高中生物(人教版)菊花的組織培養(yǎng)課件課件

1、植物組織培養(yǎng)技術(shù)Plant Tissue Culture一、一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康?二、二、相關(guān)知識(shí)相關(guān)知識(shí)三、三、實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理四、四、試劑和器材試劑和器材五、五、操作步驟操作步驟六、六、思考題思考題目目 錄錄2022-3-203一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆罩参锝M織培養(yǎng)相關(guān)理論知識(shí)掌握植物組織培養(yǎng)相關(guān)理論知識(shí)掌握植物組織培養(yǎng)的操作方法掌握植物組織培養(yǎng)的操作方法了解不同激素及其比例對(duì)愈傷組織再分了解不同激素及其比例對(duì)愈傷組織再分化的作用化的作用2022-3-204二、相關(guān)知識(shí)二、相關(guān)知識(shí) 離體（離體（in vitro)條件下利用人工培養(yǎng)條條件下利用人工培養(yǎng)條件在無(wú)菌情況下培養(yǎng)、生長(zhǎng)、發(fā)育再生出

2、完件在無(wú)菌情況下培養(yǎng)、生長(zhǎng)、發(fā)育再生出完整植株的過(guò)程。整植株的過(guò)程。 1958年，英國(guó)科學(xué)家年，英國(guó)科學(xué)家Steward 等用胡蘿等用胡蘿卜根的愈傷組織細(xì)胞進(jìn)行懸浮培養(yǎng)，成功誘卜根的愈傷組織細(xì)胞進(jìn)行懸浮培養(yǎng)，成功誘導(dǎo)出胚狀體并分化為完整的小植株，不但使導(dǎo)出胚狀體并分化為完整的小植株，不但使細(xì)胞全能性理論得到證實(shí)，而且為組織培養(yǎng)細(xì)胞全能性理論得到證實(shí)，而且為組織培養(yǎng)的技術(shù)程序奠定了基礎(chǔ)。的技術(shù)程序奠定了基礎(chǔ)。 2022-3-205應(yīng)用領(lǐng)域應(yīng)用領(lǐng)域 1、快速繁殖、快速繁殖 運(yùn)用組織培養(yǎng)的途徑，一個(gè)單株運(yùn)用組織培養(yǎng)的途徑，一個(gè)單株一年可以繁殖幾萬(wàn)到幾百萬(wàn)個(gè)植株。例如一株蘭花一年可以繁殖幾萬(wàn)到幾百萬(wàn)個(gè)

3、植株。例如一株蘭花一年繁殖到一年繁殖到400萬(wàn)株。萬(wàn)株。2、種苗脫毒、種苗脫毒 針對(duì)病毒對(duì)農(nóng)作物造成的嚴(yán)重危針對(duì)病毒對(duì)農(nóng)作物造成的嚴(yán)重危害，通過(guò)組織培養(yǎng)可以有效地培育出大量的無(wú)病毒害，通過(guò)組織培養(yǎng)可以有效地培育出大量的無(wú)病毒種苗。種苗。3、遠(yuǎn)緣雜交、遠(yuǎn)緣雜交 利用組織培養(yǎng)可以使難度很大的利用組織培養(yǎng)可以使難度很大的遠(yuǎn)緣雜交取得成功，從而育成一些罕見(jiàn)的新物種。遠(yuǎn)緣雜交取得成功，從而育成一些罕見(jiàn)的新物種。二、相關(guān)知識(shí)二、相關(guān)知識(shí)2022-3-206應(yīng)用領(lǐng)域應(yīng)用領(lǐng)域 4、突變育種、突變育種 采用組織培養(yǎng)可以直接誘變和篩采用組織培養(yǎng)可以直接誘變和篩選出具抗病、抗鹽、高賴氨酸、高蛋白等優(yōu)良性狀選出具抗病

4、、抗鹽、高賴氨酸、高蛋白等優(yōu)良性狀的品種。的品種。5、基因工程、基因工程 基因工程主要研究基因工程主要研究DNA的轉(zhuǎn)導(dǎo)，的轉(zhuǎn)導(dǎo)，而基因轉(zhuǎn)導(dǎo)后必須通過(guò)組織培養(yǎng)途徑才能實(shí)現(xiàn)植株而基因轉(zhuǎn)導(dǎo)后必須通過(guò)組織培養(yǎng)途徑才能實(shí)現(xiàn)植株再生。再生。6、生物制品、生物制品 有些極其昂貴的生物制品，如抗有些極其昂貴的生物制品，如抗癌首選藥物癌首選藥物-紫杉醇等，可通過(guò)組織培養(yǎng)方式生產(chǎn)。紫杉醇等，可通過(guò)組織培養(yǎng)方式生產(chǎn)。二、相關(guān)知識(shí)二、相關(guān)知識(shí)2022-3-207植物組織培養(yǎng)的分類植物組織培養(yǎng)的分類 廣義的組織培養(yǎng)依廣義的組織培養(yǎng)依外植體外植體不同，可分為：不同，可分為： 1) 器官培養(yǎng)（器官培養(yǎng)（organ cult

