無菌檢查用培養(yǎng)基適用性

1、無菌檢查用培養(yǎng)基適用性驗證報告無菌檢查用培養(yǎng)基適用性驗證報告審核批準(zhǔn)表O方案經(jīng)下列部門審核和批準(zhǔn)后生效項目職責(zé)姓名簽字日期起草質(zhì)保部質(zhì)保部審核質(zhì)保部長批準(zhǔn)質(zhì)量副總制藥有限公司文件文件編號：制藥有限公司文件文件編號：VR-03-49頁碼： /81.驗證目的：為證明硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基、營養(yǎng)肉湯、改良馬丁培養(yǎng)基適合于細(xì)菌，真菌的無菌檢查，總結(jié)本驗證報告。.參照標(biāo)準(zhǔn)：中國藥典2010版二部附錄XIH無菌檢查法。.驗證項目：硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基、營養(yǎng)肉湯、改良馬丁培養(yǎng)基適用性檢查。.驗證小組姓名部門職責(zé)質(zhì)保部負(fù)責(zé)對驗證進(jìn)行總結(jié)和評價批準(zhǔn)方案及報告質(zhì)保部負(fù)責(zé)制定確認(rèn)方案及報告的編制質(zhì)保部負(fù)責(zé)確認(rèn)過程的相

2、關(guān)檢測，確保檢驗結(jié)論正確可靠質(zhì)保部負(fù)責(zé)確認(rèn)過程的相關(guān)檢測，確保檢驗結(jié)論正確可靠4.試驗材料：被驗證培養(yǎng)基：品名：硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基規(guī)格：批號：生產(chǎn)廠家：品名：營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基規(guī)格：批號：生產(chǎn)廠家：品名：改良馬丁培養(yǎng)基規(guī)格：批號：生產(chǎn)廠家：儀器設(shè)備：壓力蒸汽滅菌器：型號：編號：雙人凈化工作臺：型號：編號：電熱鼓風(fēng)干燥箱：型號：編號：生化培養(yǎng)箱（2328）：型號：編號：恒溫培養(yǎng)箱（3035）型號：編號：稀釋劑：0.9%無菌氯化鈉溶液4.4.驗證用培養(yǎng)基：名稱生產(chǎn)廠家批號營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基4.5.驗證用菌株：驗證菌株代次培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度培養(yǎng)時間(小時)金黃色葡萄球菌CMCC(B)2600

3、330351824銅綠假單胞菌cmcc(B)1010430351824枯草芽孢桿菌cmcc(B)6350130351824生孢梭菌CMCC(B)6494130351824白色念珠菌CMCC(F)9800123282448黑曲霉菌CMCC(F)98003232857天5.菌液制備：取經(jīng)培養(yǎng)1824小時的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的營養(yǎng)肉湯新鮮培養(yǎng)物1ml加入到9ml0.9%無菌氯化鈉溶液中，10倍稀釋至小于100cfu/ml的菌懸液備用。取經(jīng)培養(yǎng)2448小時的白色念珠菌的改良馬丁培養(yǎng)物1ml加入到9ml0.9%無菌氯化鈉溶液中，10倍稀釋至小于100cfu/ml的菌懸液備用。.菌

4、液計數(shù)：(每種菌液接種2個平皿)分別取上述制備的金黃色葡萄糖球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌各1ml加入培養(yǎng)皿，每種菌液平行做2皿，注入不超過45營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基1520ml,置3035培養(yǎng)箱培養(yǎng)二天，取上項制備的白色念珠菌菌液1ml加入培養(yǎng)皿，平行做2皿，注入不超過45的玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基約1520ml,置2328培養(yǎng)箱培養(yǎng)三天。.無菌培養(yǎng)基的無菌性檢查培養(yǎng)基的配制硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基的配制：取硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基29.25g,加1L蒸餾水，加熱煮沸使其完全溶解，搖勻分裝到試管中，每只試管裝量12ml,121滅菌15min。營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基的配制：取營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基18g，加1L蒸餾水，加熱攪拌使

5、其完全溶解，搖勻分裝到試管中，每只試管裝量12ml，121滅菌15min。改良馬丁培養(yǎng)基的配制：取改良馬丁培養(yǎng)基28.5g，加1L蒸餾水，加熱攪拌使其完全溶解，搖勻分裝到到試管中，每只試管裝量9ml，121滅菌15min。培養(yǎng)基的培養(yǎng)硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基5支，置于3035的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)14天;改良馬丁培養(yǎng)基5支，置于2328的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)14天,逐日觀察情況。仔工表1培養(yǎng)基的無菌性舉查表、培養(yǎng)基名稱管數(shù)1培養(yǎng)時叮（天）備注1234567891011121314硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基123A45-1營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基1Q2Q3A4r51改良馬丁培養(yǎng)基1o2o3A45結(jié)論注：“+”為生長

