兩種不同檢測(cè)方法對(duì)HBsAg和TP檢測(cè)結(jié)果的比較

1、兩種不同檢測(cè)方法對(duì)HBsAg和TP檢測(cè)結(jié)果的比較楊荷英 李菊蘭 高映雪 甘肅省白銀市中心血站 甘肅 白銀 730900【摘要】：目的 探討乙型肝炎表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯(lián)合檢測(cè)試劑（金標(biāo)法）的敏感性、特異性。方法 采用ELISA法和金標(biāo)法對(duì)768例血清樣本同時(shí)進(jìn)行檢測(cè),并且對(duì)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比分析。結(jié)果 768例樣本中，用ELISA法檢測(cè)HBsAg和TP全陰性的結(jié)果,金標(biāo)法同樣均為陰性；ELISA法檢測(cè)HBsAg和TP陽(yáng)性的，金標(biāo)法檢測(cè)結(jié)果有所改變， 各單項(xiàng)指標(biāo)經(jīng)X2檢驗(yàn)HBsAg檢測(cè)結(jié)果的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01）；TP檢測(cè)結(jié)果差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。結(jié)論 兩種方法對(duì)HBsAg和T

2、P測(cè)定的特異性有差別,但是ELISA法敏感性更高?！娟P(guān)鍵詞】： 金標(biāo)法 ELISA法 HBsAg TP 敏感性 特異性 目前我站對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血者獻(xiàn)血前的初篩檢驗(yàn)項(xiàng)目主要是ABO血型、HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、TP,都采用快速檢測(cè)試劑條。這里筆者主要對(duì)乙型肝炎表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯(lián)合檢測(cè)試劑（金標(biāo)法）加以探討。乙型肝炎表面抗原的檢測(cè)方法很多，血站實(shí)驗(yàn)室主要以ELISA法和金標(biāo)法最常用。ELISA法在臨床應(yīng)用的時(shí)間較早，金標(biāo)法是近年建立起來(lái)的免疫學(xué)檢測(cè)法。1 梅毒的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法主要有病原學(xué)檢查和血清學(xué)試驗(yàn)，血清學(xué)試驗(yàn)又包括非梅毒螺旋體血清學(xué)試驗(yàn)和梅毒螺旋體血清學(xué)試驗(yàn)；梅毒螺旋體血清學(xué)試

3、驗(yàn)包括梅毒螺旋體血球凝集試驗(yàn)（TPHA）、梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)(TPPA)、熒光梅毒螺旋體抗體吸附試驗(yàn)（FTA-ABS）、測(cè)定螺旋體抗體的血清學(xué)試驗(yàn)（ELISA）。2目前血站主要使用梅毒螺旋體抗體診斷試劑盒（ELISA）。1 兩種試劑的用途及原理1.1金標(biāo)法預(yù)期用途：乙肝表面抗原(HBsAg)為乙肝病毒的胞膜蛋白，本身不具有傳染性，但它的出現(xiàn)常伴隨乙肝病毒的存在，所以乙肝表面抗原陽(yáng)性是乙肝病毒感染的標(biāo)志。它可存在于患者的血液、唾液、乳汁、汗液等分泌物中。在感染乙肝病毒后26個(gè)月，可在血清中測(cè)到陽(yáng)性結(jié)果。急性乙型肝炎患者大部分可在病情早期轉(zhuǎn)陰，慢性乙型肝炎患者該指標(biāo)可持續(xù)陽(yáng)性，成為乙肝病毒攜帶

4、者。梅毒螺旋體是引起人類梅毒的病原體，當(dāng)病原體侵入人體后，可刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生梅毒螺旋體特異性抗體。梅毒主要通過性接觸、母嬰垂直傳播，也可通過血液傳播，先天性梅毒臨床主要表現(xiàn)以流產(chǎn)、死胎或梅毒兒，后天性梅毒臨床依據(jù)感染過程分為三期，早期診斷是杜絕感染及時(shí)治療的有效措施。乙型肝炎表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯(lián)合檢測(cè)試劑，為定性檢測(cè)人全血/血清/血漿中乙型肝炎病毒表面抗原和梅毒螺旋體抗體，適用于乙型肝炎表面抗原和梅毒螺旋體早期感染的輔助診斷。檢測(cè)原理 乙型肝炎表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯(lián)合檢測(cè)試劑采用膠體金免疫層析技術(shù)同時(shí)測(cè)定全血、血清或血漿中乙型肝炎表面抗原和梅毒螺抗體。在硝酸纖維素膜上依次包被乙型