5、ure） 2)莖尖分生組織培養(yǎng)莖尖分生組織培養(yǎng)(shoot tip culture, apical meristem culture) 3)愈傷組織愈傷組織培養(yǎng)培養(yǎng)(calluse cultrue) 4)細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)(cell culture) 5)原生質(zhì)體培養(yǎng)原生質(zhì)體培養(yǎng)(protoplast culture)二、相關(guān)知識(shí)二、相關(guān)知識(shí)2022-3-208 外植體外植體(explant)：由活體（：由活體（in vivo)植植物體上提取下來(lái)的，接種在培養(yǎng)基上的物體上提取下來(lái)的，接種在培養(yǎng)基上的無(wú)菌細(xì)胞、組織、器官等。無(wú)菌細(xì)胞、組織、器官等。 愈傷組織愈傷組織(callus)：在人工培養(yǎng)基上

6、由外：在人工培養(yǎng)基上由外植體上形成的一團(tuán)無(wú)序生長(zhǎng)狀態(tài)的薄壁植體上形成的一團(tuán)無(wú)序生長(zhǎng)狀態(tài)的薄壁細(xì)胞。細(xì)胞。二、相關(guān)知識(shí)二、相關(guān)知識(shí)2022-3-209二、相關(guān)知識(shí)二、相關(guān)知識(shí)2022-3-2010二、相關(guān)知識(shí)二、相關(guān)知識(shí)2022-3-2011二、相關(guān)知識(shí)二、相關(guān)知識(shí)2022-3-2012二、相關(guān)知識(shí)二、相關(guān)知識(shí)2022-3-2013二、相關(guān)知識(shí)二、相關(guān)知識(shí)二、相關(guān)知識(shí)二、相關(guān)知識(shí)2022-3-2015植物組織培養(yǎng)特點(diǎn)植物組織培養(yǎng)特點(diǎn) 培養(yǎng)條件可以人為控制培養(yǎng)條件可以人為控制 生長(zhǎng)周期短，繁殖率高生長(zhǎng)周期短，繁殖率高 管理方便，利于工廠化生產(chǎn)和自動(dòng)化管理方便，利于工廠化生產(chǎn)和自動(dòng)化控制控制二、相關(guān)

7、知識(shí)二、相關(guān)知識(shí)2022-3-2016植物組織培養(yǎng)營(yíng)養(yǎng)條件植物組織培養(yǎng)營(yíng)養(yǎng)條件-培養(yǎng)基培養(yǎng)基(Culture Medium) 培養(yǎng)基是植物組織培養(yǎng)的重要基質(zhì)。培養(yǎng)基是植物組織培養(yǎng)的重要基質(zhì)。 培養(yǎng)基的成分主要可以分水、無(wú)機(jī)培養(yǎng)基的成分主要可以分水、無(wú)機(jī)鹽、有機(jī)物、天然復(fù)合物、培養(yǎng)體的支鹽、有機(jī)物、天然復(fù)合物、培養(yǎng)體的支持材料等五大類。持材料等五大類。二、相關(guān)知識(shí)二、相關(guān)知識(shí)2022-3-2017 國(guó)際上流行的培養(yǎng)基有幾十種，常國(guó)際上流行的培養(yǎng)基有幾十種，常用的培養(yǎng)基有：用的培養(yǎng)基有： MSMS培養(yǎng)基培養(yǎng)基、B5培養(yǎng)基培養(yǎng)基、White培養(yǎng)基培養(yǎng)基、N6培養(yǎng)基培養(yǎng)基、KM-8PKM-8P培養(yǎng)基培

