宮頸癌前病變中與p16INK4A蛋白表達的意義

1、宮頸癌中p16INK4A蛋白表達的意義楊勝利陜西省渭南市婦幼醫(yī)院【摘要】目的檢測宮頸癌組織中p16NK4A蛋白表達狀況, 探討p16NK4A蛋白與宮頸癌發(fā)生發(fā)展以及臨床病理指標(biāo)的關(guān)系。方法；采用免疫組化法檢測宮頸鱗癌組織中40例, 宮頸上皮內(nèi)瘤病變（CIN）30例，宮頸癌旁正常宮頸組織25例中的p16NK4A表達。結(jié)果p16INK4A在宮頸上皮內(nèi)瘤病變中陽性率86.6%，宮頸鱗癌組織中陽性率均呈100%表達。正常宮頸組織中為陰性。p16NK4A陽性反應(yīng)為細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)呈棕黃色。結(jié)論；p16基因在宮頸癌組織中缺失和突變導(dǎo)致其表達降低,使p16抑癌功能喪失, 特別是在DNA沒有被修復(fù)前過早進入期,

2、造成宮頸上皮細(xì)胞異常增殖和分化失控,使宮頸上皮內(nèi)瘤病變細(xì)胞陽性逐漸增多。導(dǎo)致p16INK4A在子宮頸癌上皮組織全層表達。所以p16INK4A 作為一種免疫組織化學(xué)標(biāo)志物，應(yīng)用于宮頸癌及其上皮內(nèi)瘤病變（CIN）的診斷是很有應(yīng)用前景的?！娟P(guān)鍵詞】宮頸鱗癌；p16NK4A蛋白；免疫組化宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤。嚴(yán)重威脅著婦女的健康和生命，尤其是年輕婦女的宮頸癌的患病率逐年上升的趨勢。許多研究表明1、2, 認(rèn)為宮頸癌變與高危型人類乳頭瘤病毒的持續(xù)感染密切相關(guān)。p16NK4A基因產(chǎn)物是細(xì)胞周期素依賴性激酶抑制物,參與了HPV感染引起的宮頸病變持續(xù)性發(fā)展。通過免疫組化法p16NK4A蛋白在宮頸癌

3、及其宮頸癌旁正常宮頸組織的表達,以探討它們與宮頸癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。材料與方法1 材料:收集本院及渭南市中心醫(yī)院2005年1月2008年12月的宮頸標(biāo)本，宮頸鱗癌40例, 宮頸上皮內(nèi)瘤（CIN）30例，宮頸癌旁正常宮頸組織25例, 病理分期按WHO(2003)女性生殖系統(tǒng)腫瘤分類標(biāo)準(zhǔn)進行?；颊吣挲g在2567歲, 中位年齡為41歲。2 方法: 免疫組化染色采用常規(guī)枸櫞酸緩沖液-微波抗原修復(fù)-SP法，p16NK4A鼠抗人單克隆抗體為美國Santa Cruz公司產(chǎn)品，購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司,實驗操作嚴(yán)格按照試劑說明書進行。3 結(jié)果判定: p16NK4A以細(xì)胞核和(或)細(xì)胞漿中出現(xiàn)棕黃色顆粒為

4、陽性細(xì)胞。以每個高倍視野下陽性染色的癌細(xì)胞數(shù)<5%為陰性(-),6%25%為弱陽性(+),26%50%為明顯陽性(+),>50%為強陽性(+ )。4統(tǒng)計學(xué)分析 用SPSS1310軟件包分析數(shù)據(jù),用V2檢驗。結(jié)果表1 p16NK4A在正常宮頸組織、宮頸上皮內(nèi)瘤變、宮頸鱗癌組織中表達 表 達 程 度 病變類型 總例數(shù)-陽性率- + + + (%)正常宮頸組織 25 25 0 0 0 0宮頸上皮內(nèi)瘤變 30 4 4 8 14 86.6宮頸鱗癌組織 40 0 2 9 29 1003討論p16基因定位于人染色體9p21區(qū)，所編碼的p16蛋白有132個氨基酸殘基組成，分子量為13.9kDa。其

