中期考核匯報(bào)

1、12銀杏外種皮研究現(xiàn)狀n銀杏外種皮是其種實(shí)最外的皮層，即種子硬殼最外面的部分，成熟時呈黃色或黃棕色，柔軟多汁，并有特殊的臭味 。早在上個世紀(jì)八十年代，我國就有人對銀杏外種皮進(jìn)行了研究，近十幾年的研究主要集中在以下三方面：n對銀杏外種皮中化學(xué)成分及其含量的研究n對銀杏外種皮提取物藥理活性的研究n對銀杏外種皮中有效成分的提取分離及純化的研究34銀 杏 萜 內(nèi) 酯 銀杏萜內(nèi)酯是屬于萜類化合物，萜類化合物是一類廣泛存在于自然界的天然產(chǎn)物，凡分子式符合（C5H8）n通式的衍生物統(tǒng)稱為萜類化合物，實(shí)際上它是聚戊二烯類化合物，按照碳原子數(shù)目又可以分為單萜（碳原子數(shù)目：10），倍半萜（碳原子數(shù)目：15）二萜（

2、碳原子數(shù)目：20），二倍半萜（碳原子數(shù)目：25），三萜（碳原子數(shù)目：30），四萜（碳原子數(shù)目：40）多萜（碳原子數(shù)目：7.51033105）。 銀杏萜內(nèi)酯之前只在銀杏葉和根皮中分離到，共有六種（GA,GB,GC,GM,GJ和BB，前五種的化學(xué)結(jié)構(gòu)很相似：都屬于二萜，均具有獨(dú)特的十二碳骨架，嵌有一個叔丁基和六個五元環(huán)，其中有一個四氫呋喃環(huán)和三個內(nèi)酯環(huán)。白果內(nèi)酯屬于倍半萜，有一個碳戊環(huán)和三個內(nèi)酯環(huán)。銀杏萜內(nèi)酯有很強(qiáng)的藥物活性，其作用主要表現(xiàn)在專屬性的抗血小板活化因子（PFD）活性，其中GB的活性最高，已引起國際藥學(xué)界的廣泛關(guān)注，有望成為治療休克、燒傷、過敏性哮喘、中風(fēng)、移植排斥、血液透析等病癥的一

3、類新藥。而BB則具有神經(jīng)保護(hù)和抗水腫作用,有望成為治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病、腦炎、腦水腫等病癥的新藥。 5 銀杏內(nèi)酯（ginkgolide）和白果內(nèi)酯(bilobalide)分子結(jié)構(gòu)示意圖6銀杏外種皮中萜內(nèi)酯n現(xiàn)已分離鑒定的銀杏外種皮中的萜內(nèi)酯只有三種，即銀杏內(nèi)酯A（GA），銀杏內(nèi)酯B（GB）和銀杏內(nèi)酯C（GC）。吳紅菱在測外種皮中內(nèi)酯含量時用使用了白果內(nèi)酯作為標(biāo)準(zhǔn)品，且得出了與白果內(nèi)酯保留值非常相近的色譜峰，他直接把他作為白果內(nèi)酯（BB）來計(jì)算內(nèi)酯的總含量。余碧鈺等在研究銀杏外種皮提取物時也直接用白果內(nèi)酯作為標(biāo)準(zhǔn)品，并得出了與吳紅菱相同的結(jié)果，這說明銀杏外種皮中有可能含有白果內(nèi)酯，但還需進(jìn)一步的研究

4、加以鑒定。7銀杏外種皮中萜內(nèi)酯的提取銀杏內(nèi)酯在銀杏葉和外種皮中含量都很低 ，有的學(xué)者開始對銀杏內(nèi)酯的 人工合成進(jìn)行了研究，1988年Corey等成功的合成了銀杏內(nèi)酯A ，1993年 rimmins等研究了白果內(nèi)酯的全合成途徑并獲得了成功 。但由于銀杏萜內(nèi)酯的分子立體結(jié)構(gòu)復(fù)雜，人工合成途徑的技術(shù)難度很大，因此，仍以天然的植物材料（銀杏葉、外種皮，根皮或種仁）作為提取萜內(nèi)酯化合物的主要來源。 8 有關(guān)銀杏葉中的內(nèi)酯的提取和分離法已有很多 ，且有的方法所得的產(chǎn)物中的萜內(nèi)酯含量已達(dá)到7%，超過了國際上所規(guī)定的6%的標(biāo)準(zhǔn)，可見，有關(guān)銀杏葉中萜內(nèi)酯的提取純化法已很成熟。銀杏外種皮較銀杏葉比起來所含成分復(fù)雜

