光光度計(jì)的檢定波長準(zhǔn)確度波長準(zhǔn)確度的允差范圍 分光光度計(jì)波長準(zhǔn)確度允許誤差，紫外區(qū)為Inm,500nm2nm。波長準(zhǔn)確度檢定方法用低壓汞燈檢定 關(guān)閉儀器光源，將汞燈〔用筆式汞燈最便利〕直光狹縫，如為雙光束儀器，用單光束能量測定方式，承受波長掃描方式，掃描速度“慢”(如15nm/min)、響應(yīng)“快”、最小狹縫寬度(如0.1mm)、量程0—在200—800nm范圍內(nèi)單方向重復(fù)掃描3次，由儀器識別記錄各峰值〔假設(shè)儀器無“峰檢測”功能，必要時(shí)可對指定波進(jìn)步行“單峰”掃描〕。XO.1或選擇開關(guān)放在×1，10〕，關(guān)小狹縫，翻開光閘門，緩緩轉(zhuǎn)動546.07nm峰消滅的位置，假設(shè)與波長讀數(shù)不符，應(yīng)調(diào)整儀器左側(cè)準(zhǔn)直鏡的波長調(diào)整螺錄每條譜線與儀器波長讀數(shù)的誤差。用于檢定紫外一可見分光光度計(jì)的汞燈譜線波長：237.83、253.65、275.28、296.73、302.15、313.16、334.15、365.02、365.48、366.33、404.、546.07〔綠色〕、576.96〔黃色〕579.07nm。用儀器固有的氘燈檢定本法主要用于日常工作中波長準(zhǔn)確度的486.02nm3用氧化鈥玻璃檢定 璃放入樣品光路．參比光路為空氣，按測定吸取光譜圖方法測定．校正自動記錄儀器時(shí)，應(yīng)考慮記錄儀的時(shí)間常數(shù)，測定樣品與校正時(shí)取同一掃描速度。氧化鈥玻璃在279.4、287.5、333.7、360.9、418.7、460.0、484.5、536.2637.5nm此需定期由計(jì)量部門校驗(yàn)。用高氯酸鈥溶液檢定 有單光束測定功能的雙光束紫外分光光度計(jì)波長準(zhǔn)確度檢定用。高氯酸鈥溶液的配制方法：取10%高氯酸為溶劑，參與氧化鈥(Ho2O3)配成4%溶液即得。 高氯酸欽溶液較強(qiáng)的吸取峰波長為241. 13、278.10、287.18、333.44、345.47、361.31、416.28、451.30、485.29、536.64、640.52nm.假設(shè)是雙光束掃描儀器，但不是數(shù)據(jù)貯存型的〔指是直接將信號描記于記錄記錄的波長可能因記錄筆滯后而非真實(shí)波長，為了準(zhǔn)確測定，建議承受定點(diǎn)檢定而不用掃描方式。吸光度準(zhǔn)確度 周密稱取在120℃枯燥至恒重的基準(zhǔn)重鉻酸鉀約置100ml量瓶中，用0.005mol/L硫酸液溶解并稀釋至lOOOml，用配對的。硫酸液為空白，在235、257、313、350nm分別測定吸光度，然后換算成圍。表1 分光光度法允差范圍〔nm〕吸取強(qiáng)度吸取系數(shù)〔〕允許誤差235最小124.5123.0～126.0257最大144.0142.8～146.2313最小48.647.0～50.3350最大106.6105.5～108.5區(qū)分率、基線平直度、穩(wěn)定度、絕緣電阻等項(xiàng)檢定，按現(xiàn)行國家技術(shù)監(jiān)視局用中，對以上兩項(xiàng)，即波長和吸光度準(zhǔn)確度應(yīng)依據(jù)需要隨時(shí)檢查。1cm22試劑試劑濃度〔%，g/ml〕測定波速〔nm〕透光率〔%〕碘化鈉1.00220＜0.8亞硝酸鈉5.00340＜0.8樣品測定操作方法〔性狀項(xiàng)下〕按各品種項(xiàng)下規(guī)定的方法配制供試品溶液，在規(guī)定的波特長〔參見5.8項(xiàng)〕測定其吸光度，并計(jì)算吸取系數(shù)，應(yīng)符合規(guī)定范圍。鑒別及檢查按各品種項(xiàng)下的規(guī)定，測定供試品溶液的最大及最小吸取波定。含量測定比照晶比較法按各晶種項(xiàng)下規(guī)定的方法，分別配制供試品溶液和比照品溶液，比照品溶液中所含被測成分的量應(yīng)為供試品溶液中被測成分標(biāo)示量的以內(nèi)，用同一溶劑，在規(guī)定的波特長測定供試品溶液和比照品溶液的吸光度。吸取系數(shù)法 下配制供試品溶液，在規(guī)定的波長及該波長±2nm處測定其吸光度，按各該品種在規(guī)定條件下給出的吸取系數(shù)計(jì)算含量。