第七章經(jīng)典免疫學技術黑白般

經(jīng)典免疫學技術一.沉淀反應二.凝集反應三.補體參與的抗原抗體反應四.中和反應1現(xiàn)在是1頁\一共有57頁\編輯于星期四經(jīng)典免疫學技術一.沉淀反應二.凝集反應三.補體參與的抗原抗體反應四.中和反應2現(xiàn)在是2頁\一共有57頁\編輯于星期四沉淀反應

可溶性抗原與相應抗體在液相或凝膠中特異性結合后，形成的免疫復合物在一定條件下出現(xiàn)的蛋白質析出現(xiàn)象。

3現(xiàn)在是3頁\一共有57頁\編輯于星期四沉淀反應原理沉淀原（precipitinogen）沉淀素（precipitin）4現(xiàn)在是4頁\一共有57頁\編輯于星期四沉淀反應的種類

1．溶液中沉淀反應

2．凝膠中沉淀反應5現(xiàn)在是5頁\一共有57頁\編輯于星期四溶液中沉淀反應是指在清徹透明的液體中，呈溶解狀態(tài)的抗原與抗體在試管內或凹玻片上混勻，可凝聚成為肉眼可見的絮狀或顆粒狀的不溶性沉淀物。6現(xiàn)在是6頁\一共有57頁\編輯于星期四絮狀沉淀試驗康氏反應（Kahn‘stest）:心肌提取的類脂質抗原+反應素（Aegagin）敏感性高，特異性差，易出現(xiàn)假陽性。(1991年首批淘汰)性病研究實驗室法(venerealdiseaseresearchlaboratory，VDRL)心擬脂及卵磷酯+反應素（Aegagin）不需加熱的血清反應素試驗(unheatedserumreagin)心擬脂及卵磷酯+氯化膽堿+反應素（Aegagin）7現(xiàn)在是7頁\一共有57頁\編輯于星期四反應最適比測定（1）抗原稀釋法（Dean-Webb法）（2）抗體稀釋法（Ramon法）（3）方陣法或棋盤格滴定法（checkerboardtitration）8現(xiàn)在是8頁\一共有57頁\編輯于星期四環(huán)狀沉淀試驗

（ringprecipitationtest）Ascoli于1902年建立用于檢查獸類內臟、毛皮浸液等標本中的炭疽桿菌抗原9現(xiàn)在是9頁\一共有57頁\編輯于星期四免疫比濁法

（immunoturbidimetry）優(yōu)點：校正曲線穩(wěn)定，簡便快速，易于自動化，無放射性核素污染缺點：特異性、靈敏度稍差10現(xiàn)在是10頁\一共有57頁\編輯于星期四免疫比濁法的分類（1）透射比濁法（transmissionturbidimetry）（2）散射比濁法（nephelometry）（3）免疫膠乳濁度測定法（immunolatexturbidimetry）（4）速率抑制免疫比濁法（rateinhibitionimmunoturbidimetry）11現(xiàn)在是11頁\一共有57頁\編輯于星期四免疫沉淀技術

（Immunoprecipitationassay）12現(xiàn)在是12頁\一共有57頁\編輯于星期四免疫共沉淀技術

（Co-Immunoprecipitationassay）13現(xiàn)在是13頁\一共有57頁\編輯于星期四GSTPULLDOWN14現(xiàn)在是14頁\一共有57頁\編輯于星期四小G蛋白結合活性檢測15現(xiàn)在是15頁\一共有57頁\編輯于星期四免疫共沉淀的局限性（1）難以檢測低親和力和短暫的相互作用（2）不能夠確切分辨第三種蛋白的橋聯(lián)作用（3）靈敏度不如親和色譜高（4）需對未知蛋白的相關信息有一定了解16現(xiàn)在是16頁\一共有57頁\編輯于星期四染色質免疫共沉淀17現(xiàn)在是17頁\一共有57頁\編輯于星期四RNA免疫沉淀在生理狀態(tài)下對結合在RNA上的蛋白質進行免疫沉淀，然后通過基因芯片或者其它手段檢測目的RNA的含量。18現(xiàn)在是18頁\一共有57頁\編輯于星期四免疫沉淀中抗體的選擇19現(xiàn)在是19頁\一共有57頁\編輯于星期四免疫共沉淀技術的應用20現(xiàn)在是20頁\一共有57頁\編輯于星期四單相免疫擴散試驗

（singleimmunodiffusion）21現(xiàn)在是21頁\一共有57頁\編輯于星期四雙向免疫擴散試驗

（doubleimmunodiffusion）22現(xiàn)在是22頁\一共有57頁\編輯于星期四免疫電泳

（immunoelectrophoresis）23現(xiàn)在是23頁\一共有57頁\編輯于星期四對流免疫電泳

（counterimmunoelectrophoresis）24現(xiàn)在是24頁\一共有57頁\編輯于星期四火箭免疫電泳

（rocketimmunoelectrophoresis）25現(xiàn)在是25頁\一共有57頁\編輯于星期四交叉免疫電泳

（crossedimmunoelectrophoresis）26現(xiàn)在是26頁\一共有57頁\編輯于星期四免疫固定電泳

（immunofixationelectrophoresis）首先將蛋白質抗原進行電泳分離，電泳后直接將抗體加于蛋白質區(qū)帶表面，抗體與對應的抗原就會直接結合，形成的復合物嵌于固相支持物中。27現(xiàn)在是27頁\一共有57頁\編輯于星期四免疫印漬技術

（immunoblotting）28現(xiàn)在是28頁\一共有57頁\編輯于星期四經(jīng)典免疫學技術一.沉淀反應二.凝集反應三.補體參與的抗原抗體反應四.中和反應29現(xiàn)在是29頁\一共有57頁\編輯于星期四凝集反應