5、肝炎病毒表面抗原檢測(cè)線、梅毒抗體檢測(cè)線，以及對(duì)照線。當(dāng)檢測(cè)標(biāo)本HBsAg/TP陽(yáng)性時(shí)，標(biāo)本中的乙肝表面抗原或梅毒抗體與膠體金標(biāo)記的抗-Hbs單抗或TP抗原特異性結(jié)合，形成各自的復(fù)合物，如果是HBsAg復(fù)合物沿著硝酸纖維素膜層析至乙肝表面抗原檢測(cè)線時(shí)，即與檢測(cè)線上包被的抗-HBs單抗結(jié)合形成“Au-抗-HBs單抗- HBsAg-抗-HBs單抗”夾心結(jié)合物產(chǎn)生有色線條。若是TP復(fù)合物行至TP檢測(cè)線時(shí)，即與檢測(cè)線上包被的TP抗原結(jié)合形成“Au-TP抗原-TP抗體-TP抗原”夾心結(jié)合物產(chǎn)生有色線條。未結(jié)合的膠體金顆粒則富集在對(duì)照線處，使對(duì)照線呈現(xiàn)清晰可見的有色線條；被試的陰性樣品只在對(duì)照線處顯色。1.

6、2酶聯(lián)免疫法（ELISA）預(yù)期用途 乙型肝炎病毒表面抗原和梅毒螺旋體抗體診斷試劑盒是定性檢測(cè)人血清或血漿中的乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）和梅毒螺旋體抗體（TP）。適用于血液篩查和臨床乙型肝炎病毒表面抗原感染和梅毒螺旋體感染的輔助診斷。檢驗(yàn)原理 兩種試劑盒均采用雙抗原夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)原理。筆者專門對(duì)768例獻(xiàn)血者血清樣本同時(shí)使用兩種方法進(jìn)行檢測(cè)比對(duì),發(fā)現(xiàn)有個(gè)別ELISA法檢測(cè)陽(yáng)性或OD值在灰區(qū)（0.71.0之間）的金標(biāo)法檢測(cè)為陰性，再用不同廠家的試劑ELISA法復(fù)查結(jié)果仍為陽(yáng)性或OD值在灰區(qū)，經(jīng)反復(fù)檢測(cè)ELISA法的敏感性和特異性均優(yōu)于金標(biāo)法，現(xiàn)將檢測(cè)結(jié)果報(bào)告如下。2 試驗(yàn)材料和方法

7、2.1 試劑和儀器 ELISA法試劑由北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)有限公司（A試劑）和廈門英科新創(chuàng)科技有限公司（B試劑）提供的；金標(biāo)法試劑由廈門英科新創(chuàng)科技有限公司提供，試劑均在有效期內(nèi)使用。全自動(dòng)酶免系統(tǒng)由深圳愛康公司生產(chǎn)的Uranus 100和Uranus 120。2.2 標(biāo)本來(lái)源 2013年7-12月份部分無(wú)償獻(xiàn)血者血樣。2.3 檢測(cè)方法 所有樣本均使用一次性真空負(fù)壓管血袋留樣，EDTA-K抗凝管。ELISA法嚴(yán)格按照說明書操作，按照本檢測(cè)項(xiàng)目的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程設(shè)置三陰兩陽(yáng)、QC1（低值）、QC2（高值）和NQC, HBsAg和TP檢測(cè)方法均為雙抗原夾心法酶聯(lián)免疫試驗(yàn)原理。參考值：HBsAg 臨界值計(jì)算

8、（CUTOFF）：臨界值=陰性對(duì)照空A均值NC×2.1（陰性對(duì)照空低于0.05者按0.05計(jì)算），陰性對(duì)照空A值0.10，陽(yáng)性對(duì)照空A值0.08，否則實(shí)驗(yàn)無(wú)效。TP臨界值計(jì)算（CUTOFF）臨界值=陰性對(duì)照空A均值NC+0.18，陰性對(duì)照空A值0.10，陽(yáng)性對(duì)照空A值0.08，否則實(shí)驗(yàn)無(wú)效；若有1孔陰性對(duì)照A值大于0.1應(yīng)舍去；若兩孔或兩孔以上陰性對(duì)照A值大于0.1，應(yīng)重復(fù)試驗(yàn)；結(jié)果判定：樣品A值臨界值（CUTOFF）者為陰性，樣品A值臨界值者為陽(yáng)性，樣本OD值在0.71.0為灰區(qū)（初試陽(yáng)性反應(yīng)或在灰區(qū)者重新血袋便管剪樣雙孔復(fù)試）。乙型肝炎表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯(lián)合檢測(cè)試劑（金標(biāo)法

9、）嚴(yán)格按照說明書操作。標(biāo)本和試劑條平衡至室溫（18-25）并編號(hào)，加樣量必須在60-80ul之間滴加在加樣處，15分鐘最終觀察并判斷結(jié)果，超過30分鐘后試驗(yàn)結(jié)果無(wú)效。2.4 結(jié)果判斷 觀測(cè)區(qū)僅對(duì)照線（C）位置處出現(xiàn)一條帶，HBsAg、TP均為陰性；在觀測(cè)區(qū)同時(shí)出現(xiàn)三條帶，HBsAg、TP均為陽(yáng)性；在觀測(cè)區(qū)，對(duì)照線（C）及HBsAg檢測(cè)線(T1)位置處各出現(xiàn)一條帶，HBsAg陽(yáng)性、TP為陰性；在觀測(cè)區(qū)，對(duì)照線（C）及TP檢測(cè)線(T2)位置處各出現(xiàn)一條帶，HBsAg,陰性、TP為陽(yáng)性；觀測(cè)區(qū)對(duì)照線（C）處沒有條帶出現(xiàn)或僅有檢測(cè)線（T1、T2）處有條帶，表示此次檢測(cè)無(wú)效，必須換用新的試劑。三 檢測(cè)結(jié)