8、養(yǎng)基二、相關(guān)知識(shí)二、相關(guān)知識(shí)2022-3-2018常用培養(yǎng)基簡(jiǎn)介常用培養(yǎng)基簡(jiǎn)介-MSMS培養(yǎng)基培養(yǎng)基 19621962年由年由MurashigeMurashige和和SkoogSkoog為培養(yǎng)煙草細(xì)胞而為培養(yǎng)煙草細(xì)胞而設(shè)計(jì)的。特點(diǎn)是無(wú)機(jī)鹽和離子濃度較高，為較穩(wěn)定設(shè)計(jì)的。特點(diǎn)是無(wú)機(jī)鹽和離子濃度較高，為較穩(wěn)定的平衡溶液。其養(yǎng)分的數(shù)量和比例較合適，可滿足的平衡溶液。其養(yǎng)分的數(shù)量和比例較合適，可滿足植物的營(yíng)養(yǎng)和生理需要。它的硝酸鹽含量較其他培植物的營(yíng)養(yǎng)和生理需要。它的硝酸鹽含量較其他培養(yǎng)基為高，廣泛地用于植物的器官、花藥、細(xì)胞和養(yǎng)基為高，廣泛地用于植物的器官、花藥、細(xì)胞和原生質(zhì)體培養(yǎng)，效果良好。有些培

9、養(yǎng)基是由它演變?cè)|(zhì)體培養(yǎng)，效果良好。有些培養(yǎng)基是由它演變而來(lái)的。而來(lái)的。二、相關(guān)知識(shí)二、相關(guān)知識(shí)2022-3-2019常用培養(yǎng)基簡(jiǎn)介常用培養(yǎng)基簡(jiǎn)介-B B5 5培養(yǎng)基培養(yǎng)基 是是19681968年由年由GalmborgGalmborg等為培養(yǎng)大豆根細(xì)胞而設(shè)等為培養(yǎng)大豆根細(xì)胞而設(shè)計(jì)的。其主要特點(diǎn)是含有較低的銨，這可能對(duì)不少計(jì)的。其主要特點(diǎn)是含有較低的銨，這可能對(duì)不少培養(yǎng)物的生長(zhǎng)有抑制作用。從實(shí)踐得知有些植物在培養(yǎng)物的生長(zhǎng)有抑制作用。從實(shí)踐得知有些植物在B5B5培養(yǎng)基上生長(zhǎng)更適宜，如雙子葉植物特別是木本培養(yǎng)基上生長(zhǎng)更適宜，如雙子葉植物特別是木本植物。植物。二、相關(guān)知識(shí)二、相關(guān)知識(shí)2022-3-2

10、020常用培養(yǎng)基簡(jiǎn)介常用培養(yǎng)基簡(jiǎn)介-WhiteWhite培養(yǎng)基培養(yǎng)基 是是19431943年由年由WhiteWhite為培養(yǎng)番茄根尖而設(shè)計(jì)的。為培養(yǎng)番茄根尖而設(shè)計(jì)的。19631963年又作了改良，稱作年又作了改良，稱作WhiteWhite改良培養(yǎng)基，提高了改良培養(yǎng)基，提高了MgSO4MgSO4的濃度和增加了硼素。其特點(diǎn)是無(wú)機(jī)機(jī)鹽數(shù)量的濃度和增加了硼素。其特點(diǎn)是無(wú)機(jī)機(jī)鹽數(shù)量較低，適于生根培養(yǎng)。較低，適于生根培養(yǎng)。二、相關(guān)知識(shí)二、相關(guān)知識(shí)2022-3-2021常用培養(yǎng)基簡(jiǎn)介常用培養(yǎng)基簡(jiǎn)介N N6 6培養(yǎng)基培養(yǎng)基 是是19741974年朱至清等為水稻等禾谷類作物花藥培年朱至清等為水稻等禾谷類作物花藥

11、培養(yǎng)而設(shè)計(jì)的。其特點(diǎn)是成分較簡(jiǎn)單，養(yǎng)而設(shè)計(jì)的。其特點(diǎn)是成分較簡(jiǎn)單，KNO3KNO3和（和（NH4NH4）2SO42SO4含量高。在國(guó)內(nèi)已廣泛應(yīng)用于小麥、水稻及其含量高。在國(guó)內(nèi)已廣泛應(yīng)用于小麥、水稻及其他植物的花藥培養(yǎng)和其他組織培養(yǎng)。他植物的花藥培養(yǎng)和其他組織培養(yǎng)。二、相關(guān)知識(shí)二、相關(guān)知識(shí)2022-3-2022常用培養(yǎng)基簡(jiǎn)介常用培養(yǎng)基簡(jiǎn)介KM-8P培養(yǎng)基培養(yǎng)基 19621962年由年由MurashigeMurashige和和SkoogSkoog為培養(yǎng)煙草細(xì)胞而為培養(yǎng)煙草細(xì)胞而設(shè)計(jì)的。特點(diǎn)是無(wú)機(jī)鹽和離子濃度較高，為較穩(wěn)定設(shè)計(jì)的。特點(diǎn)是無(wú)機(jī)鹽和離子濃度較高，為較穩(wěn)定的平衡溶液。其養(yǎng)分的數(shù)量和比例較合