（agglutination）

顆粒型抗原與相應抗體結合后，在有適當電解質存在下，抗原與抗體充分反應相互聚集，形成肉眼可見的凝集團塊。凝集原（agglutinogen）凝集素（agglutinin）30現(xiàn)在是30頁\一共有57頁\編輯于星期四凝集反應特點1．凝集反應中抗原顆粒較大抗原，長期靜置或離心沉淀可自然下沉２．凝集反應中凝集塊主要由抗原形成，而在沉淀反應中，沉淀物主要由抗體形成３．凝集反應：需稀釋免疫血清中的抗體，使抗體分子不致于過多；沉淀反應：為了不使抗原過多則需稀釋抗原31現(xiàn)在是31頁\一共有57頁\編輯于星期四直接凝集反應

（directagglutination）肥達氏反應（Widalreaction）：一種試管凝集反應。用已知的傷寒桿菌O、H抗原和甲、乙型副傷寒桿菌H抗原，與病人血清作定量凝集試驗，以測定患者血清中無相應抗體存在，作為傷寒、副傷寒診斷的參考。32現(xiàn)在是32頁\一共有57頁\編輯于星期四血型檢測

細胞膜表面血清中A型：A抗原抗B抗體B型：B抗原抗A抗體AB型：A和B抗原無抗A和抗B抗體O型：無A和B抗原有抗A和抗B抗體33現(xiàn)在是33頁\一共有57頁\編輯于星期四間接凝集反應

（indirectagglutination）34現(xiàn)在是34頁\一共有57頁\編輯于星期四反應類型（1）正向間接凝集反應（forwardindirectagglutination）（2）反向間接凝集反應（reverseindirectagglutination）（3）間接凝集抑制反應（indirectagglutinationinhibitiontest）35現(xiàn)在是35頁\一共有57頁\編輯于星期四間接凝集抑制反應36現(xiàn)在是36頁\一共有57頁\編輯于星期四病毒的血凝粘病毒、痘類病毒、呼吸道腸道病毒、某些腺病毒等37現(xiàn)在是37頁\一共有57頁\編輯于星期四橋梁凝集反應38現(xiàn)在是38頁\一共有57頁\編輯于星期四共同凝集反應39現(xiàn)在是39頁\一共有57頁\編輯于星期四玫瑰花環(huán)種類40現(xiàn)在是40頁\一共有57頁\編輯于星期四玫瑰花環(huán)試驗

（rosettetest）41現(xiàn)在是41頁\一共有57頁\編輯于星期四經(jīng)典免疫學技術一.沉淀反應二.凝集反應三.補體參與的抗原抗體反應四.中和反應42現(xiàn)在是42頁\一共有57頁\編輯于星期四43現(xiàn)在是43頁\一共有57頁\編輯于星期四補體參與的抗原抗體反應利用補體作為一種通用試劑來檢測反應體系中抗原抗體復合物的存在，并利用補體對紅細胞的裂解作用，通過紅細胞的變化可以很容易地對反應進行示蹤。44現(xiàn)在是44頁\一共有57頁\編輯于星期四溶血試驗

（hemolyticassay）1942年Rutstein和Walker建立了測定血清中總補體活性的方法。即根據(jù)能使反應體系中50%的致敏綿羊紅細胞發(fā)生溶血的血清的量，計算出每毫升血清中補體的含量。血清中每毫升補體含量（單位）=1/血清用量×稀釋倍數(shù)45現(xiàn)在是45頁\一共有57頁\編輯于星期四補體結合試驗

（complementfixationtest，CFT）1906年Wasermann就將其應用于梅毒的診斷，即著名的華氏反應。46現(xiàn)在是46頁\一共有57頁\編輯于星期四被動紅細胞溶解試驗

（passivehemolysistest）將已知抗原吸附在紅細胞表面，然后加入待測的抗體和補體，若待測抗體和抗原能夠特異性結合形成抗原抗體復合物，就會激活補體的活性，進而造成紅細胞的裂解。47現(xiàn)在是47頁\一共有57頁\編輯于星期四溶血空斑試驗

（hemolyticplaqueassay，HPA）48現(xiàn)在是48頁\一共有57頁\編輯于星期四間接溶血空斑試驗間接法一般用于測定溶血效率較低的IgG或IgA型抗體，反應過程中需要加入抗球蛋白抗體輔助溶血空斑的形成。49現(xiàn)在是49頁\一共有57頁\編輯于星期四改良型溶血空斑試驗50現(xiàn)在是50頁\一共有57頁\編輯于星期四反向溶血空斑試驗51現(xiàn)在是51頁\一共有57頁\編輯于星期四免疫粘附血凝試驗利用補體的C3b就會與紅細胞表面的CR1發(fā)生免疫粘附而出現(xiàn)凝集現(xiàn)象來有效地測定各種抗原、抗體或補體含量。52現(xiàn)在是52頁\一共有57頁\編輯于星期四經(jīng)典免疫學技術一.沉淀反應二.凝集反應三.補體參與的抗原抗體反應四.中和反應53現(xiàn)在是53頁\一共有57頁\編輯于星期四中和反應

（neutralizationtest）將待測血清與一定量的病原微生物混合，經(jīng)適當時間作用后，接種于動物或細胞，觀察待測血清中是否存在特異性抗體以及抗體能否保護易感的試驗動物免于死亡或抑制病毒對細胞的毒害作用。54現(xiàn)在是54頁\一共有57頁\編輯于星期四中和反應優(yōu)勢（1）