5、產(chǎn)物p16INK4A蛋白可與cycinD1競爭性結(jié)合細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4（CDK4），特異性地抑制CDK4活性, 當(dāng)p16INK4A基因發(fā)生突變時,致使細(xì)胞過度增殖,特別是在DNA沒有被修復(fù)前過早進入期。造成宮頸上皮細(xì)胞異常增殖和分化失控,在宮頸癌前病變組織中均存在p16INK4A蛋白異常表達。其失活機制以純合子缺失或異常甲基化為主。 宮頸癌的發(fā)生與HPV感染密切相關(guān)2,3 ,p16INK4A與pRb之間存在負(fù)反饋調(diào)節(jié),即pRb限制p16INK4A產(chǎn)物在細(xì)胞內(nèi)濃縮,而HPV E7蛋白使pRb失活,使其對p16INK4A的負(fù)反饋調(diào)節(jié)作用喪失,從而,導(dǎo)致p16INK4A在宮頸癌前病變和宮頸癌中

6、過度表達。本實驗中, p16INK4A在宮頸上皮內(nèi)瘤中陽性率86.6%，宮頸鱗癌、原位癌組織中陽性率均呈100%表達。正常組織(細(xì)胞)中無陽性表達,p16的表達升高與HPV的感染有關(guān)。除宮頸癌外,在與HPV感染有關(guān)的其他部位的腫瘤中,同樣存在p16的高表達4-5,所以推測腫瘤細(xì)胞中p16的高表達可能與HPV的感染有關(guān)。研究結(jié)果表明；p16INK4A表達的強度越高,提示在宮頸病變中, HPV16、18感染與p16INK4A的過度表達呈正相關(guān)關(guān)系。p16INK4A在宮頸上皮內(nèi)瘤病變、宮頸癌的陽性表達表明; p16基因在宮頸癌組織中缺失和突變導(dǎo)致其表達降低,使p16抑癌功能喪失, 特別是在DNA沒有

7、被修復(fù)前過早進入期,造成宮頸上皮細(xì)胞異常增殖和分化失控, 最終與其他致癌因素一起導(dǎo)致宮頸癌的發(fā)生。使宮頸上皮內(nèi)瘤病變細(xì)胞陽性逐漸增多。 因此p16INK4A在子宮頸上皮組織全層表達。所以p16INK4A 作為一種生物標(biāo)志物應(yīng)用于宮頸癌及其癌前病變的篩查和診斷是很有應(yīng)用前景的。參考文獻1 Kalof A N, Cooper K. p16INK4A immunoexpression: surrogate marker of high risk HPV and high grade cervical intraepithelial aphasiaJ.AdvAnatPathol,2006,13(4):

8、190-194.2 Dehn D，Torkko K C, Shroyer K. Human pap illomavirus testing and molecular markers of cervical dysphasia and carcinoma J.Cancer,2007,111(1):1-14. 3Paula Andrea Gabrielli Fregones,i Debora Barreto Teresa, Rober ta Aparecida D uarte, et al. p16INK4Aimmunohistochemical overexpression in premal

9、ignantandmalignantoral lesions infectedwith humanpapillomavirus J.Histochem Cytochem, 2003, 51: 1291-7. 4Lang JC, Borchers J, Danahey D,et al.Mutational status of overex pressed p16 in head and neck cancer: evidence forgerm linemutation ofp16 /p14ARFJ. Int JOnco,l 2002, 21(2): 401-8. 5TATIANA A,DAR

10、AI A,LAR ISA E,et al.Up-regulation of ex2p ression and lack of 5CpG island hypermethylation of p16 NIK4ain HPV-positive cervical carcinomasJ.BMC Cancer,2007,7:47.宮頸癌中p16INK4A蛋白表達的意義楊勝利陜西省渭南市婦幼醫(yī)院【摘要】目的檢測宮頸癌組織中p16NK4A蛋白表達狀況, 探討p16NK4A蛋白與宮頸癌發(fā)生發(fā)展以及臨床病理指標(biāo)的關(guān)系。方法；采用免疫組化法檢測宮頸鱗癌組織中40例, 宮頸上皮內(nèi)瘤病變（CIN）30例，宮頸癌旁正