12、適，可滿足的平衡溶液。其養(yǎng)分的數(shù)量和比例較合適，可滿足植物的營(yíng)養(yǎng)和生理需要。它的硝酸鹽含量較其他培植物的營(yíng)養(yǎng)和生理需要。它的硝酸鹽含量較其他培養(yǎng)基為高，廣泛地用于植物的器官、花藥、細(xì)胞和養(yǎng)基為高，廣泛地用于植物的器官、花藥、細(xì)胞和原生質(zhì)體培養(yǎng)，效果良好。有些培養(yǎng)基是由它演變?cè)|(zhì)體培養(yǎng)，效果良好。有些培養(yǎng)基是由它演變而來(lái)的。而來(lái)的。二、相關(guān)知識(shí)二、相關(guān)知識(shí)2022-3-2023不同營(yíng)養(yǎng)條件對(duì)植物組織培養(yǎng)的影響不同營(yíng)養(yǎng)條件對(duì)植物組織培養(yǎng)的影響 Growth medium is optimised for regeneration of plantletsNo sucrose (0%)Sucros

13、e reduced to 1%Sucrose increased to 5%T h e e x p l a n t i s completely covered with green shoots, and roots are developing on the lower surface Very few shoots have developed on the explant. No roots and no callus.Shoots developed on e d g e s o f u p p e r surface, and some root development has o

14、ccuredShoots have developed over the surface of the explant, along with roots from the lower surface. The result is comparable with the control medium二、相關(guān)知識(shí)二、相關(guān)知識(shí)No BAPBAP reduced to 0.1 mg. l-1 No NAAPoor shoot development and no roots. Extensive callus generationPoor shoot development and no roots

15、NAA reduced to 0.1 mg. l-1More balanced development of roots and shoots. However, undifferentiated callus is developing at the edges of the explantProfuse development of roots and a reduced number of shoots. Undifferentiated callus is developing at the edges of the explant二、相關(guān)知識(shí)二、相關(guān)知識(shí)NAA increased t

16、o 5.0 mg. l-1Profuse development of roots over the explant upper and lower surface, and few shoots. Some callusNo MS saltsNo sign of regeneration from explant at all. MS salts reduced to 0.47 g. l-1 Some root growth but reduced development of shootsMS salts increased to 9.52 g. l-1 Shoots developed

17、on upper surface of explant. No roots or callus.二、相關(guān)知識(shí)二、相關(guān)知識(shí)2022-3-2026植物細(xì)胞的全能性植物細(xì)胞的全能性 植物細(xì)胞具有該植物體全部遺傳的可能性，在一植物細(xì)胞具有該植物體全部遺傳的可能性，在一定條件下具有發(fā)育成完整植物體的潛在能力。定條件下具有發(fā)育成完整植物體的潛在能力。 差異差異:(1) 受精卵的全能性最高受精卵的全能性最高 (2) 受精卵分化后的細(xì)胞中，體細(xì)胞的全能性比受精卵分化后的細(xì)胞中，體細(xì)胞的全能性比生殖細(xì)胞的低。生殖細(xì)胞的低。 潛在全能性的原因潛在全能性的原因：基因表達(dá)的選擇性基因表達(dá)的選擇性 科學(xué)研究表明，處于離

18、體狀態(tài)的植物活細(xì)胞，在科學(xué)研究表明，處于離體狀態(tài)的植物活細(xì)胞，在一定的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、激素和其他外界條件的作用下，就一定的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、激素和其他外界條件的作用下，就可能表現(xiàn)出全能性，發(fā)育成完整的植株。人工條件下可能表現(xiàn)出全能性，發(fā)育成完整的植株。人工條件下實(shí)現(xiàn)的這一過(guò)程，就是植物組織培養(yǎng)。實(shí)現(xiàn)的這一過(guò)程，就是植物組織培養(yǎng)。三、實(shí)驗(yàn)原理2022-3-2027植物細(xì)胞全能性的表達(dá)植物細(xì)胞全能性的表達(dá) 脫分化（脫分化（dedifferentiation)：將來(lái)自已分化組：將來(lái)自已分化組織的已停止分裂的細(xì)胞從植物體部分的抑制性織的已停止分裂的細(xì)胞從植物體部分的抑制性影響下解脫出來(lái)，恢復(fù)細(xì)胞的分裂活性。影響下解

