厭氧菌的分離和鑒定

關(guān)于厭氧菌的分離和鑒定現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第一頁(yè)，共21頁(yè)

厭氧菌檢驗(yàn)是臨床微生物檢驗(yàn)的重要組成部分。在無(wú)氧（或少氧）條件下，或氧化還原電勢(shì)低的條件下才能繁殖的細(xì)菌稱為厭氧菌。因?yàn)閰捬蹙谌梭w腸道、口腔、泌尿生殖道正常菌群中占優(yōu)勢(shì)，所以當(dāng)人體菌群失調(diào)時(shí)，厭氧菌可能侵犯人體許多部位，發(fā)生嚴(yán)重的甚至致死的內(nèi)源性厭氧菌感染。厭氧菌感染常發(fā)生在深部傷口,但也可伴兼性厭氧菌和需氧菌侵犯人體任何器官和組織。所以，對(duì)厭氧菌檢驗(yàn)應(yīng)給予高度重視?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二頁(yè)，共21頁(yè)

人體各部位厭氧菌寄生量及其與需氧菌之比__________________________________________________________厭氧菌數(shù)量眼結(jié)膜鼻涕唾液牙表面牙周袋與牙垢

__________________________________________________________（cfu\g）103~4101~4108~9109~101011~12

厭氧菌與

需氧菌之比10:110:18~10:11:11000:1

__________________________________________________________厭氧菌數(shù)量胃液結(jié)腸小腸陰道外尿道皮膚

__________________________________________________________

（cfu\g）102~51011~12104~6108~9103~5103~4

厭氧菌與

需氧菌之比1:11000:11:110:110:110:1__________________________________________________________現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三頁(yè)，共21頁(yè)1.正確地選擇標(biāo)本下列細(xì)菌學(xué)指征有助于選擇標(biāo)本做厭氧培養(yǎng)：

（1）深部傷口或軟組織膿腫的膿，特別是伴有惡臭或含有硫磺顆粒時(shí)。

（2）可疑為氣性壞疽或少見(jiàn)的嚴(yán)重產(chǎn)氣或壞死性感染所取得的壞死組織或病灶清除材料。

（3）粘膜部位的感染灶取得的材料。

（4）從腦、肺、肝或其他器官的膿腫或從腹腔內(nèi)、肛周、隔下或其他部位的膿腫取得的材料?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四頁(yè)，共21頁(yè)

（5）無(wú)菌區(qū)感染灶的吸出液(包括血液、腦脊液、腹水、胸水、滑膜液、羊水等)。

（6）人或動(dòng)物咬傷感染灶取得的材料。

（7）變黑的或置于紫外線發(fā)紅色熒光的滲出物。

（8）革蘭染色，鏡下見(jiàn)到具有厭氧菌獨(dú)特形態(tài)的材料。

（9）可疑引起肉毒桿菌食物中毒的食物?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第五頁(yè)，共21頁(yè)2.正確地收集標(biāo)本

厭氧菌是人體許多部位（如皮膚、口咽部、腸道和泌尿生殖道）正常菌群中的一部分，因此下列材料無(wú)需做厭氧培養(yǎng)：

（1）咽、鼻、尿道或直腸拭子。

（2）咳出的痰，通過(guò)支氣管鏡取的分泌物，排出或?qū)С龅哪?、糞及胃內(nèi)容物?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第六頁(yè)，共21頁(yè)

為排除或盡量減少正常菌群中厭氧菌的污染，用注射器抽取標(biāo)本比用拭子更好，特別適用于下列臨床情況：

（1）從未開(kāi)放的膿腫抽取膿液。

（2）通過(guò)胸腔穿刺抽出的胸腔液。

（3）從恥骨聯(lián)合上方做膀胱穿刺吸出或從腎造口管收集的尿。

（4）氣管切開(kāi)吸取的肺分泌物?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第七頁(yè)，共21頁(yè)

（5）穿刺抽出的腹腔液。

（6）通過(guò)腰椎穿刺抽出的腦脊液。

（7）竇道標(biāo)本可插入小導(dǎo)管用注射器吸出，注射器和針頭內(nèi)的氣體應(yīng)全部排出，將其內(nèi)容物直接注入一個(gè)已排出氣的無(wú)菌試管內(nèi)。也可自竇道損傷部位取材做活組織檢查。如果必須使用拭子，應(yīng)盡快接種于適宜的培養(yǎng)基中?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第八頁(yè)，共21頁(yè)

3.正確地運(yùn)送標(biāo)本

臨床標(biāo)本一旦離開(kāi)人體部位，在進(jìn)入?yún)捬醐h(huán)境前，必須防止大氣中氧的毒性作用。應(yīng)及時(shí)將取材的拭子、塑料導(dǎo)管內(nèi)的少量液體、吸入注射器的標(biāo)本裝入?yún)捬跎锎蚬?，在運(yùn)送過(guò)程中要保持厭氧狀態(tài)。培養(yǎng)基內(nèi)不應(yīng)含有肝素，因它會(huì)抑制細(xì)菌生長(zhǎng)?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第九頁(yè)，共21頁(yè)

4.使用新配制的培養(yǎng)基

初代接種厭氧菌最好使用新配制的培養(yǎng)基。

平板培養(yǎng)基無(wú)需在厭氧條件下貯存，用前可進(jìn)行預(yù)還原，但厭氧條件下貯存可延長(zhǎng)培養(yǎng)基的有效期?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十頁(yè)，共21頁(yè)

