實驗二血涂片及染色

實驗二血涂片及染色第一頁，共二十一頁，編輯于2023年，星期二【目的】掌握血涂片的制備和染色?！驹怼堪蜒褐瞥杉?xì)胞分布均勻的薄膜涂片，用瑞氏染液染色。不同的細(xì)胞種類及細(xì)胞的不同成分，對酸性及堿性染料的結(jié)合能力不同，而使各種細(xì)胞呈現(xiàn)出各自的染色特點。【器材】載玻片、推片、洗耳球、顯微鏡、香柏油、拭鏡紙、清潔液。【標(biāo)本】EDTA，靜脈血。第二頁，共二十一頁，編輯于2023年，星期二瑞氏染色法【試劑】1．瑞氏(Wright)染液(1)I液:包含瑞氏染料1.0g、純甲醇600ml、甘油15ml。(2)Ⅱ液:磷酸鹽緩沖液(pH6.4～6.8)，含磷酸二氫鉀0.3g、磷酸氫二鈉0.2g、蒸餾水加至1000ml。第三頁，共二十一頁，編輯于2023年，星期二【操作】(1)采血(2)推片，推片與載片夾角30~45°平穩(wěn)地向前移動，血膜應(yīng)呈舌狀，頭、體、尾三部分，且清晰可見。第四頁，共二十一頁，編輯于2023年，星期二第五頁，共二十一頁，編輯于2023年，星期二(3)干燥:晃動。37℃溫箱中促干。(4)染色:將玻片平置于染色架上，滴加(Ⅰ液)3～5滴，約0.5～lmin后，滴加等量緩沖液(Ⅱ液)，搖動玻片混勻。(5)沖洗:5-10min后用流水沖去染液，待干。(6)觀察結(jié)果:將干燥后的血涂片置顯微鏡下觀察。用低倍鏡觀察血涂片體、尾交界處的血細(xì)胞。第六頁，共二十一頁，編輯于2023年，星期二一張良好血涂片的要求：

厚薄適宜頭體尾明顯細(xì)胞分布均勻邊緣整齊兩端和兩邊留有空隙第七頁，共二十一頁，編輯于2023年，星期二標(biāo)準(zhǔn)血涂片第八頁，共二十一頁，編輯于2023年，星期二血涂片分布不均主要原因：推片邊緣不齊、用力不均勻、載片不清潔

第九頁，共二十一頁，編輯于2023年，星期二四、瑞氏染色法(Wright’sstain)1.瑞士染液成分：

①

美藍(lán)（亞甲藍(lán)）：M＋堿性染料，易氧化稱為天青。

②伊紅：E－酸性染料

③

瑞氏染料：M＋＋E-ME↓（伊－美中性物）

④甲醇：溶解染料；固定細(xì)胞形態(tài)；蛋白質(zhì)呈顆粒或網(wǎng)狀，增加細(xì)胞與染料的接觸。H2O甲醇第十頁，共二十一頁，編輯于2023年，星期二四、瑞氏染色法(Wright’sstain)

1.

染液成分：

①

美藍(lán)（亞甲藍(lán)）：M＋堿性染料

②伊紅（曙紅）：E－酸性染料

③

瑞氏染料：M＋＋E-ME↓（伊－美中性物）

④甲醇：溶解染料；固定細(xì)胞形態(tài)；蛋白質(zhì)呈顆?；蚓W(wǎng)狀，增加細(xì)胞與染料的接觸。H2O甲醇第十一頁，共二十一頁，編輯于2023年，星期二

pH的影響：

H＋：堿性染料親和力下降，增強(qiáng)伊紅著色，出現(xiàn)紅染OH－：酸性染料親和力下降，增強(qiáng)美藍(lán)著色，出現(xiàn)藍(lán)染PBS緩沖液：pH6.4－6.8以維持恒定的pH環(huán)境第十二頁，共二十一頁，編輯于2023年，星期二3.染色方法

①

固定：滴加染液3~5滴，固定細(xì)胞0.5~1min

②

染色：加1~2倍PBS緩沖液，混勻染5~10min

③

沖洗：用流水沖去染液或加PBS緩沖液沖洗，待干。第十三頁，共二十一頁，編輯于2023年，星期二4.染色結(jié)果

①外觀：淡紫紅色

②鏡下：

紅細(xì)胞――粉紅色白細(xì)胞――胞核、胞漿及顆粒顯示特有的染色特征第十四頁，共二十一頁，編輯于2023年，星期二第十五頁，共二十一頁，編輯于2023年，星期二第十六頁，共二十一頁，編輯于2023年，星期二5.注意事項

①血膜要干透后才能染色，否則染色時易脫落；

②染色時間與染液濃度、室溫及細(xì)胞多少有關(guān)，一般染液淡、染色時間長些效果好；

③染液不能過少，以防蒸發(fā)沉淀；第十七頁，共二十一頁，編輯于2023年，星期二④沖洗時不能先倒掉染液，應(yīng)以流水沖，防染料沉著。沖洗時間也不能長；⑤染色過淡時可復(fù)染，復(fù)染時先將染料稀釋好；

⑥染色過深可用水沖洗或浸泡，還可用甲醇脫色；

⑦分類最佳區(qū)域為體、尾交界處。第十八頁，共二十一頁，編輯于2023年，星期二4.影響瑞氏染色效果的一些因素：A.染料放置時間；B.溶液的酸堿度；