11、常宮頸組織25例中的p16NK4A表達。結(jié)果p16INK4A在宮頸上皮內(nèi)瘤病變中陽性率86.6%，宮頸鱗癌組織中陽性率均呈100%表達。正常宮頸組織中為陰性。p16NK4A陽性反應(yīng)為細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)呈棕黃色。結(jié)論；p16基因在宮頸癌組織中缺失和突變導(dǎo)致其表達降低,使p16抑癌功能喪失, 特別是在DNA沒有被修復(fù)前過早進入期,造成宮頸上皮細(xì)胞異常增殖和分化失控,使宮頸上皮內(nèi)瘤病變細(xì)胞陽性逐漸增多。導(dǎo)致p16INK4A在子宮頸癌上皮組織全層表達。所以p16INK4A 作為一種免疫組織化學(xué)標(biāo)志物，應(yīng)用于宮頸癌及其上皮內(nèi)瘤病變（CIN）的診斷是很有應(yīng)用前景的?！娟P(guān)鍵詞】宮頸鱗癌；p16NK4A蛋白；免疫

12、組化Significance of p16INK4A expression in cervical carcinomaYANG Sheng-Li (Dapartment of Pathology,Women and Children Hospital, Weinan City, Shaanxi Province 714000,ChinaAbstract: Objective To investigate the expression of the p16NK4A protein in cervical carcinoma, and discuss p16NK4A of cervical car

13、cinogenesis and the relationship between clinicopathological parameters. Method: detected by immunohistochemistry in 40 cases of cervical squamous cell carcinoma, cervical intraepithelial lesion (CIN) 30 cases of cervical cancer and adjacent normal cervical tissue expression of 25 cases of p16NK4A.

14、Results: The expression rate of p16INK4A in cervical intraepithelial lesions was 86.6%, positive rate of cervical squamous cell carcinoma showed the expression of 100%. Normal cervical tissue were negative. p16NK4A positive in the nuclei and cytoplasm stained in brown. Conclusion; p16 gene deletion

15、and mutation in cervical carcinoma lead to reduced expression, so that loss of p16 tumor suppressor function, particularly in the DNA is not repaired before the premature entry into S phase, resulting in cervical epithelial cell proliferation and differentiation of out of control, so that the cervix

16、 intraepithelial lesion-positive cells gradually increased. Lead to p16INK4A in cervical epithelium expression of full thickness. So p16INK4A immunohistochemistry as a marker of cervical carcinoma and intraepithelial lesions (CIN) diagnosis is very promising.Key words: Cervical cancer; p16NK4A prote

17、in; Immunohistochemistry宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤。嚴(yán)重威脅著婦女的健康和生命，尤其是年輕婦女的宮頸癌的患病率逐年上升的趨勢。許多研究表明1、2, 認(rèn)為宮頸癌變與高危型人類乳頭瘤病毒的持續(xù)感染密切相關(guān)。p16NK4A基因產(chǎn)物是細(xì)胞周期素依賴性激酶抑制物,參與了HPV感染引起的宮頸病變持續(xù)性發(fā)展。通過免疫組化法p16NK4A蛋白在宮頸癌及其宮頸癌旁正常宮頸組織的表達,以探討它們與宮頸癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。材料與方法1 材料:收集本院及渭南市中心醫(yī)院2005年1月2008年12月的宮頸標(biāo)本，宮頸鱗癌40例, 宮頸上皮內(nèi)瘤（CIN）30例，宮頸癌旁正常宮頸組織25例, 病