5.提供可靠的厭氧環(huán)境

使用厭氧罐法、厭氧袋法或厭氧箱法。在厭氧培養(yǎng)中必須使用氧化還原指示劑，一般采用亞甲基美蘭或刃天青，每次要新鮮配制。如果能在孵育的整個(gè)過(guò)程中維持厭氧條件，指示劑溶液將無(wú)色，否則指示劑則變色?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十一頁(yè)，共21頁(yè)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十二頁(yè)，共21頁(yè)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十三頁(yè)，共21頁(yè)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十四頁(yè)，共21頁(yè)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十五頁(yè)，共21頁(yè)6.標(biāo)本接種與孵育

（1）拭子和液體標(biāo)本直接接種固體和液體培養(yǎng)基（需氧和厭氧培養(yǎng)各一份），在厭氧平板上貼一片滅滴靈紙片（5μg/片），置35℃培養(yǎng)。同時(shí)做直接涂片革蘭染色鏡檢。用鉑-銥合金環(huán)（不用鎳-鉻合金環(huán)，因?yàn)樗裳趸臃N物）三區(qū)劃線接種平板，以保證長(zhǎng)出單個(gè)菌落。（2）若被檢標(biāo)本是組織塊，則立刻將其移入無(wú)菌的組織研磨器內(nèi)，用硫乙醇酸鹽混合研碎，最好在厭氧箱內(nèi)或無(wú)氧條件下操作。組織勻漿接種同液體標(biāo)本。（3）可疑含有芽胞梭菌的標(biāo)本，還要用乙醇或加熱處理后再行接種?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十六頁(yè)，共21頁(yè)7.直接涂片檢查

當(dāng)有足夠的標(biāo)本或收到兩個(gè)拭子時(shí)，最好在接種前做涂片革蘭染色鏡檢，檢查結(jié)果可提示需要接種哪些培養(yǎng)基（非常規(guī)使用的）。涂片檢查可看出有無(wú)細(xì)菌，微生物的類(lèi)型和大概的數(shù)量以及芽胞、形狀和位置（芽胞梭菌）、著色情況及菌體特征。對(duì)血性液體或濃稠分泌物用丫啶橙染色比革蘭染色較易觀察。這些初步結(jié)果應(yīng)該及時(shí)向主管醫(yī)生報(bào)告，以幫助他們正確選用抗菌藥物。涂片檢查可核對(duì)培養(yǎng)結(jié)果是實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的一個(gè)重要指標(biāo)?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十七頁(yè)，共21頁(yè)8.厭氧菌鑒定（1）滅滴靈紙片周?chē)霈F(xiàn)抑菌環(huán)說(shuō)明有厭氧菌生長(zhǎng)（絕大多數(shù)專性厭氧菌對(duì)滅滴靈敏感，兼性厭氧菌耐藥）。（2）耐氧試驗(yàn)：接種BRBA平板（需氧厭氧各放一塊）及巧克力平板（置CO2條件下）。（3）革蘭染色：根據(jù)菌落和菌體形態(tài)、染色特性可初步鑒定。（4）抗生素敏感性鑒定：BRBA平板上分區(qū)劃線接種，第一劃線區(qū)貼多粘菌素（10μg/片）、卡那霉素（1000μg/片）和萬(wàn)古霉素（5μg/片）。厭氧菌純培養(yǎng)抑菌環(huán)直徑>=10mm為敏感?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十八頁(yè)，共21頁(yè)表1Ⅱ級(jí)水平實(shí)驗(yàn)室革蘭陰性厭氧菌群、屬、種鑒定_________________________________________________________________________________厭氧菌種類(lèi)細(xì)胞卡那萬(wàn)古多粘20%靛基質(zhì)脂酶硝酸鹽尿素酶動(dòng)力凹痕磚紅色形態(tài)霉素霉素菌素膽汁還原熒光_________________________________________________________________________________脆弱類(lèi)桿菌群BRRR+V——其他類(lèi)桿菌BRRV—V——+—產(chǎn)色素桿菌.RVV—VVP.中間型桿菌CB/BRRS—++-+-PloescheiiRRV———+類(lèi)解脲類(lèi)桿菌群SRS———+VVV—

解脲類(lèi)桿菌.BSRS——++—V梭狀肛菌屬SRSVVV—革蘭陰性球菌CSRSV韋榮球菌屬CSRS+—+_________________________________________________________________________________

R:耐藥，S:敏感，V:不定，C:球菌，B:桿菌，CB:球桿菌，P:Prevotella;*甲酸、延胡素酸鹽刺激生長(zhǎng)陽(yáng)性

現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十九頁(yè)，共21頁(yè)表4-3Ⅱ級(jí)水平實(shí)驗(yàn)室革蘭陽(yáng)性厭氧菌群、屬、種鑒定_______________________________________________________________________________________________________________厭氧菌種類(lèi)細(xì)胞已醇芽卡那多粘萬(wàn)古靛基質(zhì)硝酸鹽觸酶卵磷反向CA菌體列車(chē)雙環(huán)β尿素酶形態(tài)胞試驗(yàn)霉素菌素霉素還原脂酶MP試驗(yàn)狀排列溶血現(xiàn)象_______________________________________________________________________________________________________________厭氧革蘭陽(yáng)性球菌C—VRSV

厭氧消化球菌C/CB—RSRS——+V

不解糖消化球菌C—SRS+梭狀芽胞桿菌屬B+VRSV奈格爾試驗(yàn)陽(yáng)性梭芽胞菌B+SRS+

產(chǎn)氣莢膜梭菌B+SRS—++++

雙酶梭菌B+SRS—+————

索氏梭菌B+SRS—+———+奈格