6、，“-”為不生長7.培養(yǎng)基靈敏度檢查硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基等靈敏度檢查至少應(yīng)進(jìn)行3次獨(dú)立的平行試驗。養(yǎng)基的配制硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基的配制：取硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基29.25g,加1L蒸餾水，加熱煮沸使其完全溶解，搖勻分裝到試管中，每只試管裝量12ml,121滅菌15min。營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基的配制：取硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基18g，加1L蒸餾水，加熱攪拌使其完全溶解，搖勻分裝到試管中，每只試管裝量12ml，121滅菌15min。改良馬丁培養(yǎng)基的配制：取改良馬丁培養(yǎng)基28.5g，加1L蒸餾水，加熱攪拌使其完全溶解，搖勻分裝到到試管中，每只試管裝量9ml，121滅菌15min。培養(yǎng)基接種取每管裝量為12ml的

7、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基9支，分別接種小于100cfu/ml的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌各2支，另1支不接種作為空白對照，培養(yǎng)3天;取每管裝量為9ml的改良馬丁培養(yǎng)基5支，分別接種小于100cfu/ml的白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接種作為空白對照，培養(yǎng)5天。逐日觀察結(jié)果。結(jié)果判斷空白對照管應(yīng)無菌生長，若加菌的培養(yǎng)基管生長良好，判該培養(yǎng)基的靈敏度檢查符合規(guī)定。表2培養(yǎng)基靈敏度檢查表菌種類培養(yǎng)培養(yǎng)硫乙醇酸鹽流體培備注123金型色基裝基管葡萄球121枯草芽121121銅綠假121121生孢梭121121空菌對121菌種類培養(yǎng)培養(yǎng)營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基備注123金型色基裝基1目1

8、21JJ=USEt枯草芽121121銅綠假121的帕曲121生孢梭121、121空菌對121菌種類培養(yǎng)培養(yǎng)改良馬丁培養(yǎng)基備注.衽lj.12345白型念基裝基1目91黑曲菌霉9191空白對91結(jié)論力丁+V注：+zE長，為不生長8驗證周期：同種培養(yǎng)基的不同批號，不同生產(chǎn)廠家均應(yīng)進(jìn)行適用性驗證。9結(jié)論：無菌檢查用培養(yǎng)基適用性驗證報告書驗證項目無菌檢查用培養(yǎng)基適用性驗證驗證目的無菌檢查用培養(yǎng)基適合于細(xì)菌，真菌的培養(yǎng)2014年_月_日至2014年月_日，驗證小組根據(jù)批準(zhǔn)的“驗證方案”對無菌檢查用培養(yǎng)基進(jìn)行無菌檢查和靈敏度驗證，驗證方案在實施過程中未做修改；根據(jù)中華人民共和國藥典2010年版（二部）附錄無

9、菌檢查法培養(yǎng)基的適用性檢查，結(jié)果。驗證人員會簽：部門職責(zé)人員會簽質(zhì)保部負(fù)責(zé)對驗證進(jìn)行總結(jié)和評價批準(zhǔn)方案及報告質(zhì)保部負(fù)責(zé)制定確認(rèn)方案及報告的編制質(zhì)保部負(fù)責(zé)確認(rèn)過程的相關(guān)檢測，確保檢驗結(jié)論正確可靠質(zhì)保部負(fù)責(zé)確認(rèn)過程的相關(guān)檢測，確保檢驗結(jié)論正確可靠批準(zhǔn)人：批準(zhǔn)日期：無菌培養(yǎng)基的適用性檢查記錄培養(yǎng)基：1.硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基批號：檢驗日期：.營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基批號：檢驗日期：.改良馬丁培養(yǎng)基批號：檢驗日期：一、培養(yǎng)基的無菌性檢查培養(yǎng)溫度：硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基改良馬丁培養(yǎng)基培養(yǎng)基名稱管培養(yǎng)時間（天）|備數(shù)11234567891011121314注硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基沖*12O3A45營養(yǎng)肉湯12二、培養(yǎng)基的

10、靈敏度檢查1.菌液制備：(1)金黃色葡萄球菌CMCC(B)26003第代(1)金黃色葡萄球菌CMCC(B)26003第代(2)枯草芽孢桿菌CMCC(B)63501第一代(3)銅綠假單胞菌CMCC(B)10104第_代(4)生孢梭菌CMCC(B)64941第代(5)白色念珠菌CMCC(F)98001第代(6)檢查理窠8003第一代細(xì)菌培養(yǎng)溫度3養(yǎng)溫度5天0.9%無菌NaCl溶液至含菌量_CFU/ml0.9%無菌NaCl溶液至含菌量CFU/ml0.9%無菌NaCl溶液至含菌量CFU/ml0.9%無菌NaCl溶液至含菌量CFU/ml0.9%無菌NaCl溶液至含菌量CFU/ml0.9%無菌NaCl溶液至含菌量CFU/ml天霉菌及酵母菌培菌種類培養(yǎng)培養(yǎng)硫乙醇酸鹽流體培備注123金黃色基裝基管121枯草芽121121銅綠假121121生孢梭121121空白對121菌種類培養(yǎng)培養(yǎng)營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基備注AffljZ12