血清堿性磷酸酶活性測定

1、血清堿性磷酸酶活性測定磷酸苯二鈉法主要內容： 實驗目的實驗目的 實驗原理實驗原理 實驗器材與試劑實驗器材與試劑 實驗操作實驗操作 計算計算 臨床意義臨床意義 注意事項注意事項 酶活力酶活力：也稱酶活性，是表示催化某一特定反應：也稱酶活性，是表示催化某一特定反應的能的能 力?？梢杂迷谝欢l件下所催化的某一特力?？梢杂迷谝欢l件下所催化的某一特定化學速度表示。定化學速度表示。 酶催化反應速度越快，酶活力升高，反之活力愈酶催化反應速度越快，酶活力升高，反之活力愈低。低。 底物減少量或生成物增加量底物減少量或生成物增加量酶促反應速度酶促反應速度= 單位時間單位時間基本概念基本概念掌握酶活力測定的一般方

2、法掌握酶活力測定的一般方法掌握血清中掌握血清中ALPALP活力測定方活力測定方法與臨床意義法與臨床意義如何測定酶活力的大小如何測定酶活力的大小？ 酶活力酶活力：常用單位時間內底物的減少量或產物的生成量來表示堿性磷酸酶堿性磷酸酶（ALP）是一組在是一組在堿性環(huán)境堿性環(huán)境中中水解磷酸酯水解磷酸酯的的酶類。酶類。來源：廣泛分布于人體的骨、腎、肝、腸、血清、膽汁來源：廣泛分布于人體的骨、腎、肝、腸、血清、膽汁等部位，但骨骼、牙齒、腎和肝臟中含量較多。正常人等部位，但骨骼、牙齒、腎和肝臟中含量較多。正常人血清中血清中ALP主要來源于主要來源于肝臟肝臟。是一種能夠將對應底物是一種能夠將對應底物去磷酸化去磷

3、酸化的酶，即通過水解磷酸的酶，即通過水解磷酸單酯將底物分子上的單酯將底物分子上的磷酸基團磷酸基團除去，并生成除去，并生成磷酸根離子磷酸根離子和和自由的羥基自由的羥基，這類底物包括核酸、蛋白、生物堿等。，這類底物包括核酸、蛋白、生物堿等。而該脫去磷酸基團的過程稱為去磷酸化或脫磷酸化。而該脫去磷酸基團的過程稱為去磷酸化或脫磷酸化。堿性磷酸酶在堿性環(huán)境中有最大活力。堿性磷酸酶在堿性環(huán)境中有最大活力。堿性磷酸酶在堿性環(huán)境中作用于磷酸苯二鈉，使之堿性磷酸酶在堿性環(huán)境中作用于磷酸苯二鈉，使之水解生成酚和磷酸。酚在堿性溶液中與水解生成酚和磷酸。酚在堿性溶液中與4-氨基安替氨基安替比林作用，經鐵氰化鉀氧化形成

4、紅色醌類化合物，比林作用，經鐵氰化鉀氧化形成紅色醌類化合物，其顏色深淺與其顏色深淺與ALP活性成正比?；钚猿烧?。磷酸苯二鈉磷酸苯二鈉+H2O 苯酚苯酚+磷酸氫二鈉磷酸氫二鈉苯酚苯酚+4-氨基安替比林氨基安替比林 紅色醌亞胺衍生物紅色醌亞胺衍生物ALPpH=10鐵氰化鉀鐵氰化鉀 器材：器材：5ml移液管，移液管，1ml移液管，移液管，100或或200ul微量可調式移微量可調式移液器，液器，721E分光光度計，分光光度計，1cm比色皿，比色皿，37 恒溫水恒溫水浴浴 試劑：試劑： 10.1mol/L碳酸鹽緩沖液碳酸鹽緩沖液(pH10.0) 無水碳酸鈉無水碳酸鈉6.36g，碳酸氫鈉，碳酸氫鈉3.3

5、6g，4-氨基安替比林氨基安替比林1.5g，溶于，溶于800mL蒸餾水中，定容蒸餾水中，定容至至1L。置棕色瓶中保存。置棕色瓶中保存。 220mmol/L磷酸苯二鈉溶液磷酸苯二鈉溶液 先將先將500ml蒸餾水煮蒸餾水煮沸，迅速加入沸，迅速加入磷酸苯二鈉磷酸苯二鈉2.18g(磷酸苯二鈉如含磷酸苯二鈉如含2分分子結晶水，則應稱取子結晶水，則應稱取2.54g) ，冷卻后加氯仿，冷卻后加氯仿2ml防腐，防腐，在在4冰箱保存。（用剩的溶液不應再倒回瓶中）冰箱保存。（用剩的溶液不應再倒回瓶中） 3顯色液（鐵氰化鉀的硼酸溶液）顯色液（鐵氰化鉀的硼酸溶液） 稱取鐵氰化鉀稱取鐵氰化鉀2.5g，硼酸，硼酸17g，

6、各自溶于蒸餾水，各自溶于蒸餾水400ml中，兩液混中，兩液混合后，加蒸餾水至合后，加蒸餾水至1L，置棕色瓶中避光保存，置棕色瓶中避光保存(如出現如出現藍綠色即棄去藍綠色即棄去)。 4酚標準工作液（酚標準工作液（0.05mg/ml） 購買合格的二級標購買合格的二級標準品。準品。ALP 活力活力=（A測定測定A對照對照）（A標準標準A空白空白）X0.05X 100（kings單位）單位） 酚標準液開后不能久置。酚標準液開后不能久置。 底物液不能含有酚，若含酚則顯底物液不能含有酚，若含酚則顯紅色紅色，說明，說明磷酸苯二鈉已分解，不宜使用。磷酸苯二鈉已分解，不宜使用。 加入鐵氰化鉀后必須加入鐵氰化鉀后必須迅速混勻迅速混勻(為了改變?yōu)榱烁淖働H來終止酶促反應），否則有影響，偏大。來終止酶促反應），否則有影響，偏大。 鐵氰化鉀溶液中加入硼酸有穩(wěn)定最后所顯色鐵氰化鉀溶液中加入硼酸有穩(wěn)定最后所顯色的作用。此液應避光保存，如出現的作用。此液應避光保存，如出現藍綠色藍綠色即即作廢作廢。1. 本次實驗是用的什么方法？終止劑是什么？為什么加入鐵氰化本次實驗是用的什么方法？終止劑是什么？為什么加入鐵氰化鉀硼酸液