19、脫出來(lái)，恢復(fù)細(xì)胞的分裂活性。 再分化（再分化（redifferentiation):經(jīng)脫分化的組織經(jīng)脫分化的組織或細(xì)胞在一定的培養(yǎng)條件下可有轉(zhuǎn)變?yōu)楦鞣N不或細(xì)胞在一定的培養(yǎng)條件下可有轉(zhuǎn)變?yōu)楦鞣N不同細(xì)胞類型的能力。同細(xì)胞類型的能力。三、實(shí)驗(yàn)原理2022-3-2028四、試劑和器材1、材料、材料 新鮮胡蘿卜莖新鮮胡蘿卜莖2、試劑、試劑 MS培養(yǎng)基培養(yǎng)基 10%亞硫酸溶液亞硫酸溶液2022-3-2029MS培養(yǎng)基配制方法培養(yǎng)基配制方法四、試劑和器材2022-3-2030四、試劑和器材3、儀器、儀器高壓滅菌鍋、超凈工作臺(tái)、烘箱、培養(yǎng)箱高壓滅菌鍋、超凈工作臺(tái)、烘箱、培養(yǎng)箱4、玻璃器皿、玻璃器皿試劑瓶試劑瓶

20、(50、100、1000ml)、三角瓶、三角瓶(100ml)、刻度吸管刻度吸管(0.5、1、5、10ml)、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)皿5、用具、用具鑷子、解剖刀、接種針、記號(hào)筆、封口膜鑷子、解剖刀、接種針、記號(hào)筆、封口膜2022-3-2031離體的植物離體的植物器官、組織、器官、組織、細(xì)胞細(xì)胞脫分化脫分化愈愈傷傷組組織織再分化再分化根根芽芽植植物物體體五、操作步驟切開(kāi)胡蘿卜，在圓圈處取一塊組織P-木質(zhì)部、C-形成層、X-韌皮部五、操作步驟形成層開(kāi)始形成愈傷組織C1-愈傷組織、C2-形成層五、操作步驟3-4周后完全形成愈傷組織狀態(tài)（脫分化）組織塊失去色素五、操作步驟把脫分化后的愈傷組織轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)基上五、操作

21、步驟兩周左右開(kāi)始再分化，長(zhǎng)出幼苗五、操作步驟將幼苗移植到外部條件下培養(yǎng)（順化）五、操作步驟順化一個(gè)月后的胡蘿卜植株五、操作步驟培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基配制(I)母液配制：母液配制： 按照按照MS培養(yǎng)基成分表培養(yǎng)基成分表, 配制分別配制培養(yǎng)基的配制分別配制培養(yǎng)基的母液。母液。1、大量元素母液大量元素母液(10倍液倍液) 分別稱取分別稱取10倍用量的各種大量無(wú)機(jī)鹽，依次溶倍用量的各種大量無(wú)機(jī)鹽，依次溶解于大約解于大約800ml熱的（熱的（60-80）蒸餾水中。（一）蒸餾水中。（一種成分完全溶解后再加入下一種，最后加水，定容種成分完全溶解后再加入下一種，最后加水，定容至至1000ml后裝入試劑瓶中，冰箱內(nèi)貯

22、存?zhèn)溆茫?。后裝入試劑瓶中，冰箱內(nèi)貯存?zhèn)溆茫?。五、操作步驟2、微量元素母液、微量元素母液(100倍液倍液) 分別稱取分別稱取100倍用量的微量無(wú)機(jī)鹽，依次溶解倍用量的微量無(wú)機(jī)鹽，依次溶解于于800ml重蒸水中，加水定溶到重蒸水中，加水定溶到1000ml。 3、鐵鹽母液（鐵鹽母液（100倍液）倍液） 稱取稱取100倍用量的倍用量的Na2-EDTA(乙二胺四乙酸鈉乙二胺四乙酸鈉)和和FeSO47H2O，溶于，溶于800ml重蒸水中，最后定容重蒸水中，最后定容到到1000ml。 五、操作步驟培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基配制(I )母液配制母液配制：4、有機(jī)物質(zhì)母液、有機(jī)物質(zhì)母液(100倍數(shù)倍數(shù)) 分別稱取分別稱取