5、，至今還未有銀杏外種皮萜內(nèi)酯完整的提取和純化方法。9 提取提取對銀杏外種皮中萜內(nèi)酯的提取方法主要采用的是有機(jī)溶劑提取法 。1、提取溶劑的考察：、提取溶劑的考察： 在提取溶劑的選擇時首先考慮的是相似相溶原理，即極性物質(zhì)易溶于極性有機(jī)溶劑中，非極性物質(zhì)易溶于非極性溶劑中。銀杏萜內(nèi)酯從結(jié)構(gòu)上來看都是屬于高度含氧原子的萜類，再加上其獨(dú)特的分子結(jié)構(gòu)，使其表現(xiàn)出較強(qiáng)的分子極性。銀杏內(nèi)酯GA、GB、GC，GM和GJ的結(jié)構(gòu)相似，差別在于羥基的個數(shù)和位置不同，由此產(chǎn)生了分子極性的差異，對于這五種銀杏內(nèi)酯和白果內(nèi)酯的極性認(rèn)識不一，一種認(rèn)為白果內(nèi)酯較銀杏內(nèi)酯少一個五元環(huán)，且有兩個羥基，極性較大，內(nèi)酯GB的極性則較小

6、。而有人則認(rèn)為銀杏內(nèi)酯J和C的極性最強(qiáng)；A，B較強(qiáng)；而白果內(nèi)酯因?qū)儆诒栋胼祁?，分子結(jié)構(gòu)中只有一個戊烷環(huán)和三個內(nèi)酯環(huán)，含有兩個羥基團(tuán)，與銀杏內(nèi)酯相比，白果內(nèi)酯的分子極性較弱。Teris A.則認(rèn)為GB是強(qiáng)極性的，而GA是弱極性的，所以，對于萜內(nèi)酯的極性還需進(jìn)一步的考察研究。 10 用100%的水做提取劑時GC和BB的提取效果不佳，而在里面加入一定量的乙醇時提取效果很好。 吳紅菱17的提取方法為干燥、粉碎的銀杏外種皮至醇-水（丙酮-水）溶劑中提取，在她的報(bào)道中并未有提取條件的限制，即有機(jī)溶劑與水的比例，提取溫度，提取時間，提取次數(shù)等。 樓鳳昌的提取方法：銀杏外種皮干燥、粉碎,稱重,約4kg,以85

7、%工業(yè)乙醇回流提取三次,每次3h，減壓回收溶劑。得銀杏外在種皮粗提物。 112、提取溫度和時間、提取溫度和時間 張立國等考察了銀杏在不同溶劑和溫度下的溶解性，結(jié)果表明：萜內(nèi)酯在70下，溶劑強(qiáng)度在8.50處溶解度最大。 至于提取次數(shù)可按溶劑用量和外種皮用量來調(diào)節(jié)，一般使用的提取料液比在1:41:12（gml）之間，第一次的溶劑用量較后大，提取一般在三次為宜。 但再如果增加提取次數(shù)是否提取效果會顯著增加還需要進(jìn)一步研究。12 3、提取方法的考察、提取方法的考察現(xiàn)使用的有關(guān)銀杏外種皮中有效成分的有機(jī)溶劑提取方法主要有熱提法，索氏提取法， 超聲波提取法。 最近有有一種新的植物成分的提取法：超臨界二氧化

8、碳萃取法(supercriticalfluid extraction SFC），此法是近20年來迅速發(fā)展起來的一門高新分離技術(shù),在銀杏葉提取物中有人作過一些研究，但因其設(shè)備昂貴且對操作人員技要求高，所以在銀杏提取物中并沒有大量推廣使用 。13n 所以綜合考慮，有關(guān)銀杏外種皮的萜內(nèi)酯較好 溶劑提取方法為： 干燥粉碎的銀杏外種皮，25%-60%乙醇-水溶液提取，提取溫度60，提取次數(shù)3-4次，料液比為：第一次為1:12，第二次可為1:8或1:6，然后合并提取液，減壓回收有機(jī)溶劑，得銀杏外種皮粗提液。銀杏外種皮乙醇-水溶液60提取3-4次提取液合并過濾濾 液減壓回收銀杏外種皮粗提液14 純純 化化因