10、果1.768例樣本中，兩項(xiàng)結(jié)果均為陰性的樣本為607例；HBsAg陽(yáng)性樣本為137例，TP陽(yáng)性的樣本為22例，其中金標(biāo)法檢測(cè)單項(xiàng)HBsAg陽(yáng)性為123例，TP單項(xiàng)陽(yáng)性的為18例，HBsAg和TP均為陽(yáng)性的2例。結(jié)果見表1、表2。表1 兩種方法對(duì)768例樣本檢測(cè)HBsAg和TP的結(jié)果方 法名 稱ELISA法金標(biāo)法符合率(%)HBsAg(+)13912589.93TP(+)242083.33兩項(xiàng)全陰性607607100.02. 768份標(biāo)本中，ELISA法全陰性的結(jié)果金標(biāo)法均為陰性；而ELISA法為陽(yáng)性的結(jié)果金標(biāo)法檢測(cè)結(jié)果有所變化，兩種方法檢測(cè)出不同結(jié)果符合率，見表1。表2 768例樣品金標(biāo)法和E

11、LISA法檢測(cè)HBsAg和TP結(jié)果比較金標(biāo)法ELISA法HBsAgTP陽(yáng)性陰性合計(jì)陽(yáng)性陰性合計(jì)陽(yáng)性125012520020陰性146296434744748合計(jì)13962976824744768 2.由表2可以得出，HBsAg金標(biāo)法和ELISA法比較，敏感度為89.93%，特異度為100%，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析X2=12.07，P0.01，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，也就是說有高度顯著性；TP金標(biāo)法和ELISA比較，敏感度為83.33%，特異度為100%；經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析X2=2.25，P0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表2.表3 金標(biāo)法和ELISA法檢測(cè)HBsAg和TP陽(yáng)性符合率及總符合率比較項(xiàng)目ELISA法金標(biāo)法

12、符合率（%）陽(yáng)性例數(shù)%陽(yáng)性例數(shù)%陽(yáng)性例數(shù)%HBsAg13918.1012516.2889.9398.18TP243.13202.6083.3399.483.ELISA法為陽(yáng)性的各單項(xiàng)結(jié)果中，金標(biāo)法的陽(yáng)性符合率HBsAg為16.28%、TP為2.6%；ELISA法為陰性的各單項(xiàng)結(jié)果中，金標(biāo)法均為陰性，符合率均為100%；兩種方法各單項(xiàng)結(jié)果總符合率HBsAg為98.18%、TP為99.48%，見表3.四、討論兩種方法對(duì)768例樣本檢測(cè)結(jié)果表明：金標(biāo)法敏感性較ELISA法差，存在假陰性結(jié)果。與過去有文獻(xiàn)報(bào)道相似3。通過對(duì)表1、表2的分析可知：金標(biāo)法對(duì)HBsAg和TP檢測(cè)的敏感性較ELISA法差，尤其

13、對(duì)低滴度樣本監(jiān)測(cè)結(jié)果較差，往往檢測(cè)結(jié)果為假陰性；但對(duì)于現(xiàn)代血站來(lái)說，采血前的初篩檢驗(yàn)是至關(guān)重要的，由于采集的血液需要離心、分離、成分制備等各個(gè)環(huán)節(jié)，這些環(huán)節(jié)若陽(yáng)性標(biāo)本越多，對(duì)工作環(huán)境產(chǎn)生污染的可能性越大；另外，對(duì)于采血和檢驗(yàn)人員來(lái)說也可以減少采血和化驗(yàn)過程中的感染機(jī)會(huì)。還有金標(biāo)法具有簡(jiǎn)便、快速、特異性較高、試劑穩(wěn)定，無(wú)需檢測(cè)儀器等特點(diǎn)，對(duì)抗原量過大的樣品未出現(xiàn)“鉤狀效應(yīng)”現(xiàn)象，故一般不出現(xiàn)假陰性；4此外，金標(biāo)法隨著反應(yīng)時(shí)間的延長(zhǎng)陽(yáng)性率有所提高。因此，乙型肝炎表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯(lián)合檢測(cè)試劑用于大量的無(wú)償獻(xiàn)血前的初篩檢測(cè)和流行病學(xué)調(diào)查工作更為合適。參考文獻(xiàn)1 莊嚴(yán)等.膠體金免疫層析法與酶聯(lián)免疫