18、理分期按WHO(2003)女性生殖系統(tǒng)腫瘤分類標(biāo)準(zhǔn)進行。患者年齡在2567歲, 中位年齡為41歲。2 方法: 免疫組化染色采用常規(guī)枸櫞酸緩沖液-微波抗原修復(fù)-SP法，p16NK4A鼠抗人單克隆抗體為美國Santa Cruz公司產(chǎn)品，購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司,實驗操作嚴(yán)格按照試劑說明書進行。3 結(jié)果判定: p16NK4A以細(xì)胞核和(或)細(xì)胞漿中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞。以每個高倍視野下陽性染色的癌細(xì)胞數(shù)<5%為陰性(-),6%25%為弱陽性(+),26%50%為明顯陽性(+),>50%為強陽性(+ )。4統(tǒng)計學(xué)分析 用SPSS1310軟件包分析數(shù)據(jù),用V2檢驗。結(jié)果表1 p1

19、6NK4A在正常宮頸組織、宮頸上皮內(nèi)瘤變、宮頸鱗癌組織中表達 表 達 程 度 病變類型 總例數(shù)-陽性率- + + + (%)正常宮頸組織 25 25 0 0 0 0宮頸上皮內(nèi)瘤變 30 4 4 8 14 86.6宮頸鱗癌組織 40 0 2 9 29 1003討論p16基因定位于人染色體9p21區(qū)，所編碼的p16蛋白有132個氨基酸殘基組成，分子量為13.9kDa。其產(chǎn)物p16INK4A蛋白可與cycinD1競爭性結(jié)合細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4（CDK4），特異性地抑制CDK4活性, 當(dāng)p16INK4A基因發(fā)生突變時,致使細(xì)胞過度增殖,特別是在DNA沒有被修復(fù)前過早進入期。造成宮頸上皮細(xì)胞異常增殖

20、和分化失控,在宮頸癌前病變組織中均存在p16INK4A蛋白異常表達。其失活機制以純合子缺失或異常甲基化為主。 宮頸癌的發(fā)生與HPV感染密切相關(guān)2,3 ,p16INK4A與pRb之間存在負(fù)反饋調(diào)節(jié),即pRb限制p16INK4A產(chǎn)物在細(xì)胞內(nèi)濃縮,而HPV E7蛋白使pRb失活,使其對p16INK4A的負(fù)反饋調(diào)節(jié)作用喪失,從而,導(dǎo)致p16INK4A在宮頸癌前病變和宮頸癌中過度表達。本實驗中, p16INK4A在宮頸上皮內(nèi)瘤中陽性率86.6%，宮頸鱗癌、原位癌組織中陽性率均呈100%表達。正常組織(細(xì)胞)中無陽性表達,p16的表達升高與HPV的感染有關(guān)。除宮頸癌外,在與HPV感染有關(guān)的其他部位的腫瘤中

21、,同樣存在p16的高表達4-5,所以推測腫瘤細(xì)胞中p16的高表達可能與HPV的感染有關(guān)。研究結(jié)果表明；p16INK4A表達的強度越高,提示在宮頸病變中, HPV16、18感染與p16INK4A的過度表達呈正相關(guān)關(guān)系。p16INK4A在宮頸上皮內(nèi)瘤病變、宮頸癌的陽性表達表明; p16基因在宮頸癌組織中缺失和突變導(dǎo)致其表達降低,使p16抑癌功能喪失, 特別是在DNA沒有被修復(fù)前過早進入期,造成宮頸上皮細(xì)胞異常增殖和分化失控, 最終與其他致癌因素一起導(dǎo)致宮頸癌的發(fā)生。使宮頸上皮內(nèi)瘤病變細(xì)胞陽性逐漸增多。 因此p16INK4A在子宮頸上皮組織全層表達。所以p16INK4A 作為一種生物標(biāo)志物應(yīng)用于宮頸癌及其癌前病變的篩查和診斷是很有應(yīng)用前景的。參考文獻1 Kalof A N, Cooper K. p16INK4A immunoexpression: surrogate marker of high risk HPV and high grade cervical intraepithelial aphasiaJ.AdvAnatPathol,2006,13(4):190-194.2 Dehn D，Torkko K C, Shroyer K