蛋白質(zhì)電泳的方法及顯色方法ppt課件

1、一維蛋白質(zhì)電泳的方法及顯色方法一維蛋白質(zhì)電泳的方法及顯色方法 輝駿生物：fitgene/ 免費(fèi)服務(wù)熱線：400-699-16631: 1: 一維蛋白質(zhì)電泳方法的分類一維蛋白質(zhì)電泳方法的分類 （1 1）: SDS-PAGE: SDS-PAGE （2 2）: CTAB-PAGE: CTAB-PAGE （3 3）: : 酸酸- -尿素連續(xù)尿素連續(xù)PAGEPAGE （4 4）: Tricine-SDS-PAGE: Tricine-SDS-PAGE （5 5）: Native PAGE: Native PAGE2 2：凝膠染色方法：凝膠染色方法 （1 1）：有機(jī)燃料類）：有機(jī)燃料類 （2 2）：熒光探針

2、類）：熒光探針類 （3 3）：金屬離子結(jié)合類）：金屬離子結(jié)合類一維蛋白質(zhì)電泳的方法及顯色方法一維蛋白質(zhì)電泳的方法及顯色方法 輝駿生物：fitgene/ 免費(fèi)服務(wù)熱線：400-699-1663 簡介：簡介： SDS SDS 是一種陰離子表面活性劑是一種陰離子表面活性劑. .當(dāng)當(dāng) SDS SDS 與蛋白質(zhì)混與蛋白質(zhì)混合時(shí)合時(shí), ,它會(huì)以其碳鏈與蛋白質(zhì)之疏水性胺基酸結(jié)合將蛋它會(huì)以其碳鏈與蛋白質(zhì)之疏水性胺基酸結(jié)合將蛋白質(zhì)包起來白質(zhì)包起來, ,而以硫酸根離子外露與水分子作用而以硫酸根離子外露與水分子作用. .大多數(shù)大多數(shù)蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)和 SDS SDS 的平均結(jié)合量是的平均結(jié)合量是 1:1.4 (1:1

3、.4 (以重量為單位以重量為單位),),而蛋白質(zhì)結(jié)合固定比例之而蛋白質(zhì)結(jié)合固定比例之 SDSSDS后后, ,由于由于 SDS SDS 帶強(qiáng)負(fù)價(jià)帶強(qiáng)負(fù)價(jià), ,使蛋白質(zhì)原先的帶電價(jià)微不足道使蛋白質(zhì)原先的帶電價(jià)微不足道, ,且每單位重量之蛋白且每單位重量之蛋白質(zhì)帶電價(jià)一致質(zhì)帶電價(jià)一致 (charge density),(charge density),所以決定不同蛋白的所以決定不同蛋白的泳動(dòng)速率就只剩下分子大小一項(xiàng)因素。泳動(dòng)速率就只剩下分子大小一項(xiàng)因素。1: 1: 一維蛋白質(zhì)電泳方法一維蛋白質(zhì)電泳方法SDS-PAGESDS-PAGE 輝駿生物：fitgene/ 免費(fèi)服務(wù)熱線：400-699-1663

4、1: 1: 一維蛋白質(zhì)電泳方法一維蛋白質(zhì)電泳方法CTAB-PAGECTAB-PAGE簡介：簡介： SDSSDS屬于陰離子去垢劑，在低溫下會(huì)結(jié)晶，某些情況屬于陰離子去垢劑，在低溫下會(huì)結(jié)晶，某些情況下還會(huì)使蛋白質(zhì)聚集或沉淀，而其有些蛋白質(zhì)在下還會(huì)使蛋白質(zhì)聚集或沉淀，而其有些蛋白質(zhì)在SDSSDS凝凝膠中不能很好的溶解或者出現(xiàn)異常的遷移現(xiàn)象。膠中不能很好的溶解或者出現(xiàn)異常的遷移現(xiàn)象。 而而CTABCTAB屬于陽離子去垢劑，可以很好的避免上述問屬于陽離子去垢劑，可以很好的避免上述問題，如果樣品沒有經(jīng)過煮沸和外加還原劑，一些經(jīng)題，如果樣品沒有經(jīng)過煮沸和外加還原劑，一些經(jīng)CTABCTAB電泳系統(tǒng)分離的蛋白質(zhì)

5、仍然保持其酶活性。電泳系統(tǒng)分離的蛋白質(zhì)仍然保持其酶活性。 輝駿生物：fitgene/ 免費(fèi)服務(wù)熱線：400-699-16631: 1: 一維蛋白質(zhì)電泳方法一維蛋白質(zhì)電泳方法酸酸- -尿素連續(xù)尿素連續(xù)PAGEPAGE簡介：簡介： 非常適合研究同一蛋白的微小結(jié)構(gòu)變體有細(xì)微的非常適合研究同一蛋白的微小結(jié)構(gòu)變體有細(xì)微的電荷差別或修飾后的電荷差別或修飾后的 方式例如磷酸化，乙?；绞嚼缌姿峄?，乙酰化等）。而等）。而SDS-PAGESDS-PAGE難以將大小相似而電荷不同的兩種難以將大小相似而電荷不同的兩種蛋白分開。蛋白分開。 輝駿生物：fitgene/ 免費(fèi)服務(wù)熱線：400-699-16631: 1:

6、 一維蛋白質(zhì)電泳方法一維蛋白質(zhì)電泳方法Tricine-SDS-PAGETricine-SDS-PAGE簡介：簡介： Tricine-SDS-PAGE適用與肽類的電泳，用適用與肽類的電泳，用tricine代替了甘氨酸可以分離小到代替了甘氨酸可以分離小到500Da的肽類，的肽類，適合適合SDS-PAGE肽圖譜以及制備氨基末端，羧基末端肽圖譜以及制備氨基末端，羧基末端測序的樣品。測序的樣品。 輝駿生物：fitgene/ 免費(fèi)服務(wù)熱線：400-699-1663（5）: Native PAGE 非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(Native-PAGE)是在不加入是在不加入SDS 和疏基乙

7、醇等變性劑的條件下，對(duì)保持活性的蛋白質(zhì)進(jìn)和疏基乙醇等變性劑的條件下，對(duì)保持活性的蛋白質(zhì)進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳，常用于酶的鑒定、同工酶分析和提純。行聚丙烯酰胺凝膠電泳，常用于酶的鑒定、同工酶分析和提純。未加未加SDS的天然聚丙烯酰胺凝膠電泳可以使生物大分子在電泳的天然聚丙烯酰胺凝膠電泳可以使生物大分子在電泳過程中保持其天然的形狀和電荷，它們的分離是依據(jù)其電泳遷過程中保持其天然的形狀和電荷，它們的分離是依據(jù)其電泳遷移率的不同和凝膠的分子篩作用，因而可以得到較高的分辨率，移率的不同和凝膠的分子篩作用，因而可以得到較高的分辨率，尤其是在電泳分離后仍能保持蛋白質(zhì)和酶等生物大分子的生物尤其是在電泳分離后仍

8、能保持蛋白質(zhì)和酶等生物大分子的生物活性，對(duì)于生物大分子的鑒定有重要意義，其方法是在凝膠上活性，對(duì)于生物大分子的鑒定有重要意義，其方法是在凝膠上進(jìn)行兩份相同樣品的電泳，電泳后將凝膠切成兩半，一半用于進(jìn)行兩份相同樣品的電泳，電泳后將凝膠切成兩半，一半用于活性染色，對(duì)某個(gè)特定的生物大分子進(jìn)行鑒定，另一半用于所活性染色，對(duì)某個(gè)特定的生物大分子進(jìn)行鑒定，另一半用于所有樣品的染色，以分析樣品中各種生物大分子的種類和含量。有樣品的染色，以分析樣品中各種生物大分子的種類和含量。 1: 1: 一維蛋白質(zhì)電泳方法一維蛋白質(zhì)電泳方法Native-PAGENative-PAGE 輝駿生物：fitgene/ 免費(fèi)服務(wù)熱

9、線：400-699-1663通常用來與蛋白質(zhì)非共價(jià)結(jié)合并使之顯色的標(biāo)記物大致分為幾類： （1）：有機(jī)燃料類。如考馬斯亮藍(lán)，利用吸光度檢測。 （2）：熒光探針類。如Sypro染料和尼羅河紅，通過熒光檢測。 （3）：金屬離子結(jié)合類。該類又可分為兩類。 一類是通過與不同鹽結(jié)合而顯色如使用鋅-咪唑染料進(jìn)行復(fù)染或反響染色） 另一類是利用金屬離子的還原反映而被檢測到，如銀染。2:2:染色方法染色方法 輝駿生物：fitgene/ 免費(fèi)服務(wù)熱線：400-699-16631: 傳統(tǒng)考馬斯亮藍(lán)R250(Commassie Blue R-250, CBR-250)染色 CBR-250是一種有機(jī)染料，它通常能通過范德

10、華力與NH3+的靜電引力，與蛋白質(zhì)形成緊密而非共價(jià)結(jié)合的復(fù)合物。與精氨酸和賴氨酸殘基結(jié)合緊密，而與芳香族側(cè)鏈親和性稍低。2：快速考馬斯亮藍(lán)染色 通過使用微波爐加速了CBR-250染色和脫色的過程，同時(shí)提高了靈敏度。3：InstaStain Blue凝膠紙染色 通過使用一種含有考馬斯亮藍(lán)染料的紙將染料加到凝膠上去，這樣就避免了操作液體染料時(shí)產(chǎn)生的問題，而且可以減少染色背景。（1 1有機(jī)染料類：有機(jī)染料類：2:2:染色方法染色方法 輝駿生物：fitgene/ 免費(fèi)服務(wù)熱線：400-699-1663（2 2熒光探針類熒光探針類 有機(jī)染料在水溶液中不發(fā)熒光，單在非極性溶液中或者SDS-蛋白質(zhì)復(fù)合物相連時(shí),就會(huì)發(fā)處很強(qiáng)的熒光，通過熒光掃描儀檢測。 1：SYPRO Ruby 熒光染色， SYPRO Ruby 是一種過度金屬有機(jī)復(fù)合物，直接通過靜電作用與堿性氨基酸相互作用。 2：SYPRO Orange熒光染色。2:2:染色方法染色方法 輝駿生物：fitgene/ 免費(fèi)服務(wù)熱線：400-699-1663 （3金屬離子結(jié)合類金屬離子結(jié)合類 銀染：基于蛋白質(zhì)中各種基團(tuán)如琉基、碳基等與銀的結(jié)合的原理，主要實(shí)驗(yàn)步驟：固定，敏化，銀液注入，顯色，終止反映和圖像固定。 GelCode磷蛋白染色 這種方法依賴于在鈣離子存在時(shí)，用0.5mol/L氫氧化鈉水