高效液相色譜法測(cè)定大黃蟲(chóng)丸中芍藥苷的含量

1、高效液相色譜法測(cè)定大黃蟲(chóng)丸中芍藥苷的含量【摘要】目的建立高效液相色譜法測(cè)定大黃蟲(chóng)丸中芍藥苷含量的方法。方法采用HypersilDS2柱4.62505；流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸溶液1585；柱溫30；檢測(cè)波長(zhǎng)230n。結(jié)果芍藥苷線性范圍0.121.08g，平均回收率=98.78%，RSD=1.35%。結(jié)論該方法簡(jiǎn)便、可靠、準(zhǔn)確，可用于該制劑中白芍的質(zhì)量控制?！娟P(guān)鍵詞】大黃蟲(chóng)丸芍藥苷高效液相色譜法Abstrat：bjetiveTestablishaethdfrdeterinatinfPaeniflrininDahuangZhehngPill.ethdsAnHPLethdasdevelpedand

2、theHypersilDS2lun4.62505asused.Thebilephaseasaetnitrile-0.1%rthphsphriaid(1585).Thedetetinavelengthasat230nandthelunteperatureas25.ResultsThereasagdlinearrrelatinshipintherangef0.121.08g,theaveragereveryas98.78%,RSD=1.35%.nlusinTheethdisnvenient,reliableandaurate.ItissuitablefrdeterinatinfthententfP

3、aeniflrininDahuangZhehngPill.Keyrds：DahuangZhehngPill;Paeniflrin;HPL大黃蟲(chóng)丸收載于?中國(guó)藥典?2022年版部1，主要由熟大黃、土鱉蟲(chóng)、水蛭、桃仁、白芍、黃芩等12味中藥組成，成效活血化淤，通經(jīng)消癥。用于瘀血內(nèi)停而致腹部腫塊、肌膚甲錯(cuò)、經(jīng)閉不行等，臨床療效確切。但原藥為蜜丸，劑型落后，本實(shí)驗(yàn)擬對(duì)其進(jìn)展二次開(kāi)發(fā)，原方中藥味較多，?中國(guó)藥典?含量測(cè)定只對(duì)方中熟大黃中大黃素進(jìn)展了含量測(cè)定，對(duì)用量較大的白芍未進(jìn)展定量，實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法建立了該藥中芍藥苷的含量測(cè)定方法，為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)該制劑打下基矗1器材1.1儀器AngilentHP1

4、100高效液相色譜儀；G1314A紫外檢測(cè)器；KQ-500DE型超聲儀。1.2藥品大黃蟲(chóng)丸廣東陽(yáng)江制藥廠，批號(hào)051104，051218，060320；陰性樣品自制。1.3試劑及材料芍藥苷對(duì)照品批號(hào)中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)0715-200211；高效液相使用乙腈為色譜純，水為高純水；其余試劑均為分析純。2方法2.1含量測(cè)定色譜條件色譜柱為AngilentHypersilDS2柱4.6250，5；流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸溶液15:85；柱溫30；流速1.0l/in；檢測(cè)波長(zhǎng)230n；進(jìn)樣量10l。2.2對(duì)照品溶液的制備精細(xì)稱(chēng)芍藥苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每毫升含0.6g的溶液，作為對(duì)照品貯備

5、液。2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制分別精細(xì)汲取對(duì)照品貯備液0.2，0.6，1.0，1.4，1.8l置10l量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，備用。各精細(xì)汲取10l注入液相色譜儀中，測(cè)定，測(cè)得峰面積，以對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性范圍為0.121.08g，回歸方程Y=941.6X+6.2919，r=0.9999。2.4供試品溶液的制備取本品，研細(xì)，取約1g，精細(xì)稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精細(xì)加甲醇50l，稱(chēng)定重量，超聲功率250，頻率40kHz，40處理40in，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精細(xì)量取續(xù)濾液10l，通過(guò)氧化鋁-活性炭柱(中性氧化鋁3g，濕法裝柱，上覆

6、層析用活性炭1g，甲醇預(yù)洗)，用甲醇50l洗脫，搜集洗脫液，水浴濃縮至適量，轉(zhuǎn)移至10l量瓶中，并加甲醇稀釋至刻度，搖勻，以微孔濾膜0.45濾過(guò)，作為供試品液。HPL圖譜見(jiàn)圖1。2.5陰性實(shí)驗(yàn)按處方比例，制得缺白芍制劑，按供試品項(xiàng)下方法制備陰性樣品，進(jìn)展高效液相測(cè)定，證明陰性無(wú)干擾。2.6精細(xì)度實(shí)驗(yàn)取芍藥苷對(duì)照品溶液60.8g/l，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)得峰面積分別為580.27545，580.94385，583.23654，582.19873，583.49573，RSD=0.24%,說(shuō)明儀器精細(xì)度良好。2.7穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取供試品溶液批號(hào)051104，每隔2h進(jìn)樣測(cè)定1次，共進(jìn)樣6次，測(cè)得芍藥苷的峰面

7、積值分別為345.85455，348.25948，351.16549，347.02654，349.98742，346.14215。RSD=0.62%，說(shuō)明樣品溶液在10h內(nèi)測(cè)定穩(wěn)定。2.8重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取樣品批號(hào)0511045份，按供試品制備項(xiàng)下分別提取，精制，測(cè)定，芍藥苷含量分別為1.8026，1.8374，1.8244，1.8149，1.7886(g/g)，RSD=1.04%，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)重復(fù)性良好。2.9加樣回收率實(shí)驗(yàn)取樣品批號(hào)0511045份，分別參加芍藥苷對(duì)照品適量，按樣品制備項(xiàng)下方法制備。結(jié)果見(jiàn)表1。表1芍藥苷加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果略2.10樣品測(cè)定分別取3批樣品，按供試品溶液制備項(xiàng)下制備供試

8、品，分別進(jìn)樣，測(cè)定即得。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。表2不同批次樣品中芍藥苷的含量測(cè)定結(jié)果略?中國(guó)藥典?2022年版部中白芍藥材中芍藥苷含量不得少于1.6%，推算得知大黃蟲(chóng)丸中芍藥苷含量應(yīng)不得少于1.44g/g，因此以上3批樣品含量均合格，二次開(kāi)發(fā)制劑中芍藥苷的含量應(yīng)以此為根據(jù)。3討論原方中藥味較多，直接使用溶劑提取進(jìn)展液相測(cè)定干擾較大，因此實(shí)驗(yàn)考察了供試品制備方法中提取溶劑甲醇，稀乙醇、提取方法回流、超聲、提取時(shí)間20，40，60in、過(guò)柱上樣量、洗脫量的條件，結(jié)果以正文所述方法最好，樣品可以到達(dá)較好的別離。試比擬了3種流動(dòng)相2：甲醇-水-冰醋酸49501；乙腈-0.1%磷酸溶液1585；乙腈-水(1387)，結(jié)果以流動(dòng)相別離效果最好，應(yīng)選擇流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸溶液1585。該含量測(cè)定方法簡(jiǎn)便，快速，重現(xiàn)性好，既可以為進(jìn)一步開(kāi)