9、為銀杏外種皮中所含的成分很復(fù)雜，在用有機(jī)溶劑做提取液時，其他的很多極性和弱極性的物質(zhì)也被一起溶解在提取液中被提取出來，如黃酮類化合物，烷基酚類、烷基酸類、醇類等等，所以必須對所得的粗提液進(jìn)行純化，純化的步驟一般分步：萃取和柱純化。15 萃取是初步純化。粗提過程中使用的是較低濃度的乙醇溶液，所以外種皮中一些脂溶性物質(zhì)也會溶解在提取溶劑中，其主要就是一些脂類物質(zhì)，所以要先將脂類物質(zhì) 除去。石油醚是不錯的選擇。 對于銀杏葉中的萜內(nèi)酯的精制和純化方法，郁 青 等人做過全面的研究，發(fā)現(xiàn) 乙酸乙酯是銀杏 萜內(nèi)酯的最好的萃取劑之一。1、萃 取16 柱純化現(xiàn)使用的主要是酸性氧化鋁柱，大 孔吸附樹脂和聚酰胺柱。

10、目前只有李新崗25等用氧化鋁柱處理了銀杏葉的乙醇提取液，然后用無水乙醇洗脫，洗脫液濃縮即得產(chǎn)品，方法可將銀杏總內(nèi)酯的含量提高到95%以上，得率為4.2%，但是其白果內(nèi)酯含量很低 。何君采用了酸性氧化鋁純化銀杏萜內(nèi)酯，其中的白果內(nèi)酯損失很小，因?yàn)樗嵝匝趸X對黃酮和雜質(zhì)的吸附好，對內(nèi)酯吸附差，并且對白果內(nèi)酯無損傷，吸附后的流出液即所需要的萜內(nèi)酯。柱 純 化17n大孔吸附柱是按其極性和填料的孔徑大小對所純化的物質(zhì)進(jìn)行選擇性的吸附的方法，用于銀杏萜內(nèi)酯的純化中主要有兩種形式，一種是只吸附黃酮等雜質(zhì)，而不吸附萜內(nèi)酯的樹脂，如DM-130型樹脂和聚酰胺柱都是黃酮良好的吸附劑，聚酰胺柱與黃酮形成氫鍵吸附，在

11、銀杏葉和外種皮提取物中用來除去黃酮類物質(zhì)是很好的選擇。這種柱純化的洗脫液經(jīng)過濃縮即得產(chǎn)品。另一種是吸附萜內(nèi)酯而對其他雜質(zhì)成分吸附較弱的樹脂。韓金玉等作了有關(guān)大孔吸附樹脂對銀杏內(nèi)酯和白果內(nèi)酯吸附性能的研究，結(jié)論是樹脂AB-8對銀杏萜內(nèi)酯具有較大的吸附量，且解吸率大大高于其他樹脂，具有良好的吸附性能。大孔吸附柱大孔吸附柱18銀杏外種皮所含的化學(xué)成分與銀杏葉中有很大的不同，有關(guān)銀杏外種皮提取物的萜內(nèi)酯純化還無人做過研究，是否葉的純化方法適用于外種皮還需進(jìn)一步的研究。而銀杏葉的這種溶劑萃取-柱純化法雖然得出的內(nèi)酯含量很高但經(jīng)過較多的純化步驟萜內(nèi)酯的損耗也很大，所以還應(yīng)該簡化步驟，尋求更為有效的柱填料，并根據(jù)填料選擇毒小，洗脫能力強(qiáng)的洗脫液，取 得 銀杏 萜內(nèi)酯的高得率。 19銀杏外種皮中萜內(nèi)酯的含量考察銀杏外種皮中萜內(nèi)酯的含量考察 在對銀杏葉提取物或是其提取物制劑中的萜內(nèi)酯的含量的測定方法多采用高效液相色譜法（HPLC）。但由于銀杏萜內(nèi)酯的紫外吸收差，且往往有其他物質(zhì)的干擾，目前尚未見有前處理方便，通用，快速的含量測定法。 現(xiàn)已知的銀杏外種皮中的萜內(nèi)酯有三種（GA，GB，GC），吳紅菱17在進(jìn)行銀杏外種皮中萜內(nèi)酯