23、50倍用量的各種有機(jī)物質(zhì)，依次溶解倍用量的各種有機(jī)物質(zhì)，依次溶解于于400ml重蒸水中，定容至重蒸水中，定容至1000ml，裝入棕色試，裝入棕色試劑瓶中，貯存冰箱備用。劑瓶中，貯存冰箱備用。 除上述四種母液外，培養(yǎng)基中經(jīng)常附加的各種除上述四種母液外，培養(yǎng)基中經(jīng)常附加的各種生物素和細(xì)胞分裂素也要配成母液貯存，臨用時(shí)按生物素和細(xì)胞分裂素也要配成母液貯存，臨用時(shí)按濃度定量吸取加入。濃度定量吸取加入。五、操作步驟培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基配制(I)母液配制母液配制：5、生長(zhǎng)素、生長(zhǎng)素 如如2,4-D、IAA、NAA等。準(zhǔn)確稱取等。準(zhǔn)確稱取20mg，先，先用用2ml95%乙醇溶解，然后加水，定容至乙醇溶解，然后加

24、水，定容至20ml，濃，濃度為度為1mg/ml，再放置冰箱內(nèi)貯存?zhèn)溆谩?，再放置冰箱?nèi)貯存?zhèn)溆谩?6、細(xì)胞分裂素、細(xì)胞分裂素 如激動(dòng)素如激動(dòng)素(Kt)、6-芐基嘌呤芐基嘌呤(6-BA)。準(zhǔn)確稱取。準(zhǔn)確稱取20mg，先用，先用2ml的的1mol/ml HCL或或NaOH溶解，溶解，然后加水，定容至然后加水，定容至20ml，濃度為，濃度為1mg/ml，再放置，再放置冰箱內(nèi)貯存?zhèn)溆谩１鋬?nèi)貯存?zhèn)溆?。五、操作步驟培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基配制(I)母液配制母液配制： 取取1000ml燒杯一只，加大量元素?zé)恢?，加大量元?0倍母液倍母液100ml，微量元素，微量元素100倍母液倍母液10ml，鐵鹽，鐵鹽100倍

25、母倍母液液10ml,有機(jī)物質(zhì)有機(jī)物質(zhì)100倍母液倍母液10ml。此外。此外,根據(jù)培養(yǎng)根據(jù)培養(yǎng)材料和實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪€要附加一定量的生長(zhǎng)素材料和實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪€要附加一定量的生長(zhǎng)素,細(xì)胞分細(xì)胞分裂素及蔗糖等裂素及蔗糖等,然后加水至然后加水至1000ml,待蔗糖充分溶解待蔗糖充分溶解后用后用1mol/L 的的NaOH或或HCl調(diào)酸堿度為調(diào)酸堿度為pH5.8,最后最后加入瓊脂粉加入瓊脂粉6.5g,如用瓊脂條如用瓊脂條,則要加則要加8g。五、操作步驟培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基配制(II)配制與分裝：配制與分裝： 將盛有培養(yǎng)基的燒杯在電磁爐上，煮至瓊脂完將盛有培養(yǎng)基的燒杯在電磁爐上，煮至瓊脂完全融化，補(bǔ)加蒸餾水至全融化，補(bǔ)加蒸

26、餾水至1000ml。 將配制好的培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)用三角瓶中，每將配制好的培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)用三角瓶中，每只只100ml三角瓶約裝三角瓶約裝40ml培養(yǎng)基。培養(yǎng)基。 分裝時(shí)要避免把培養(yǎng)基倒在瓶口上，否則培養(yǎng)分裝時(shí)要避免把培養(yǎng)基倒在瓶口上，否則培養(yǎng)時(shí)容易引起雜菌污染。時(shí)容易引起雜菌污染。 五、操作步驟培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基配制(II)配制與分裝：配制與分裝：1、把裝好的培養(yǎng)基的三角瓶放入高壓滅菌鍋中，、把裝好的培養(yǎng)基的三角瓶放入高壓滅菌鍋中，蓋好鍋蓋。蓋好鍋蓋。2、設(shè)置滅菌參數(shù)為、設(shè)置滅菌參數(shù)為121，20min，開(kāi)始滅菌。，開(kāi)始滅菌。 五、操作步驟培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基配制(III)滅菌：滅菌：1、取新鮮胡蘿卜莖，用去離子水洗凈。、取新鮮胡蘿卜莖，用去離子水洗凈。2、在胡蘿卜莖上切一塊含有形成層的組織，放入、在胡蘿卜莖上切一塊含有形成層的組織，放入磨口三角瓶中，