100，并留意儀器的校正和檢定，如測定品種的吸取系數(shù)，需按后列“吸取系數(shù)測定法”的規(guī)定進(jìn)展。計(jì)算分光光度法按《中國藥典》規(guī)定，計(jì)算分光光度法一般不宜A〔見《中國藥典》附錄〕，則應(yīng)在測定前對儀器作認(rèn)真的校正和檢定。比色法供試品本身在紫外一可見光區(qū)沒有強(qiáng)吸取，或在紫外光區(qū)理。當(dāng)吸光度和濃度關(guān)系不呈良好線性時(shí)，應(yīng)取數(shù)份梯度量比照品溶液，用溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線，再依據(jù)供試品的吸光度在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得其相應(yīng)的濃度，并求出其含量。留意事項(xiàng)試驗(yàn)中所用的量瓶和移液管均應(yīng)經(jīng)檢定校正、洗凈后使用。使用的石英吸取池必需干凈。當(dāng)吸取池中裝入同一溶劑，在規(guī)定波長0.3%以下者可配對使用，否則必需加以校正。取吸取池時(shí)，手指拿毛玻璃面的兩側(cè)。裝樣品溶液的體積以池體積的4/5用硫酸發(fā)煙硝酸(3：1V／1V)混合液稍加浸泡后，洗凈備用。如用鉻酸鉀清潔液清池的光學(xué)外表，并應(yīng)充分用水沖洗，以防鉻酸鉀吸附于吸取池外表。含有雜原子的有機(jī)溶劑，通常均具有很強(qiáng)的末端吸取。因此，當(dāng)作溶205nm。另外，當(dāng)溶劑不純時(shí)，也可能增加干擾吸取。因此，在檢查所用的溶劑在供試品所用的波長四周是否符合要求，馬上溶劑置1cm石英吸取池中，以空〔即空白光路中不置任何物質(zhì)〕測定其吸光度，溶劑和吸取池的吸光度應(yīng)3表3以空氣為空白測定溶劑在不同波特長的吸光度的規(guī)定〔nm〕220～240241～250251～300300吸光度≤0.40≤0.20≤0.10≤0.05每次測定時(shí)應(yīng)承受同一廠牌批號，混合均勻的同批溶劑。稱量應(yīng)按藥典規(guī)定要求。配制測定溶液時(shí)稀釋轉(zhuǎn)移次數(shù)應(yīng)盡可能少，5ml22作，每份結(jié)果對平均值的偏差應(yīng)在±0.5%1供試品溶液的濃度，除各品種項(xiàng)下已有注．明者外，供試品溶液的吸光度以在0.3～0.7之間為宜，吸光度讀數(shù)在此范圍誤差較小，并應(yīng)結(jié)合所用儀器吸光度線性范圍，配制適宜的讀數(shù)濃度。10%，否則測于《中國藥典》紫外分光光度法測定的大局部品種，可以使用2nm縫寬，但當(dāng)吸取20nmInm264nm測定時(shí)除另有規(guī)定者外，應(yīng)在規(guī)定的吸取峰±2nm處，再測幾點(diǎn)的吸光度，以核對供試品的吸取峰位置是否正確，并以吸光度最大的波長作為測定波±2nm考慮試樣的同一性、純度以及儀器波長的準(zhǔn)確度。用于制劑含量測定時(shí)，應(yīng)留意供試液與比照液的pH值是否全都，如pHpH結(jié)果計(jì)算的濃度以正比法算出供試品溶液的濃度，再計(jì)算含量。式中：—A—c〔mg／ml〕。吸取系數(shù)法《中國藥典》規(guī)定的吸取系數(shù)，系指1%(g／ml)時(shí)的吸光度值，E}盞值，再與規(guī)定的值比較，可計(jì)算出供試樣品的含量。式中:—A—c100ml(g／ml)；—l(cm)。式中：—為依據(jù)前式計(jì)算出的供試品吸取系數(shù)；—為藥典或藥品標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的吸取系數(shù)。吸取系數(shù)測定法本法主要用于品種的吸取系數(shù)測定。測定方法 取精制樣品周密稱取確定量，使樣品溶液配成吸光度讀數(shù)在0.6～0.8之間，置lcm吸取池中．在規(guī)定波特長按5.8項(xiàng)的規(guī)定測出吸光度讀數(shù)，然后再用同批溶劑將溶液稀釋1倍，使吸光度在0.3～0.4之間，再按上述方儀器測定的2份結(jié)果，對平均值的偏差應(yīng)不否則應(yīng)重測定。測定時(shí)，先按儀器正常靈敏度測試，然后再減小狹4型號的儀器復(fù)測。吸取系數(shù)可依據(jù)朗伯一比爾定律求算，以下例說明。0.0030%的溶液，在波長297nmlcm0.6139，E